【正文】 相 異 點(diǎn) 小 鼠 大 鼠 兔 貓 狗 豬 老 齡肝變化 脾臟 ， 老齡胰變化 ， 老齡脾變化 脾臟血管 ， 脾臟 ， 免疫 ， 神經(jīng)分布 脾臟血管 ， 蝶骨竇 ， 表皮 ， 鎖骨 ，硬 膜外 ， 脂肪分布 ， 鼓膜張肌 垂體血管 ， 腎動(dòng)脈 ， 脾臟 ， 脾臟血管 ， 蝶骨竇 ， 腎表血管 ， 肝臟 ， 表皮核酸代謝 ， 腎上腺神經(jīng)分布 ， 精神變化 心血管分支 ， 紅細(xì)胞成熟 ， 視網(wǎng)膜血管 ， 胃腸道 ， 肝臟 ， 牙齒 ， 腎上腺 ， 皮膚 ， 雄性尿道 肝臟 ， 脾臟 （ 雄比雌大 50%） ， 無汗腺 網(wǎng)膜循環(huán) ， 肝臟循環(huán) 、 無膽囊 、 汗腺 肝臟 ， 汗腺 ， 細(xì)支氣管 ， 肺 脾臟 ， 對(duì)異種蛋白的反應(yīng) ， 汗腺 ， 喉部中 隔 ， 性索的發(fā)育 ， 睡眠 ， 熱調(diào)節(jié) 腸道循環(huán) ， 網(wǎng)膜循環(huán) ， 腎動(dòng)脈 ， 胰管 ， 熱調(diào)節(jié) ， 汗腺 ， 膈 ， 喉神經(jīng) ， 睡眠 脾臟 ， 肝臟 ， 汗腺 ， 丙種球蛋白 (新生 ) 標(biāo)準(zhǔn)化原則 ?選擇與研究內(nèi)容相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。第八章 醫(yī)學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)動(dòng)物的選擇及應(yīng)用 如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn) —— 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù) 田楓 “I’m so proud! All of my kids are going into research” 田楓 主要內(nèi)容 ? 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 ? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型 ? 影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的因素 ? 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù) ? 如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn) ?動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是根據(jù)研究目的，恰當(dāng)?shù)剡x用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種、品系，進(jìn)行各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察和記錄動(dòng)物的反應(yīng)過程或反應(yīng)結(jié)果，以探討或檢驗(yàn)生命科學(xué)中未知因素的一種活動(dòng)。 ?標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物系指經(jīng)遺傳學(xué)、微生物學(xué)、環(huán)境及營養(yǎng)控制而繁育的動(dòng)物。 經(jīng)濟(jì)性原則 無菌兔 人類疾病動(dòng)物模型 What is the Animal Model? ? an animal model in which normative biology or behavior can be studied, or in which a spontaneous or induced pathological process can be investigated, and in which the phenomenon in one or more respects resembles the same phenomenon in humans or other species of animal. ?醫(yī)學(xué)研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象和相關(guān)材料。 Transplant tumor animal model 指將動(dòng)物或人體腫瘤移植同種或異種動(dòng)物 連續(xù)傳代而培養(yǎng)出的模型。 誘癌物 放射線局部照射、化學(xué)致癌物（ 烷化劑、亞硝胺類、芳香胺類 ）、生物毒素（ 黃曲酶毒素 ）、細(xì)菌（ 幽門螺桿菌 ）等。 有些腫瘤需要接種在特定的部位 （ 對(duì)雌激素依賴的人乳腺癌MCF7 細(xì)胞系 ， 接種乳腺脂肪墊才能成活 ） 。 血小板活性因子 (PAF)誘發(fā) ： 目前已知的唯一能引起氣道高反應(yīng)性炎癥介質(zhì)。 ? 手術(shù)切除胰腺的大部分或全部，并給予高糖飲食刺激，引起繼發(fā)性永久性糖尿病。 ?1968年 ， Pantelouris解剖發(fā)現(xiàn)裸鼠失去了 正常的胸腺 。 ?裸鼠自發(fā)現(xiàn)以來 ， 廣泛應(yīng)用于腫瘤學(xué) 、 免疫學(xué)和病毒學(xué)等多個(gè)學(xué)科的研究 。 Other Immune Deficiency Animal NZBW F1 野生色 WBB6F1—W/WV （ WB—W/+♀ XC5TBL/6—WV/+） F1 Anaemia, gastric ulcer， bone marrow failure model White,black eye 動(dòng)物模型復(fù)制原則 ? 相似性 ? 可重復(fù)性 ? 可靠性 ? 適用性和可控性 ? 易行性和經(jīng)濟(jì)性 影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的因素 ? R=(A+B+C) D + E ? R:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的總反應(yīng) ? A:動(dòng)物種間的共同反應(yīng) ? B:動(dòng)物品種，品系特有的反應(yīng) ? C:動(dòng)物的個(gè)體反應(yīng) ? D:環(huán)境因素（包括實(shí)驗(yàn)處理） ? E:實(shí)驗(yàn)誤差 ? A,B,C是由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身的遺傳因素決定的，被選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物， 在嚴(yán)格控制環(huán)境因素 D或改變其中某一條件后就可能得到一個(gè)理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 R。 環(huán)境因素的影響 ? 氣候因素：溫度、濕度、氣流、風(fēng)速等； ? 理化因素：氧、二氧化碳、粉塵、臭味、噪音、照度、殺蟲劑、消毒劑、有害化學(xué)物質(zhì)等； ? 居住因素：房屋、籠具、墊料等； ? 生物因素： ? 同種生物因素：社會(huì)地位、勢力范圍、咬斗和飼養(yǎng)密度等 ? 異種生物因素：微生物、人和其它動(dòng)物的關(guān)系 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境因素的分類 ?最適宜溫度 2024℃ ，溫差： 3或 4℃ 氣候因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 溫 度 不同種類動(dòng)物“熱平衡”區(qū)的范圍不同。 因此，環(huán)境溫度高于熱平衡區(qū)比低于它使動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)更強(qiáng)烈。國家標(biāo)準(zhǔn)： 40%70% 氣候因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 空氣相對(duì)濕度（ Relative air humidity） 高濕： ?80%85%人和動(dòng)物都將停止生長； ?高濕容易引起代謝紊亂； ?利于微生物滋生； ?氨易溶于水，濕度高，室內(nèi)氨濃度增加?；\具中的氣體理想情況應(yīng)該是盡可能地與新鮮空氣接近，符合空氣中氣體組分的正確混合 (nitrogen, %。 氣候因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 光照條件 （ Lighting Conditions） 光照對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生理功能有著重要的調(diào)節(jié)作用，研究得最多的是對(duì)動(dòng)物生理活性和繁殖性能的影響。 大鼠、小鼠和家兔是夜行性動(dòng)物，強(qiáng)光對(duì)它們是有害的。強(qiáng)光可使雄性大鼠腎上腺的重量增加，給小鼠超過 500 lux的光照，會(huì)導(dǎo)致哺乳母鼠忽視其新生幼仔和它們的死亡。引起動(dòng)物緊張，導(dǎo)致不安和騷動(dòng)。 此外，在塑料和金屬籠具中動(dòng)物的反應(yīng)也會(huì)不同。 動(dòng)物每天 24小時(shí)與墊料密切接觸，墊料質(zhì)量對(duì)動(dòng)物有著巨大影響。 墊料的物理?xiàng)l件也可能影響試驗(yàn) ， 如 ， 小的粒子和灰塵可刺激粘膜 ， 鋒利的顆?？纱唐破つw 。 社會(huì)學(xué)因素 （ Sociological factors） 生物因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 我們提供動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境、標(biāo)準(zhǔn)的飼料、清潔的水、清潔的墊料，并遠(yuǎn)離它們自然的天敵。 群養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物會(huì)形成社會(huì)層級(jí)，如果從群體中移出一個(gè)動(dòng)物，則社會(huì)結(jié)構(gòu)將被擾亂，需要進(jìn)行調(diào)整，這個(gè)調(diào)整將影響動(dòng)物的激素系統(tǒng)和影響實(shí)驗(yàn)。 粗暴的捉拿操作和新的員工可再激活動(dòng)物逃跑的本能 ， 并可能影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果 。老鼠們反復(fù)地做著同一動(dòng)作。 勢力范圍 Male mice will fight when first comingled in a cage, and they need to be observed very closely during this time of establishing a social dominance hierarchy within the group. Weak and nonaggressive animals might be injured or killed if not removed from the cage. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)備和試劑同樣重要 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響 生物學(xué)穩(wěn)定性 ? 動(dòng)物具有保持其主要機(jī)體功能在一定界限內(nèi)工作的體內(nèi)固有機(jī)制，這些機(jī)制在外界條件可能改變機(jī)體功能的情況下開始發(fā)揮作用 ,稱為生物學(xué)穩(wěn)定性。 ?選用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)應(yīng)注意到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人之間的年齡對(duì)應(yīng)，以便進(jìn)行分析和比較。 2. 對(duì)生長發(fā)育的影響 ? 動(dòng)物生長發(fā)育常為實(shí)驗(yàn)的衡量指標(biāo)。 4. 對(duì)免疫功能的影響 ? VitA不足，免疫功能明顯下降。 2. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)的營養(yǎng) 動(dòng)物體內(nèi)各營養(yǎng)素間的復(fù)雜關(guān)系對(duì)營養(yǎng)研究至關(guān)重要。 細(xì)菌感染的影響 ? 人畜共患病原菌和動(dòng)物致病菌 ? 條件性致病菌 ? 正常菌群 ? 真菌感染對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響 寄生蟲感染的影響 ? 掠奪宿主的營養(yǎng) ? 體外寄生蟲對(duì)動(dòng)物的騷擾 ? 對(duì)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生機(jī)械性損傷 ? 對(duì)宿主產(chǎn)生毒性反應(yīng) ? 對(duì)宿主生理生化和免疫系統(tǒng)的影響 ? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 ? 實(shí)驗(yàn)季節(jié) ? 晝夜過程 ? 麻醉 ? 手術(shù)技巧 ? 實(shí)驗(yàn)藥物 ? 對(duì)照問題 技術(shù)因素的影響 ?許多生物學(xué)功能的活性是周期性的。 ?例如，由于在一天中的不同時(shí)間給予動(dòng)物，一種藥物的陽性和陰性（毒性的）反應(yīng)可能發(fā)生變化。玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽閱讀器的最佳閱讀距離為 712CM， 不要太近或太遠(yuǎn) 動(dòng)物體內(nèi)色素標(biāo)簽 ? 熒光標(biāo)記是不易溶于水，經(jīng)過分解的植物材料，性能穩(wěn)定，與蛋白質(zhì)可以保持良好的平衡。 ? 一般可按下列比例換算：人用藥量為 1；小鼠、大鼠為 2550；豚鼠、家兔為 1520；犬、貓為 510。 ? 導(dǎo)尿法：適用于雄性兔、犬等。 。 。 Euthanasia (cont.)Rodents ? Acceptable – Inhalant anesthetic overdose – CO – CO2 – Barbiturate overdose – Microwave irraditation ? Conditionally acceptable – N2 (sedated or anesthetized) – Argon – Cervical dislocation (BW200g) – Decapitation Euthanasia (cont.)Unacceptable ? Humane concerns – Depression – Drowning – Strychnine ? For use in conscious animals – Exsanguination – Rapid freezing – Air embolism ? Sole method – Nicotine – Magnesium sulfate – Potassium chloride – All curariform agents – Stunning ? Hazardous to humans – Chloroform – Cyanide 常用脊椎動(dòng)物安樂死方法 小于125g嚙齒動(dòng)物 125g—1kg嚙齒動(dòng)物 /兔 15kg嚙齒動(dòng)物 /兔 狗 貓 非人靈長類 反芻動(dòng)物、馬、豬 二氧化碳 O O O N N N NX Barbiturate 注射液，靜脈注射 O O O O O O O Barbiturate 注射液，腹腔注射 O O O N