高效液相色譜-20xx-wenkub
2022-09-13 00:47:12 本頁面
【正文】 色譜中 ， 通過加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動(dòng)相 pH值 ， 抑制 組分解離 ， 增加其 k和 tR， 以達(dá)到改善分離的目的 1） 離子抑制劑： 弱酸 、 弱堿性物質(zhì) pH一定的緩沖溶液 2） k的影響因素：與流動(dòng)相極性有關(guān) ， 還與 pH值有關(guān) ? 選擇流動(dòng)相：應(yīng)同時(shí)考慮極性及 pH值 酸性物質(zhì) ——加入酸 HAc tR↑， k↑ 堿性物質(zhì) ——加入堿 NH339。 A 樣品的 k降低， tR降低 B 樣品的 k增加， tR增加 C 樣品的 k增加， tR降低 D 樣品的 k降低， tR增加 例題 在正相色譜中，若適當(dāng)增大流動(dòng)相極性， 則（ ）。方法如下： 準(zhǔn)確配制 1 mg/mL濃度的蘆丁對(duì)照溶液和對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照溶液，精取蘆丁對(duì)照溶液 mL、 mL、 mL、 mL、 mL，分別置于 25 mL容量瓶中，同時(shí)各加入內(nèi)標(biāo)溶液 mL，定容。精取 mL于 25 mL容量瓶中，同時(shí)加入內(nèi)標(biāo)溶液 mL，定容。 。 12121 11 ??????????????? ?? ??? ?? ??niniiininiiiniiixxnyxyxnb0 3 1 nxbyaniinii ??????cAAsi ??? 3 1 mLmgAAc si/2 9 0 3 1 0 3 1 ?????測(cè)mLmgc /2510100 ＝＝標(biāo) ?%% ＝＝標(biāo)測(cè) ???ccw本章小結(jié)： 掌握高效液相色譜的速率理論表達(dá)式，并比較與 GC的異同； 掌握液液分配色譜中化學(xué)鍵合相的特點(diǎn)及分類； 掌握 HPLC儀器組成和主要部件的特點(diǎn)； 熟悉 HPLC的常用分析模式及色譜條件； 熟悉 HPLC中分離度的影響因素式及分析條件的選擇 習(xí)題與思考題 ? 思考題 P306~307 8。得蘆丁色譜峰面積和內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的平均值分別為 、 、 、 。 A 增加流動(dòng)相中甲醇的比例 B 增加流動(dòng)相中的水的比例 C 流動(dòng)相中加人少量 HAc D 流動(dòng)相中加人少量的氨水 例題 在液相色譜中，常用作固定相又可用作鍵 合相基體的物質(zhì)是（ ）。ttVVKVCVCWWk Rmsmmssms ??????。┑呐浔龋ㄊ苤鶞赜绊戄^：調(diào)整流動(dòng)相和固定相k續(xù)前 2． 對(duì)流動(dòng)相的要求： 1） 與固定液不反應(yīng) 2） 對(duì)樣品有良好溶解度 k=1~10 k=2~5 最理想的 3） 與檢測(cè)器匹配： UV（ 常用 ， 測(cè)定波長(zhǎng)應(yīng)大于溶劑的截止波長(zhǎng) ） 熒光 ， 電化學(xué) 4） 使用粘度小 、 純度高的流動(dòng)相 （ 甲醇 ， 乙腈 ） 使用前過濾 、 脫氣 續(xù)前 3．洗脫方式 1） 等度洗脫 （ 恒組成溶劑洗脫 ） 以固定配比的溶劑系統(tǒng)洗脫組分 （ 一個(gè)泵 ） 類似 GC的等溫度洗脫 2） 梯度洗脫： 在一定分析周期內(nèi)不斷變換流動(dòng)相的種類和比例 即不斷改變其極性 （ 兩個(gè)泵 ） 適于分析極性差別較大的復(fù)雜組分 類似 GC的程序升溫 （ 沸程較長(zhǎng)樣品 ） 圖示 第五節(jié) 高效液相色譜儀 HPLC 儀器示意圖 HPLC的基本流程圖 流 動(dòng) 相 泵 色 譜 柱 檢測(cè) 器 泵 液 分離 檢測(cè) 記錄 進(jìn)樣閥 進(jìn)樣 1． 泵 ： 恒壓泵：流量精度不穩(wěn) 恒流泵：常用 2． 進(jìn)樣裝置 1） 隔膜進(jìn)樣 （ 高分子有機(jī)硅膠墊 →進(jìn)樣室 ） GC系統(tǒng)壓力較小 ， 可以 HPLC系統(tǒng)壓力太大 ， 必須停泵進(jìn)樣 （ 早期 ） 2） 閥進(jìn)樣：不必停泵 ， 六通閥 開始分析 廢 液 樣 品 淋洗液 至分離柱 進(jìn)樣閥 樣 品 裝 樣 廢 液
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