【正文】 過(guò)濾 5ml 試劑 水 condition 以 250ml/min 進(jìn)樣 抽 干 水分 4ml四 氯 甲烷 elute 抽 干 水分 干燥后 以 丙 醇 溶解 GC/NPD 5ml甲醇 SPE小柱的適用范圍 EnvirElut174。 ?非極性柱有： C1 C C CH、 CN、 PH ?陽(yáng)離子交換柱： SCX， PRS， CBA ?陰離子交換柱： SAX， PSA， NH2， DEA ? 共價(jià)型柱： PBA 根據(jù)待測(cè)物質(zhì)性質(zhì)，樣本種類，選用合適的微型柱和淋洗劑。 固相萃取產(chǎn)品對(duì)樣品的萃取，濃縮和凈化都非常好。使用固相微萃取法能避免液 液萃取所帶來(lái)的許多問(wèn)題。 四、固相萃取 Solid Phase Extraction SPE 利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附，以與樣品基體及干擾化合物的分離，進(jìn)而或洗脫、或熱解吸進(jìn)樣。 三、液 氣萃取 相當(dāng)于氣體吸收裝置。 5) 萃取液 濃度 ：要使萃取液濃度在萃取部分是最低的，以使樣品中有效物不斷溶出。 ? 液固萃取有兩個(gè)過(guò)程： 1) 欲測(cè)定組分在溶劑中 溶出 2) 組分與溶劑分子相互 擴(kuò)散 液 固萃取的主要影響因素 1) 物料 性質(zhì) ：主要為樣品粒度、含雜質(zhì)情況等 2) 萃取 溫度 ：溫度高有利于提高萃取效率，但也易使雜質(zhì)兩增大。 實(shí)驗(yàn)室里最簡(jiǎn)單的是將固體樣品和萃取劑一起振蕩，而后離心或過(guò)濾分離。鹽濃度太高會(huì)顯著提高水溶液的沸點(diǎn)，引發(fā)一些熱不穩(wěn)定化合物的分解。 影響 SDE萃取效率的主要因素 循環(huán)蒸餾 萃取的 時(shí)間 —— 時(shí)間長(zhǎng)萃取效率相對(duì)高，但對(duì)低沸點(diǎn)化合物時(shí)間過(guò)長(zhǎng)反而會(huì)使萃取率下降，可能是由于低沸點(diǎn)組分會(huì)隨萃取溶劑發(fā)生再次蒸餾，影響了對(duì)新蒸餾出組分的萃取。 冷凝溫度 對(duì)萃取效率也有很大的影響。但要注意對(duì)不穩(wěn)定組分的影響，通?？刂圃谒芤旱姆序v溫度。 同時(shí)蒸餾萃取的基本裝置示意圖 SDE 特點(diǎn)：水蒸氣蒸餾與溶劑萃取二合為一，從而減少了實(shí)驗(yàn)步驟，縮短了分析時(shí)間，節(jié)省了萃取溶劑，而且設(shè)備簡(jiǎn)單。 同時(shí)蒸餾萃取 （ Simultaneous Distillation Extraction， SDE） “同時(shí)蒸餾萃取”是一種提取、分離和富集試樣中揮發(fā)性、半揮發(fā)性成分的較為新穎的方法，其特點(diǎn)是水蒸氣蒸餾與溶劑萃取二合為一，從而減少了實(shí)驗(yàn)步驟，縮短了分析時(shí)間，節(jié)省了萃取溶劑，而且設(shè)備簡(jiǎn)單。其工作原理是含有樣品組分的水蒸汽和萃取溶劑蒸汽在一定的裝置中充分混合，冷凝后兩相充分接觸實(shí)現(xiàn)組分的相轉(zhuǎn)移，且在反復(fù)循環(huán)中實(shí)現(xiàn)高效的萃取。外加電場(chǎng)使萃取溶劑中的水滴運(yùn)動(dòng)、扭曲，進(jìn)而分裂，增大接觸面，使水中有機(jī)物迅速分散到萃取溶劑中。 6. 自動(dòng)液 液萃取 可用于液體易于分散和混合的體系，在小體積樣品瓶中進(jìn)行萃取，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。樣品在該優(yōu)化條件下，以甲醇 /水(70:30)作為流動(dòng)相進(jìn)行 HPLC定性定量分析。 3)隨著樣品溶液在萃取溶劑表面的連續(xù)流動(dòng)，溶液中的分析物不斷被萃取到微滴有機(jī)溶劑中。L溶劑，將微量進(jìn)樣器針頭浸入到水樣中，抽取水樣進(jìn)入針頭至總體積達(dá)到 10181。 方法由 Jeannot/Cantwell于 1996年提出。 二聚物 (dimer)的含量： % 三聚物 (trimer)的含量： % 四聚物 (tetramer)的含量： % 五聚物 (pentamer)的含量： %。 流動(dòng)相流速： 轉(zhuǎn)速： 750r/min 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)： 254nm 固定相保留率： 45% 楊梅苷 (Myricitrin) 虎杖提取物中 白藜蘆醇 的分離 min0 5 10 15 20 25mAU 020406080100120 VWD1 A, Wavelength=303 nm ()No. 24Resveratrol min0 5 10 15 20 25 30mAU 05101520 VWD1 A, Wavelength=303 nm ()ResveratrolNo. 16 HSCCC條件： 溶劑系統(tǒng)：正己烷 乙酸乙酯 乙醇 冰乙酸 水 (1： 4： 2：： 2， V/V) 上相為固定相，下相為流動(dòng)相。5 39。 流動(dòng)相流速： 轉(zhuǎn)速： 800r/min 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)： 280nm H OO HOO HO HO H( ) E CH OO HOOO HO HCOO HO HO H( ) E C GH OO HOO HO HO HO H( ) E G CHPLC純度 ?98% 茶多酚中兒茶素分子的結(jié)構(gòu)修飾 OO HH OO COO HOO HO HO HO HC ( C H 2 ) 1 4 C H 3O7651 0432981 39。 HSCCC與 HPLC的比較 兩法互為補(bǔ)充，其分離效率雖不能與分析型 HPLC相比，但可與制備型相媲美。 高固定相保留率會(huì)大大提高峰的分離度。 螺旋管轉(zhuǎn)速與固定相保留率 螺旋管的旋轉(zhuǎn)速度對(duì)兩相的混合程度具有決定性的影響作用，同時(shí)旋轉(zhuǎn)速度所產(chǎn)生的離心力場(chǎng)對(duì)固定相的保留也具有決定性的影響作用。 (2) 樣品中各組分在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)值范圍為 ?2。 假定各組分在上層相 (UP)和下層相 (LP)的濃度比 (分配系數(shù) ) { CB(UP) / CB(LP) }的大小次序如下： f e d c b a 若上層為流動(dòng)相，下層為固定相，則分離效果為： f e d c b a HSCCC系統(tǒng)示意圖 分析型 半制備型 制備型 HSCCC的優(yōu)點(diǎn) 不存在樣品的不可逆吸附； 樣品可定量回收 。 工作原理 ： 螺旋管作 同步行星式運(yùn)動(dòng) 利用螺旋管柱在行星運(yùn)動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的 離心力 分離原理： 在一纏繞的螺旋空管內(nèi)，注入互不相溶的兩相溶劑中的一相作為固定相，然后作行星運(yùn)動(dòng)；同時(shí)由恒流泵不斷注入載著樣品的另一相 (流動(dòng)相 )，由于行星運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的離心力場(chǎng)使得固定相保留在螺旋管內(nèi)，流動(dòng)相則不斷穿透固定相；這樣兩相溶劑在螺旋管中實(shí)現(xiàn)高效的接觸、混合、分配和傳遞。 原理上講，可以看成是在一系列的分液漏斗進(jìn)行，樣品被引入到分液漏斗的上層液相，平衡后轉(zhuǎn)入第二 漏斗，然后引入新的上層溶劑相到第一漏斗。 連續(xù)液 液萃取 當(dāng)溶劑的密度 小于 萃取原液時(shí)，套上圖中的小漏斗，并把底部的活塞關(guān)上，溶劑將經(jīng)上出口回流到燒瓶，經(jīng)過(guò)加熱燒瓶，可以使溶劑循環(huán)使用 方法特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn) ：無(wú)需人操作，操作可使用較少的溶劑而得到較高的萃取效率。 一般優(yōu)先選擇低溶解性、易揮發(fā)的溶劑 水溶液 非水有機(jī)溶劑 水溶液 非水有機(jī)溶劑 純水 酸性溶液 堿性溶液 脂肪烴 醇 、 醚 二氯甲烷 、 氯仿 乙酸乙酯等酯類 高鹽 上述兩種或以上混合液 脂肪酮 、 脂肪醇 甲苯 、 二 甲 苯 或組合 萃取結(jié)果評(píng)價(jià)： 單次萃取百分率： 100%WODED V V???反萃時(shí)： 100%OWDED V V???多次萃取百分率： 1 1 0 0 %nWOWVED V V??????? ? ????????提高萃取效率和選擇性的途徑 不同萃取體系對(duì)相應(yīng)條件的要求不同，提高選擇性的方法也不同。同時(shí)希望有選擇性好、穩(wěn)定、易分層、操作安全、環(huán)境友好等特點(diǎn)。 螯合物萃取 ： 萃取劑和被萃取物形成中性溶劑螯合物而進(jìn)入有機(jī)相 (萃取溶劑 )。 溶液濃度太低時(shí) 。 液 液萃取的特點(diǎn) 液 液萃取 分離技術(shù)處理能力大，分離效率高、回收率高，經(jīng)濟(jì)性好，適應(yīng)性強(qiáng)。 親水性強(qiáng)弱的規(guī)律： 1） 凡離子均親水 —— 不能被萃取 2）物質(zhì)含 親水基團(tuán) 越多，其親水性越強(qiáng)； － OH，－ SO3H，－ NH2， NH。 固液萃取 —— 分提?。ǔ樘幔?、固相萃取、固相微萃取等 常規(guī)液 液萃取 液 液萃取 分離技術(shù)處理能力大，分離效率高、回收率高，經(jīng)濟(jì)性好，適應(yīng)性強(qiáng)。 預(yù)處理有很多類型，往往需要綜合利用。而其游離形式能溶于乙醚或乙酸乙脂等有機(jī)溶劑。色譜分析樣品的預(yù)處理技術(shù) 先看一典型例子 瘦肉精分析 瘦肉精 (鹽酸克侖特羅 )是白色或類白色的結(jié)晶性粉末，無(wú)臭，味苦。應(yīng)用這一特點(diǎn)建立一個(gè)較理想的提取過(guò)程。 每步預(yù)處理都涉及回收率，都不能低。 過(guò)程： 兩種互不相溶的溶劑與含被分離組分的試液一起振搖，而后分層。 3） 物質(zhì)含 疏水基團(tuán) 越多，相對(duì)分子量越大，其疏水性越強(qiáng)。主要適用于： 各組分沸點(diǎn)相近或易成共沸物精餾不適用時(shí) 。 溶液中含有溶解或絡(luò)合的無(wú)機(jī)物 。 離子締合物萃?。?被分離物形成絡(luò)陽(yáng)離子或絡(luò)陰離子后與體系中的異電荷離子締合而進(jìn)入有機(jī)相。 萃取溶劑 —— 溶解被分離物質(zhì)與 萃取劑形成的各類物質(zhì)。 對(duì) 螯合物 萃取體系，可通過(guò) ① 改變酸度 —— pH增加 1，Ｍ n＋ 的分配比增加 10n倍 ) ② 提高萃取劑濃度 —— D = Kex[HA]On / [H+]n ③ 選擇合適的萃取溶劑 —— 相似相溶原則 ④ 選擇合適的掩蔽劑 —— 除去干擾離子的影響 ⑤ 利用協(xié)同效應(yīng) —— 多元配合物有協(xié)同效應(yīng) ⑥ 利用共萃取或反萃取 —— 一定的富集和分步處理 ⑦ 改變?cè)貎r(jià)態(tài) —— 減少干擾 連續(xù)液 液萃取 K值比較小或需處理的樣品量大時(shí)，多次萃取不實(shí)際。 缺點(diǎn) ：易揮發(fā)組分要有損失。重復(fù)進(jìn)行即可。樣品中各個(gè)組分依據(jù)它在兩相中的分配系數(shù)的差異實(shí)現(xiàn)分離，以達(dá)到分離的目的。 極大地控制了樣品的失活和變性等問(wèn)題， 樣品不會(huì)遭到破壞 。 (3) 為了保證固定相能實(shí)現(xiàn)足夠高的保留，溶劑系統(tǒng)的兩相分層時(shí)間盡可能小于 30秒。 兩相分布與螺旋管轉(zhuǎn)速的關(guān)系圖： 高表面張力的溶劑系統(tǒng)： 使用 較高的轉(zhuǎn)速 ，以使兩相之間有劇烈的混合而促進(jìn)分配和減少質(zhì)點(diǎn)傳遞的阻力。 溶劑系統(tǒng)的物理特性如表面張力、粘度和兩相之間的密度差與固定相的保留值有密切關(guān)系。 不用固體支撐體，避免了樣品的不可吸附、失活和變性等 有廣泛的龍兩相溶劑供選擇，大大增加了適用范圍 就制備量而言，操作成本低 操作靈活，固定相和流動(dòng)相可互換使用 HSCCC 在分離純化藥用成分的應(yīng)用 生物堿 ：黃柏中的小檗堿和巴馬亭；高烏頭中的刺烏頭堿、小烏頭堿、去乙酰刺烏頭堿，長(zhǎng)春花中的長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春朵靈、長(zhǎng)春花朵靈、瀉花堿，川芎中的川芎嗪等； 黃酮類 ：葛根中的葛根素，木蝴蝶中的黃芩素，黃芩中的黃芩苷，黃芪中的毛蕊異黃酮，銀杏黃酮，大豆異黃酮等； 多酚類 ：綠茶中的兒茶素，虎杖中的白藜蘆醇、白藜蘆醇苷，紅茶中的茶黃素，紅景天苷，金銀花中的綠原酸等； H OO HOO HO HO H( ) E CNO C H 3O C H 3OOO H+小檗堿 黃芩素 OOH OH OO H 醌類 ：大黃中的大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚，虎杖中的花色素 A 、花色素 B 等； 香豆素類 ：羌活中的羌活醇、異前胡醚，補(bǔ)骨脂中的補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素，白芷中的歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素等； 木脂素類 ：厚樸中的厚樸酚，牛蒡子中的牛蒡子苷，五味子中的 ?五味子素、去氧五味子素； 萜類 ：白芍中的芍藥苷，穿心蓮中的穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯，番茄紅素，葉黃素等。2 39。6 39。 流動(dòng)相流速： 轉(zhuǎn)速： 800r/min 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)： 254nm O HO HH OR e s v e r a t r o l石蒜提取物中 加兮他敏 和 力可拉敏 的分離 HSCCC條件： 溶劑系統(tǒng)：正丁醇 碳酸鈉緩沖溶液 (1： 1， V/V) 上相為固定相，下相為流動(dòng)相。 HSCCC條件： 溶劑系統(tǒng)：正己烷 乙酸乙酯 正丁醇 水 (1： 10： 2： 10， V/V) 上相為固定相，下相為流動(dòng)相。 (一特氟隆棒頂端小凹槽內(nèi)存 8181。L，停留 30秒，而后推出水樣但不推出溶劑，如此反復(fù) 25次，最后將有機(jī)溶劑進(jìn)入 GC分析。 4) 萃取后直接進(jìn)樣分析。 在線萃取 動(dòng)態(tài)在線萃取采用流動(dòng)注射分析的原理。用渦流混合的方法使樣品瓶高速旋轉(zhuǎn)，完成萃取，而后靜置，分層后控制自動(dòng)進(jìn)樣器針頭長(zhǎng)度以取用上層或下層的樣品。 超聲萃取 利用超聲波的能量進(jìn)行萃取的方法。 超聲萃取提取煙草中的相關(guān)組分 準(zhǔn)確稱取 ，用 60mL萃取溶劑分