【正文】 保肥能力。在生物菌肥進(jìn)入土壤之后，一方面有益菌在植物根際大量繁殖，在植物根區(qū)形成優(yōu)勢(shì)種群，同時(shí)有益菌在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中，還會(huì)分泌出多種有機(jī)酸和抗生素等物質(zhì)，從而抑制病原菌等有害菌的繁殖；另一方面，有些有益菌群在植物根部形成一道生物屏障，以阻止有害菌的入侵和定殖[5]。此類(lèi)微生物具有很高的專(zhuān)一性，其對(duì)靶標(biāo)害物具有極高的選擇性，而對(duì)其他生物卻十分安全。由于生物防治對(duì)環(huán)境生態(tài)和人類(lèi)健康無(wú)毒害的優(yōu)點(diǎn)而備受重視，從而得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。不同菌株的作用機(jī)理存在很大的差異。紋曲寧是100億活芽孢／％井岡霉素的復(fù)混制劑。枯草芽孢桿菌為細(xì)菌性植物保護(hù)劑，是多種植物病原菌的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。表1 我國(guó)已注冊(cè)的枯草芽孢桿菌菌劑產(chǎn)品[8]Table 1 Bacillus subtilis bacterium agent products registered in China產(chǎn)品名公司有效成分劑型主要防治對(duì)象文曲寧江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保研究所B. subtilis B916+井岡霉素水劑水稻紋枯病、稻曲病百抗云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)和云南星耀生物制品廠B. subtilis B908可濕性粉劑水稻紋枯病，三七、煙草、花卉、小麥、白菜等土傳病害臺(tái)灣寶光華化工股份有限公司B. subtilis可濕性粉劑白粉病、灰斑病、炭疽病等疾病麥豐靈南京農(nóng)業(yè)大學(xué)B. subtilis B3粉劑小麥紋枯病亞寶香港經(jīng)綸全汛有限公司B. subtilis可濕性粉劑水稻紋枯病、稻瘟病、甘藍(lán)黑斑病枯草芽孢桿菌 BS208殺菌劑武漢天惠生物有限公司B. subtilis Bs208可濕性粉劑，水劑黃瓜白粉病、草莓白粉病和灰霉病、番茄灰霉病、棉花黃萎病、枯萎病和立枯病等增產(chǎn)劑中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物生態(tài)工程研究所與上海農(nóng)樂(lè)生物工程為制品廠Bacillus. spp可濕性粉劑，水劑活體微生物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，對(duì)作物具有壯苗、抗病及增產(chǎn)作用威綠達(dá)浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所B. subtilis +綠色木霉+毛殼酶菌肥有效防治猝倒病、根瘤病、立枯病、枯萎病等病害，促進(jìn)作物生長(zhǎng)，增加作物產(chǎn)量 枯草芽孢桿菌國(guó)外研究概況二十世紀(jì)四十年代，枯草芽孢桿菌被證明具有防止植物病害的作用。韓國(guó)研制的殺菌劑Mildewide, 主要防治霜霉病、白粉病等真菌病害。下表2詳細(xì)列出了近年來(lái)世界各國(guó)研發(fā)的主要枯草芽孢桿菌制劑。 產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化 在衡量農(nóng)藥產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)中，只把側(cè)重點(diǎn)放在藥效上而忽略了有害雜質(zhì)的含量，沒(méi)有明確要求對(duì)對(duì)有害雜質(zhì)進(jìn)行限量導(dǎo)致一些農(nóng)藥產(chǎn)品產(chǎn)生副作用。 實(shí)際應(yīng)用中存在問(wèn)題 枯草芽孢桿菌菌劑從實(shí)驗(yàn)室研發(fā)到走向田間是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，主要問(wèn)題是菌劑的貨架儲(chǔ)存期短。病菌以菌絲和分生孢子在病株殘?bào)w上越冬，第二年產(chǎn)生分生孢子，成為初次侵染源。近年來(lái)隨著種植面積的逐年擴(kuò)大和感病品種的擴(kuò)種，發(fā)病有加重趨勢(shì)，已成為甜玉米的嚴(yán)重病害之一。得6500ml LB培養(yǎng)基,待用（以下實(shí)驗(yàn)部分需用不同容量及數(shù)量的LB培養(yǎng)基，按照比例重新配置即可） 活化菌種①將裝有Bacillus subtilis A16的種子瓶拿入無(wú)菌操作室，同時(shí)將200ml的LB培養(yǎng)基拿進(jìn)超凈工作臺(tái)，紫外滅菌20min.②按1:1000比例，每瓶培養(yǎng)基中加入200μl種子③將接種完的LB培養(yǎng)基放入搖床內(nèi)36℃,200r/min培養(yǎng)過(guò)夜④將種子瓶放回冰箱4℃保存 菌種擴(kuò)大培養(yǎng)①將上步得到的200ml接種枯草芽孢桿菌的LB培養(yǎng)基，18500ml LB培養(yǎng)基拿入無(wú)菌操作臺(tái)，開(kāi)紫外燈對(duì)超凈工作臺(tái)滅菌20min左右②把上步試驗(yàn)中接種到200ml培養(yǎng)瓶中的菌種按照3%的接種量接種到500ml的LB培養(yǎng)基中，共有9L18個(gè)大瓶③36℃,200r/min搖床培養(yǎng)，預(yù)得上罐前種子 發(fā)酵生產(chǎn)監(jiān)測(cè)（對(duì)0004,0005,0006罐進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵罐模擬實(shí)驗(yàn)） 取樣從0004,0005,0006三罐中分別取樣 壓片復(fù)染①制作菌種常規(guī)涂片：取潔凈載玻片，滴一滴取樣液于玻片中央，室溫自然干燥，涂面朝上，通過(guò)火焰23次進(jìn)行熱固定②于圖片上滴35滴孔雀綠溶液；用試管夾夾住載玻片在火焰上用微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)約45min；傾去染液，待玻片冷卻后，用自來(lái)水沖洗至孔雀綠不再褪色為止；%的堿性復(fù)紅溶液進(jìn)行復(fù)染1min，水洗； 觀察結(jié)果將制作好的壓片置片干燥后用油鏡觀察 Bacillus subtilis A16與Bipolaris maydis的拮抗實(shí)驗(yàn) 各種培養(yǎng)基的配制①酵母浸膏培養(yǎng)液：蔗糖`，酵母浸膏12g，K2HPO4 4g,無(wú)菌水1000ml②酵母浸膏培養(yǎng)基：酵母浸膏培養(yǎng)液+瓊脂20g③燕麥培養(yǎng)基：燕麥片30g，瓊脂18g，無(wú)菌水1000ml 玉米小斑病菌（Bipolaris maydis）的培養(yǎng)將玉米葉表面分離的玉米小斑病菌移植于燕麥片培養(yǎng)基上，2530℃培養(yǎng)7d左右，待菌落表面達(dá)培養(yǎng)皿面積2/3時(shí)，22℃光照培養(yǎng)3d 拮抗細(xì)菌（Bacillus subtilis A16）的培養(yǎng)將A,B,C三罐的枯草芽孢桿菌分別接種于盛有150ml酵母浸膏培養(yǎng)液的三角瓶中，30℃，240r/min震蕩培養(yǎng)48h 拮抗實(shí)驗(yàn)以玉米小斑病菌為靶標(biāo)菌，采用平板對(duì)峙法測(cè)定枯草芽孢桿菌對(duì)玉米小斑病菌的拮抗作用。4 討論 實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵生產(chǎn)監(jiān)測(cè)工業(yè)生產(chǎn)之前一般都要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模的發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)，在該實(shí)驗(yàn)發(fā)酵生產(chǎn)監(jiān)測(cè)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室小罐發(fā)酵周期與工業(yè)生產(chǎn)發(fā)酵周期基本相符。在發(fā)酵前期過(guò)程中觀察0006罐一直發(fā)酵正常，但從第三天觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)酵罐里含有大量雜質(zhì)而菌體量和芽孢量很少，可能原因就是發(fā)酵過(guò)程中被污染，應(yīng)屬于發(fā)酵中期污染，在該種情況下會(huì)嚴(yán)重影響產(chǎn)生菌的代謝，雜菌大量產(chǎn)酸致使培養(yǎng)液pH下降，糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時(shí)甚至?xí)?huì)使已產(chǎn)生的產(chǎn)物分解。該實(shí)驗(yàn)只是粗略地測(cè)定了枯草芽孢桿菌對(duì)玉米小斑病菌生長(zhǎng)的抑制作用，對(duì)于枯草芽孢桿菌作用的最適條件還應(yīng)有進(jìn)一步的要求，比如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、溶氧量、pH等。通過(guò)這些作用機(jī)理的研究，可以有效指導(dǎo)枯草芽孢桿菌制劑的產(chǎn)品生產(chǎn)工藝和應(yīng)用技術(shù)方法，是其的應(yīng)用和研究水平有更大的發(fā)展和提高。同時(shí)建立與完善市場(chǎng)檢查和監(jiān)督機(jī)制，一旦發(fā)現(xiàn)不合格產(chǎn)品，立刻依據(jù)法律給予對(duì)應(yīng)的處罰。 現(xiàn)在市場(chǎng)上出售的生物菌肥大部分對(duì)土壤的溫度、濕度、pH等要求比較嚴(yán)格，使得施用后菌種可能不能發(fā)揮最大的作用。 生物菌肥的推廣使用及展望 生物菌肥的推廣使用從目前的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)形勢(shì)和肥料使用狀況來(lái)看，農(nóng)藥化肥將逐步被生物肥料、生物農(nóng)藥所取代，化學(xué)制劑防治害蟲(chóng)是一種治標(biāo)不治本的方案，雖然在短期內(nèi)可能達(dá)到消滅害蟲(chóng)，提供作物營(yíng)養(yǎng)的目的，但是但是時(shí)間久了害蟲(chóng)雜草逐漸產(chǎn)生了抗性，土壤中殘留大量的化肥農(nóng)藥，都將嚴(yán)重影響人類(lèi)及牲畜的健康以及環(huán)境的協(xié)調(diào)穩(wěn)定。 從示范和施用效果的角度來(lái)看，推廣和應(yīng)用生物菌肥具有一定的可行性。不同的生物菌肥可以適應(yīng)不同的種植環(huán)境，從而改善不同質(zhì)量的土壤，也就是說(shuō)，生物菌肥的多樣化使得生物菌肥在各種地質(zhì)上