第八章分子生物學(xué)常用技術(shù)的原理及其應(yīng)用及人類基因組學(xué)-wenkub
2023-04-22 04:00:30 本頁(yè)面
【正文】 中，只要這些核酸單鏈分子之間存在一定程度的堿基配對(duì)關(guān)系，就可在不同分子間形成雜化雙鏈，這種現(xiàn)象稱核酸分子雜交。5．不經(jīng)電泳分離直接將樣品點(diǎn)在NC膜上用于雜交的技術(shù)。8．指從對(duì)一種致病基因的功能的了解出發(fā)克隆該致病基因的策略。二、填空題16．DNA RNA 蛋白質(zhì) 17．引物 TaqDNA聚合酶 dNTP 含Mg2—’的緩沖液 1S．變性 退火 延伸 1Q．模板一引物雜交 引物延長(zhǎng)與合成阻斷 電泳 放射自顯影直讀圖 20．遺傳圖分 析 物理圖分析 轉(zhuǎn)錄圖分析 序列圖分析 資料的儲(chǔ)存和利用 21．功能基因組學(xué) 蛋白質(zhì)組學(xué) 22．功能性克隆 定位克隆 候選基因克隆 23．功能性克隆 定位克隆三、選擇題A型題1—1011—2021—3031—4041—505—60B型題1—1011—2021—3031—40X型題1—1011—2021—3031—40四、問(wèn)答題1．是一種快速簡(jiǎn)便的體外DNA擴(kuò)增技術(shù)，能在很短時(shí)間內(nèi)，將幾個(gè)拷貝的DNA放大百萬(wàn)倍。此三步為一個(gè)循環(huán)，一般進(jìn)行25～30次循環(huán)。反應(yīng)設(shè)A、T、C、G體系，其中分別加入適當(dāng)比例的相應(yīng)ddNTP，由于ddNTP缺少3，一OH，不能形成磷酸二酯鍵，而使合成反應(yīng)終止，致使4管中所合成的產(chǎn)物為隨機(jī)長(zhǎng)度的終止于相應(yīng)ddNTP的DNA片段。(3)引物的延長(zhǎng)與合成阻斷：雜交液分4管，各管分別加入Klenow大片段、4種dNTP(其中一種被標(biāo)記)、一種ddNTP和緩沖液，保溫使引物延長(zhǎng)并隨機(jī)阻斷。3．(1)以酪氨酸酶RNA為模板合成的’’P標(biāo)記的cDNA為探針，對(duì)克隆片段進(jìn)行Southern雜交。3. 在PCR反應(yīng)體系中，除了DNA模板外，還需加入——、————、——和——。7．血友病第Ⅷ因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是————，而DMD致病基因的克隆所采用的克隆策略是————。5．人類基因組計(jì)劃的主要研究?jī)?nèi)容包括 、 、 、 、 ?；蚪M學(xué)與醫(yī)學(xué) 測(cè) 試 題一、名詞解釋1．人類基因組計(jì)劃2. 結(jié)構(gòu)基因組學(xué)3．功能基因組學(xué)4．比較基因組學(xué)5．基因病 二、填空題1．Southern blotting用于研究一一——，、Northern blotting用于研究一一——，Western blotting用于研究一一——。(5)放射自顯影和讀圖：將凝膠板干燥后，與X線片夾在一起，使X線片在電泳帶相應(yīng)位置曝光、顯影、定影后直讀圖像。 大體過(guò)程為： (1)單鏈模板的制備；可據(jù)M13噬菌體的特性，將目的基因用基因工程的方法插入M13復(fù)制型雙鏈DNA中，培養(yǎng)擴(kuò)增后，提取單鏈M13噬菌體作模板 (2)模板一引物雜交：引物與待測(cè)DNA的3‘端上游雜交。2．雙脫氧末端終止法測(cè)序由Sanger創(chuàng)立，是常用方法之一。其反應(yīng)體系包括：模板DNA、特異性引物、耐熱DNA聚合酶、dNTP以及含Mg2+的緩沖液。9．指將目的基因整合人受精卵細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞，然后將細(xì)胞導(dǎo)人動(dòng)物子宮，使之發(fā)育成個(gè)體，該個(gè)體能把目的基因繼續(xù)傳給子代，該技術(shù)稱轉(zhuǎn)基因技術(shù)。由于常用硅芯片作為支持
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