實(shí)驗(yàn)一植物組織總dna的提取及dna的濃度測定4學(xué)時(shí)-wenkub
2023-02-07 03:51:03 本頁面
【正文】 學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)十一 植物組織總 DNA的提取及 DNA的濃度測定 ? 掌握用 CTAB法提取植物總 DNA的方法和基本原理。 CTAB, SDS等離子型表面活性劑，能溶解細(xì)胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，從而使 DNA得以游離出來。南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心? DNA的吸收光譜峰在 260 nm處，據(jù)計(jì)算，測定此波長下 DNA溶液的 OD值，當(dāng) OD260=1時(shí)，雙鏈 DNA含量約為 50 181。 2% CTAB抽提緩沖溶液，異丙醇 , 氯仿 異戊醇等南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 CTAB法流程圖植物材料 裂解液上層溶液液氮研磨 抽提細(xì)胞裂解 干燥溶解離心洗滌異丙醇沉淀DNA溶液南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心五、實(shí)驗(yàn)方法(1) 2%CTAB抽提緩沖液在 65℃ 水浴中預(yù)熱。l的 75%乙醇及 80 181。南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心稱取樣品，液氮研磨，加入預(yù)熱的 (65℃ ) CTAB及 β巰基乙醇 保溫 1h,期間不停的搖均吸取上清液 ,移至新的離心管中 ,加入等體積氯仿：異戊醇（ 24： 1），輕緩顛倒混勻 ,10000rpm,10min 取上清液，移至新的離心管中 ,加等體積氯仿：異戊醇 ,顛倒混勻 , 10000rpm,10min取上清液，加入 （預(yù)冷），后 4 ℃ /20 ℃ 保溫沉淀10000rpm,10min離心取沉淀， 70%乙醇清洗兩次，吹干用 TE溶解 DNA,然后低溫保存南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 取提取的 DNA溶液 2 181。l蒸餾水至比色杯，進(jìn)行紫外光空白測定，然后倒掉蒸餾水，加入 200 181。（ 3）由于植物細(xì)胞中含有大量的 DNA酶 ，因此，除在抽提液中加入 EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作應(yīng) 迅速 ，以免組織解凍，導(dǎo)致細(xì)胞裂解，釋放出DNA酶，使 DNA降解。 三月 2122:34:0122:34Mar2129Mar211故人江海 別 ，幾度隔山川。 三月 2110:34
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