【正文】 標(biāo)準(zhǔn)化原則 ?選擇與研究?jī)?nèi)容相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。 規(guī)格化原則 ?年齡 年齡不同，其生物學(xué)特性往往不同，一般選性成熟后的青壯年動(dòng)物。太老的動(dòng)物的各器官老化，代謝功能下降，只在老年醫(yī)學(xué)研究中使用； ?體重 在正常營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和飼養(yǎng)條件下，體重與年齡有一定的相關(guān)性； ?性別 許多實(shí)驗(yàn)證明，同一品種（系）不同性別的動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)不一致。 Classification of Animal Models According to cause of the developing ?Spontaneous (geic) disease models （自發(fā)） ?Induced (experimental) disease models （誘發(fā)） ?Transgenic disease models （轉(zhuǎn)基因） ?Negative disease models （抗疾?。? Spontaneous (geic) Disease Models ?These models of human disease use naturally occurring geic variants (mutants). Many hundreds of strains and stocks with inherited disorders modeling similar conditions in humans have been characterized and conserved. ?指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)任何人工處置，在自然條件下動(dòng)物自然發(fā)生、或由于基因突變的異常表現(xiàn)通過(guò)遺傳育種保留下來(lái)的動(dòng)物模型。 Tumor Animal Model Induced tumor animal model 使用致癌因素在實(shí)驗(yàn)條件下誘發(fā)動(dòng)物發(fā)生腫瘤的動(dòng)物模型。 Details of Induced disease models Methods 原位誘發(fā)： 指將致癌物直接與動(dòng)物靶組織或靶器官接觸而誘發(fā)該組織或器官發(fā)生腫瘤，接觸方法可通過(guò)涂抹、灌注、喂養(yǎng)或埋置等 。 異位誘發(fā)腫瘤具有易于觀察和取材的優(yōu)點(diǎn)。 Induced Tumor Animal Model Methods 實(shí)體瘤移植 腫瘤細(xì)胞皮下接種 —— 710d處死荷瘤動(dòng)物 —— 選擇生長(zhǎng)良好、無(wú)壞死液化的瘤組織 —— 23mm3+生理鹽水或其它營(yíng)養(yǎng)液 —— 無(wú)菌套管針抽吸 ——接種同種受體動(dòng)物右前腋窩皮下。 Transplant Tumor Animal Model ? 腫瘤組織： 惡性程度：惡性和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)瘤成功率較高 種類：細(xì)胞系成功率 活檢標(biāo)本 來(lái)源：淋巴瘤 、 骨腫瘤等難獲成功 部位：腫瘤塊的外周部接種易成活 ? 裸鼠 ： 遺傳背景：胰腺癌接種 BALB/c 成功 ， NIH系失敗 性別：雌激素依賴性腫瘤接種雄鼠生長(zhǎng)慢 鼠齡： 46周 動(dòng)物健康狀態(tài) Affecting Factor of Transplant Tumor Model ? 接種部位： 原位移植成功率高 ， 移植腫瘤與人類原發(fā)瘤相似 。 ? 環(huán)境： 細(xì)菌病毒可以影響 NK細(xì)胞活性；接種時(shí)間越早越好 ， 注意無(wú)菌操作 。當(dāng)豚鼠再次接觸此抗原時(shí)， IgE介導(dǎo)發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，使細(xì)胞脫顆粒，釋放出活性化學(xué)物質(zhì)如組胺、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子等，作用于支氣管引起氣道高反應(yīng)致哮喘。 Diabetes Model ? 注射致高血糖因子 ， 如生長(zhǎng)激素 、 胰高糖素 、 糖皮質(zhì)激素以及兒茶酚胺類激素等 。 ? 注射生物及生物制品引起 β 細(xì)胞破壞，如鼠腦炎、心肌炎病毒 M型變異可誘發(fā)若干品系的成年小鼠糖尿病。 Assessment of Induced Model ?Quantity enough（數(shù)量足夠） ?Condition accord（條件一致） ?Results of animal experiments are relatively,which must be verified on human.（動(dòng)物試驗(yàn)的結(jié)果是相對(duì)的，必須在人體上得到驗(yàn)證） Immunodeficiency Animal Model ?Animals is certain or some immunodeficiency because of spontaneous or artificial methods. ?由于先天遺傳突變或用人工方法造成 免疫系統(tǒng)某種或多種成分缺陷的動(dòng)物。 ?1966年證實(shí)是由于第 11對(duì)染色體基因突變所致 。 ?1969年 Rygaard首先將 人結(jié)腸腺癌 移植裸小鼠獲得成功 。 和純系 BALB/C， C3H， C57BL/6小鼠 交 配 ， 不 斷 選 育 ， 獲 得 了 三 種 近 交 系 鼠（ Inbred Nude Mice） 新種 。 Nude mice thymus Normal mice thymus KM Hairless Mice A: Heterozygous mice at 10 months. B, C: Homozygous mice at 10 months. The mutant mouse is covered with sparse hair, and cannot open its eyes normally Scd1abXy mutation Blymphocyte Deficiency Animal CBA/N B cell function is low Severe Combined Immune Deficiency Animal SCID mice Coat Color: Albino Feature of SCID ? The does exhibit extremely low levels of Ig in ~20% of the mice at 12 weeks of age. ? The incidence of Ig will increase as the mice age. Despite this ―leakiness‖ （滲漏） 39。 SHO（ SCID Hairless Outbred） ? 人們一直想讓 SCID小鼠擁有裸鼠無(wú)毛的優(yōu)點(diǎn) ? Charles River Lab的研究人員自 2022年開(kāi)始就著手培育無(wú)毛的 SCID小鼠，他們通過(guò) Crl:HAPrkdcscid和 Crl:SKH1Hrhr這兩個(gè)品系雜交，最終在 2022年得到了兩條染色體上均帶有 SCID基因的 無(wú)毛封閉群小鼠模型 SHO（ SCID Hairless Outbred） . ? 2022年 6月，實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)對(duì)比的方法將人前列腺癌細(xì)胞株 PC3分別接種到 SCID和 SHO身上，研究發(fā)現(xiàn)， SHO除去具有與 SCID小鼠相同的腫瘤生長(zhǎng)特性之外，還摒除了 Nu/Nu裸鼠接種 PC3時(shí)出現(xiàn)的皮膚潰瘍現(xiàn)象。 動(dòng)物對(duì)實(shí)驗(yàn)處理的反應(yīng)可用以下公式表示： 影響因素 ?環(huán)境因素對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響 ?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因素對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響 ?營(yíng)養(yǎng)因素對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響 ?病原微生物因素對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響 ?技術(shù)因素對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響 環(huán)境控制的重要性 ? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 幾乎終身被限制在一個(gè)極其有限的環(huán)境范圍內(nèi)生活，這種環(huán)境就成了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物賴以生存的條件。 甚至可以說(shuō)沒(méi)有環(huán)境控制就沒(méi)有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。在熱平衡區(qū)，動(dòng)物呈基礎(chǔ)代謝率。 如果環(huán)境溫度高于熱平衡區(qū)溫度的上限，代謝率也將增長(zhǎng)，這不是防御機(jī)制， 而是由于環(huán)境溫度導(dǎo)致體溫升高，升高的體溫提高了代謝率。 LD50值在不同的房間溫度條件下相差了 35倍， LD50值在動(dòng)物熱穩(wěn)定區(qū)內(nèi)最高，表明動(dòng)物在這時(shí)對(duì)該試驗(yàn)物質(zhì)的耐受性最強(qiáng)。 氣候因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 空氣相對(duì)濕度（ Relative air humidity） 濕度是指空氣中濕氣的含量，常用相對(duì)濕度來(lái)表示，即實(shí)際空氣的濕度與在同一溫度下達(dá)到飽和狀況時(shí)的濕度之比值。 氣候因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 空氣相對(duì)濕度（ Relative air humidity） 低濕： ? 至 40%，小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠繁殖力下降； ? 低于 30%停止繁殖，出現(xiàn)疾病癥狀，在大鼠會(huì)出現(xiàn)一種特殊的癥狀稱為環(huán)尾癥； ? 動(dòng)物的上呼吸道承受干燥和刺激，可能會(huì)出現(xiàn)一系列臨床癥狀； ? 墊料可比正常情況下產(chǎn)生更多的灰塵，堵塞鼻孔； ? 增加靜電產(chǎn)生，泌乳動(dòng)物在幼仔允吸時(shí)會(huì)有電擊感，這會(huì)導(dǎo)致她們將幼子咬死。其實(shí)，最值得關(guān)注的是籠具中的氣體或微氣候，這與籠具設(shè)計(jì)、籠具通風(fēng)、墊料材料和房間的通風(fēng)換氣密切相關(guān)。 oxygen, %。 and ammonia and other gasses, %)。 光照周期：一般情況下，推薦 12小時(shí)照明 12小時(shí)黑暗。 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 光照條件 （ Lighting Conditions） 光照強(qiáng)度 理想的情況是房間所有動(dòng)物在籠具水平擁有相等的光照強(qiáng)度。當(dāng)籠具上下排列時(shí)，動(dòng)物所受的光照強(qiáng)度會(huì)有很大差別。 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 光照條件 （ Lighting Conditions） 光照強(qiáng)度 照度超過(guò) 60 lux就可造成白化動(dòng)物視網(wǎng)膜損傷。相反，一些草食動(dòng)物，例如，山羊如果沒(méi)有陽(yáng)光的照射，將會(huì)發(fā)生 Vitamin D3的缺乏。 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的聽(tīng)力均超過(guò)人類，人類的聽(tīng)力范圍是 15000～ 20,000 Hz，而大鼠可測(cè)聲音高至 100,000 Hz. 噪聲（ Noise） 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 噪聲（ Noise） 噪音是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)的常見(jiàn)原因。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) ≤ 60 dB ? 超過(guò) 100dB的噪聲，能夠引起某些品系的小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠發(fā)生抽搐； ? 能夠引起動(dòng)物心跳、呼吸次數(shù)增加，引起大鼠血液甘油三酯水平升高和血壓升高，而血糖降低； 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 噪聲（ Noise） ? 豚鼠對(duì)噪音尤其敏感，超過(guò) 100dB的噪聲就能損害 豚鼠的耳蝸； ? 突然的噪音，可引起大鼠血清皮質(zhì)酮含量增高 100200%； ? 噪音應(yīng)激可引起恐慌，可導(dǎo)致母畜殺死幼仔； ? 急性噪聲或特殊頻率的慢性噪聲可導(dǎo)致產(chǎn)仔率下降和動(dòng)物吃掉幼仔。 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 有害氣體 動(dòng)物設(shè)施建筑 動(dòng)物設(shè)施設(shè)備 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 防止外部污染 Isolation 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 防止公害外 泄 containment 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 我們難以使房間內(nèi)籠具的環(huán)境條件完全相等，因此，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)在籠架中自由的分布，尤其對(duì)照組動(dòng)物和給藥組動(dòng)物在籠架的位置應(yīng)是自由分布的。 籠具（ Cages） 籠具必須易于清洗和足夠堅(jiān)固。 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 墊料必須是吸濕性的，鋸末和刨花是最常用的墊料，以紙或玉米芯為主的墊料也見(jiàn)應(yīng)用。某些木材，如柚木和桃花心木本身有毒，有一些木材釋放出化學(xué)物質(zhì)可能影響動(dòng)物的酶系統(tǒng)。 墊料（ Bedding） 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 在生產(chǎn)和儲(chǔ)存過(guò)程中 ， 野生嚙齒類動(dòng)物可進(jìn)入和污染墊料 。 墊料（ Bedding） 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物