分子生物學(xué)考點(diǎn)答案-wenkub
2023-07-12 13:23:58 本頁(yè)面
【正文】 苷激酶簡(jiǎn)稱胸苷激酶（thymidine Kinase,TK）在所有真核細(xì)胞中都有表達(dá), 是嘧啶生物合成補(bǔ)救代謝途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶, 它可催化胸苷磷酸化轉(zhuǎn)變成為dTMP, 繼續(xù)磷酸化生成dTTP, 參與DNA的生物合成。28反式作用因子 ：反式作用因子是一組能直接或間接地與DNA的順式作用元件特定序列結(jié)合，發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的核內(nèi)非組蛋白，即DNA結(jié)合蛋白（DBP），DBP又稱轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor,TF）分通用轉(zhuǎn)錄因子及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子兩大類。RNA聚合酶通過(guò)與一系列組分構(gòu)成動(dòng)態(tài)復(fù)合體，并以DNA序列為遺傳信息模板，催化合成序列互補(bǔ)的RNA，包括轉(zhuǎn)錄起始、延伸、終止等過(guò)程。它是轉(zhuǎn)錄物被剪除掉的相應(yīng)DNA分子。21PCR：聚合酶鏈反應(yīng)，以DNA變性復(fù)制的某些特性為原理，以目的DNA片段為模板, 利用酶促反應(yīng)（Taq酶），在特定引物的引導(dǎo)下，將加入的4種dNTP由引物沿模板從5’→3’按堿基配對(duì)原則, 形成與模板DNA互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈, 新合成的鏈又可作為下一輪循環(huán)的模板。其起始表達(dá)作用AUG＞GUG。當(dāng)啟動(dòng)子與全酶結(jié)合后可在+1轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)開始轉(zhuǎn)錄。11cDNA文庫(kù)：以mRNA為模板在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下將形成的互補(bǔ)DNA（cDNA ）建立基因文庫(kù)（gene library）12轉(zhuǎn)染：病毒（含噬菌體）DNA及其重組子DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞（或細(xì)菌）的過(guò)程稱轉(zhuǎn)染。8Cos位點(diǎn)（Cohesiveend site）： λDNA為線狀雙鏈分子，兩端各有幾個(gè)堿基的單鏈互補(bǔ)粘性末端，通過(guò)粘性末端的互補(bǔ)作用形成雙鏈環(huán)形DNA。7COS質(zhì)粒，粘性質(zhì)粒（Cosmid）帶有λ噬菌體的Cos位點(diǎn)和整個(gè)pBR322的DNA順序。4假基因：在珠蛋白基因簇（gene cluster）各片斷核苷酸序列分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，除了有正常的功能基因之外，還有功能失活的特殊序列片斷，它不能行使表達(dá)功能。1移動(dòng)基因：又叫轉(zhuǎn)位因子（transposable elements）,由于它可以在染色體基因組上移動(dòng)，甚至可在不同染色體間躍遷，故又稱跳躍基因（jumping gene）。該類無(wú)表達(dá)功能的畸變核苷酸基因序列片斷，稱為假基5同尾酶：有一些限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別的堿基順序不完全恒定，即識(shí)別順序不同，但酶切后產(chǎn)生同樣黏性末端的兩種酶稱為同尾酶，如BamHⅠ和Bgl Ⅱ。經(jīng)感染進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞以后，它就好象質(zhì)粒那樣在細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制。這種由粘末端結(jié)合形成的雙鏈區(qū)段即Cos位點(diǎn)。13轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為媒介，將外源DNA導(dǎo)入細(xì)菌的過(guò)程稱轉(zhuǎn)導(dǎo)。16 終止子：位于一個(gè)基因編碼區(qū)下游提供終止信號(hào)的DNA序列，可以被RNA聚合酶識(shí)別并發(fā)出停止mRNA合成的信號(hào)。18終止密碼子：有三個(gè)密碼子（UAA, UAG，UGA），為終止密碼子，只表示鏈的終止，不表達(dá)氨基酸。經(jīng)2530個(gè)循環(huán)產(chǎn)物呈 2n指數(shù)擴(kuò)增，由pg—μg（紫外可見(jiàn)），可獲得基因片段。24Exon：即表達(dá)子（編碼序列），與原核的蛋白質(zhì)編碼基因相比，真核蛋白質(zhì)編碼基因最主要的特點(diǎn)是其轉(zhuǎn)錄區(qū)的編碼序列是間斷的不聯(lián)系的，其中編碼氨基酸的序列叫表達(dá)子。 26翻譯(translation): 在多種因子輔助下，細(xì)胞內(nèi)以mRNA模板，通過(guò)tRNA識(shí)別該mRNA的三聯(lián)體密碼子和轉(zhuǎn)移相應(yīng)氨基酸，進(jìn)而按照模板mRNA信息依次連續(xù)合成蛋白質(zhì)肽鏈的過(guò)程?；虮磉_(dá)的組織特異性及細(xì)胞周期特異性受上述元件和因子的相互作用所決定。33亮氨酸拉鏈：存在與蛋白C末端，—螺旋形成的對(duì)稱二聚體，約為30個(gè)氨基酸，每?jī)蓚€(gè)亮氨酸之間隔有六個(gè)氨基酸，于是每?jī)扇β菪陀幸粋€(gè)亮氨酸，排成一排，從而在2個(gè)α螺旋的蛋白分子之間形成一條拉鏈。有些錯(cuò)義突變嚴(yán)重影響到蛋白質(zhì)活性甚至完全失去活性，從而影響了表型。若是發(fā)生在基因DNA的3’末端處, 它所表達(dá)產(chǎn)生的多肽常有一定活性或有部分活性, 這種突變又稱為滲漏變型（leaky mutation）?！?1重組病毒載體：以SV40病毒為基礎(chǔ)，經(jīng)設(shè)計(jì)改造后的克隆載體。其表達(dá)系統(tǒng)可以是酵母，也可以是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，若無(wú)需糖基化的多肽疫苗甚至可在大腸桿菌等原核細(xì)胞中表達(dá)。即使致病基因的突變序列糾正為正常序列（用堿基點(diǎn)突變技術(shù)）。48轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：就是把外源性目的基因?qū)雱?dòng)物的受精卵或其囊胚細(xì)胞中，后改用注入受精卵的任何一個(gè)前核，并在細(xì)胞基因組中穩(wěn)定整合，再將合格的重組受精卵或囊胚細(xì)胞篩選出來(lái)，采用借腹懷孕法寄養(yǎng)在雌性動(dòng)物（foster mother）的子宮內(nèi), 使之發(fā)育成具表達(dá)目的基因的胚胎動(dòng)物, 并能傳給下一代。發(fā)育早期的動(dòng)物胚胎細(xì)胞，或成年動(dòng)物的體細(xì)胞，經(jīng)顯微手術(shù)移植到去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中之后，在適當(dāng)?shù)臈l件下，可以重新發(fā)育成正常胚胎。50基因敲除：是向正常生物個(gè)體內(nèi)引入某個(gè)突變基因位點(diǎn)而選擇性地使某特定基因功能失活的技術(shù)，可培養(yǎng)出靶向性剔除某基因的小鼠，而導(dǎo)致行為特性改變。54RTPCR：即逆轉(zhuǎn)錄PCR，先在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下以mRNA為模板合成DNA,再以cDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。1 什么叫做基因？何謂基因的新概念？基因的主要功能是什么?答：基因就是指編碼有功能蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA分子所必須的全部核酸序列。原核生物必須有相應(yīng)的原核RNA聚合酶可識(shí)別原核細(xì)胞的啟動(dòng)子, 以催化RNA的合成。答：DNA是一反向平行的互補(bǔ)雙鏈結(jié)構(gòu)，DNA是右手螺旋結(jié)構(gòu)。它是發(fā)現(xiàn)新基因和研究基因功能的工具。 ⑶DNA片斷與載體的連接包裝 常用載體：粘性質(zhì)粒 λ噬菌體 酵母人工染色體①基因組DNA +粘性質(zhì)?！亟MDNA——轉(zhuǎn)化細(xì)菌——菌落 ②基因組DNA +λ噬菌體——重組DNA—包裝成噬菌體——感染細(xì)菌——噬菌斑1個(gè)克隆含有基因組的某個(gè)片段，整個(gè)克隆群體就包含基因組的全部基因片段總和。III型限制性內(nèi)切酶同時(shí)具有修飾及認(rèn)知切割的作用，聚丙烯酰胺凝膠能把長(zhǎng)度只差一個(gè)核苷酸的單鏈DNA分子區(qū)分開，這意味著在長(zhǎng)101500個(gè)核苷酸的范圍內(nèi)，所有分子經(jīng)電泳后可
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