【正文】 CDs 和TBBPA 的限量標(biāo)準(zhǔn)。有研究表明，TBBPA 能夠與人類的轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(transthyretin) (前白蛋白)緊密結(jié)合,是一種免疫毒素。TBBPA 是目前使用量最大的一種溴系阻燃劑，其總用量約占全球阻燃劑用量的 1/3，年消耗量達(dá) 120220 T。其中 γHBCD 的含量最高，為 75%～89% ，αHBCD 的含量為 10%～13%，βHBCD 的含量為 %～12%。研究表明 HBCDs 具有很強(qiáng)的生物蓄積性和持久性，被認(rèn)為是一種新型的環(huán)境持久有機(jī)污染物，已經(jīng)受到了國(guó)際社會(huì)的廣泛關(guān)注。HBCDs 是含有六個(gè)溴原子的環(huán)狀化合物，有多種異構(gòu)體。作為阻燃劑市場(chǎng)上最常見的溴系阻燃劑首當(dāng)其充與POPs公約相關(guān)聯(lián)。2．國(guó)內(nèi)外的概況六溴環(huán)十二烷(Hexabromocyclododecanes，HBCDs) 和四溴雙酚A (Tetrabromobisphenol A， TBBPA)是世界上消費(fèi)量最大的兩種溴系阻燃劑，廣泛應(yīng)用于聚合物生產(chǎn)、印刷電路板阻燃、建筑隔熱板材、軟墊家具、室內(nèi)裝潢紡織品等領(lǐng)域。動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定編制說明動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚A含量的測(cè)定Determination of Hexabromocyclododecane and TetrabromobisphenolA in Animaldereived Food（編制說明）湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所2022 年 10 月動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定編制說明2目 錄1 編制過程32 國(guó)內(nèi)外的概況 33 方法研究?jī)?nèi)容及結(jié)果 6 理化特性 6 樣品前處理6 目標(biāo)物流出體積的確定9 流動(dòng)相的選擇 9 質(zhì)譜條件的優(yōu)化 10 線性范圍 10 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相對(duì)響應(yīng)因子 10 檢出限與定量限 11 回收率與精密度12 方法的可行性 12 國(guó)際考核樣驗(yàn)證試驗(yàn) 134 主要參考文獻(xiàn) 14動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定編制說明31. 編制經(jīng)過“動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 的測(cè)定”地方標(biāo)準(zhǔn)制訂項(xiàng)目由湖北省衛(wèi)生與計(jì)劃生育委員會(huì)立項(xiàng)（ ，該測(cè)定方法的研究由湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所承擔(dān)。2022年全球HBCDs的生產(chǎn)量為23000 噸［1］ ，2022年TBBPA 的全球生產(chǎn)量為170000 噸［2］ 。 2022年5月，聯(lián)合國(guó)《關(guān)于持久性有機(jī)污染物的斯德哥爾摩公約》 （POPs）投票一致通過一項(xiàng)禁令：在全球范圍內(nèi)禁止生產(chǎn)和使用六溴環(huán)十二烷（HBCD） 。HBCDs 熔點(diǎn)在160～190 之間，具有對(duì)熱和紫外光的穩(wěn)定性好、用量低、阻燃效果好和對(duì)材料物理性能影響小等特點(diǎn)；是一種添加型阻燃劑，可以通過生產(chǎn)、使用和產(chǎn)品的廢棄而進(jìn)入到環(huán)境中，被廣泛用作多溴聯(lián)苯醚(PBDEs)的替代品。HBCDs 可導(dǎo)致血清甲狀腺激素濃度下降、抑制神經(jīng)遞質(zhì)正常吸收、引起肝組織病理學(xué)改變等生物毒性，歐盟在 RoHS 中將其定為管控物質(zhì)，ECHA 將其歸類為高關(guān)注度物質(zhì)，同時(shí)持久性有機(jī)污染物審查委員會(huì)已將其列入《關(guān)于持久性有機(jī)污染物的斯德哥爾摩公約》 。同時(shí)發(fā)現(xiàn)在環(huán)境樣品(土壤、污泥、污水等樣品)中 HBCD 的主要成分是 γHBCD，占總 HBCD 的 60%以上；在空氣中的HBCD 主要為 αHBCD 和 γHBCD，βHBCD 含量很少；而在水生生物和鳥類體內(nèi)組織里 αHBCD 占 HBCD 總量的 80%以上。它被廣泛應(yīng)用于電子電機(jī)設(shè)備中，如印刷電路版和塑料零件中，以強(qiáng)化阻燃防火的功能，全球有超過 70％的電子電機(jī)設(shè)備含有 TBBPA。(a) (b) (c)動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定編制說明5圖 1 α、β 、γHBCD 結(jié)構(gòu)示意圖，(a) αHBCD ， (b) βHBCD，(c) γHBCDCH3CH3 BrOHBrBrHOBr 圖 2 TBBPA 結(jié)構(gòu)示意圖2022 年 6 月，挪威污染控制管理局向世界貿(mào)易組織（WTO）通報(bào)提議，一旦產(chǎn)品中某些特定物質(zhì)的含量大于或等于最高限量時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制該類消費(fèi)產(chǎn)品的生產(chǎn)、進(jìn)口、出口和銷售。目前國(guó)內(nèi)沒有針對(duì) HBCDs 和 TBBPA 分項(xiàng)單獨(dú)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，HBCDs 和TBBPA 同時(shí)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)更是不存在。在儀器檢測(cè)方面，LCMS 測(cè)定 TBBPA 簡(jiǎn)單快捷，且靈敏度較高。對(duì)于HBCDs和 TBBPA這兩類物質(zhì)，由于他們的生物蓄積性和脂溶性，HBCDs和TBBPA隨著食物鏈的延長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生富集現(xiàn)象，處于食物鏈較高點(diǎn)的動(dòng)物和人類體內(nèi)的富集程度相對(duì)環(huán)境基質(zhì)要高，有的甚至高出上千倍。四溴雙酚 A：3,3,5,5Tetrabromobi，CAS 號(hào)：79947，分子量：，分子式：C 15H12Br4O2。將提取的樣品旋蒸至近干，用正己烷復(fù)溶，動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定編制說明7每次 2~4 mL，滴入酸化硅膠柱上部，如此重復(fù)清洗燒瓶 3~4 次，100 mL 正己烷淋洗去除多余雜質(zhì)，100 mL 正己烷:二氯甲烷混合溶液(1:1，v/v)洗脫，收集洗脫液并旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，每次 2~4 mL，重復(fù)清洗燒瓶 3~4 次，轉(zhuǎn)移至 10 mL 試管，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?200 μL 甲醇，旋渦振蕩 1 min，經(jīng) μm有機(jī)濾膜過濾后上機(jī)測(cè)定。采用理由如下：在凈化過程中，去除動(dòng)物源性食品樣品中的油脂是最為重要的一步，如果不能有效地除盡脂肪，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果且污染儀器；如果在除去油脂的同時(shí)造成了目標(biāo)物的損失同樣會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。對(duì)于本檢測(cè)方法，能滿足 HBCD 和 TBBPA 同時(shí)分析的要求有兩點(diǎn)：一是能將樣品中的油脂能否有效被清除；二是兩種物質(zhì)經(jīng)前處理之后絕對(duì)回收率均能達(dá)到 50%以上，以此來評(píng)判方法的可行與否。將提取的樣品旋蒸至近干，用正己烷復(fù)溶，每次 24 mL，滴入酸化硅膠柱上部，如此重復(fù)清洗燒瓶 34 次，100 mL 正己烷淋洗去除多余雜質(zhì)，250 mL正己烷:二氯甲烷(1:1，v/v)洗脫，收集洗脫液并旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，每次 24 mL，重復(fù)清洗燒瓶 34 次，轉(zhuǎn)移至 10 mL 試管，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?200 μL 甲醇，旋渦振蕩 1 min，經(jīng) μm 有機(jī)濾膜過濾后上機(jī)測(cè)定。 將提取好的樣品用環(huán)己烷:乙酸乙酯混合溶液(1:1，v/v)復(fù)溶，每次 24 mL，滴入 GPC 柱上部，如此重復(fù)清洗燒瓶 34 次，400 mL 環(huán)己烷: 乙酸乙酯(1:1，v/v)洗脫，收集 190350 mL 之間的洗脫液(之前的洗脫液中不含目標(biāo)物 )，旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，每次 24 mL，重復(fù)清洗燒瓶 34 次，轉(zhuǎn)移至 10 mL 試管，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?200 μL 甲醇，旋渦振蕩 1 min，經(jīng) μm 有機(jī)濾膜過濾后上機(jī)測(cè)定。動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定編制說明9該方法實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象為加入濃硫酸充分搖勻并離心之后，上清液與濃硫酸層中間會(huì)有一層橘黃色的乳狀物出現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)該乳化現(xiàn)象的嚴(yán)重程度與絕對(duì)回收率成負(fù)相關(guān)，采用加鹽去乳化處理會(huì)與濃酸反應(yīng)釋放氣體，導(dǎo)致溶液噴出。方法2 GPC之后油脂未完全除凈，繼續(xù)采用方法1和方法3，直至油脂完全除凈。制作酸化硅膠時(shí)，酸化后的硅膠已被濃硫酸磺基化，將活潑的氫離子取代，使其喪失了強(qiáng)極性，因此酸化硅膠層不會(huì)與 TBBPA 發(fā)生牢固的結(jié)合，而未酸化的硅膠層會(huì)強(qiáng)烈地吸附 TBBPA，因此對(duì)傳統(tǒng)的酸化硅膠柱 (共五層：從下往上依次為無(wú)水硫酸鈉層、硅膠層、酸化硅膠層、硅膠層和無(wú)水硫酸鈉)進(jìn)行了大膽改進(jìn)，將酸化硅膠柱中的硅膠層去除，新型的酸化硅膠柱從下往上依次為：2cm 無(wú)水硫酸鈉、15g 44%酸化硅膠( 過量 )、2cm 無(wú)水硫酸鈉。發(fā)現(xiàn) 2號(hào)4 號(hào)濃縮液有目標(biāo)物的流出，5 號(hào)8 號(hào)有極少量的目標(biāo)物流出，所以，流出體積確定為 80 mL，但是為了確保目標(biāo)物完全流出，所以本試驗(yàn)將目標(biāo)物流出體積定為 100 mL。實(shí)驗(yàn)在滿足較好的色譜分離的同時(shí)，比較了甲醇/乙腈(V/V: 1/1)水、乙腈水這 2 種流動(dòng)相對(duì)目標(biāo)化合物離子化程度的影響。當(dāng)加入一定量的醋酸銨或氨水后，目標(biāo)化合物的響應(yīng)值均有所降低