【正文】 保肥能力。在生物菌肥進入土壤之后，一方面有益菌在植物根際大量繁殖，在植物根區(qū)形成優(yōu)勢種群，同時有益菌在生長繁殖過程中，還會分泌出多種有機酸和抗生素等物質(zhì)，從而抑制病原菌等有害菌的繁殖；另一方面，有些有益菌群在植物根部形成一道生物屏障，以阻止有害菌的入侵和定殖[5]。此類微生物具有很高的專一性，其對靶標害物具有極高的選擇性，而對其他生物卻十分安全。由于生物防治對環(huán)境生態(tài)和人類健康無毒害的優(yōu)點而備受重視，從而得到了越來越廣泛的應用。不同菌株的作用機理存在很大的差異。紋曲寧是100億活芽孢／％井岡霉素的復混制劑?？莶菅挎邨U菌為細菌性植物保護劑，是多種植物病原菌的競爭性抑制劑。表1 我國已注冊的枯草芽孢桿菌菌劑產(chǎn)品[8]Table 1 Bacillus subtilis bacterium agent products registered in China產(chǎn)品名公司有效成分劑型主要防治對象文曲寧江蘇農(nóng)業(yè)科學院植保研究所B. subtilis B916+井岡霉素水劑水稻紋枯病、稻曲病百抗云南農(nóng)業(yè)大學，中國農(nóng)業(yè)大學和云南星耀生物制品廠B. subtilis B908可濕性粉劑水稻紋枯病，三七、煙草、花卉、小麥、白菜等土傳病害臺灣寶光華化工股份有限公司B. subtilis可濕性粉劑白粉病、灰斑病、炭疽病等疾病麥豐靈南京農(nóng)業(yè)大學B. subtilis B3粉劑小麥紋枯病亞寶香港經(jīng)綸全汛有限公司B. subtilis可濕性粉劑水稻紋枯病、稻瘟病、甘藍黑斑病枯草芽孢桿菌 BS208殺菌劑武漢天惠生物有限公司B. subtilis Bs208可濕性粉劑，水劑黃瓜白粉病、草莓白粉病和灰霉病、番茄灰霉病、棉花黃萎病、枯萎病和立枯病等增產(chǎn)劑中國農(nóng)業(yè)大學植物生態(tài)工程研究所與上海農(nóng)樂生物工程為制品廠Bacillus. spp可濕性粉劑，水劑活體微生物生長調(diào)節(jié)劑，對作物具有壯苗、抗病及增產(chǎn)作用威綠達浙江大學生物技術研究所B. subtilis +綠色木霉+毛殼酶菌肥有效防治猝倒病、根瘤病、立枯病、枯萎病等病害，促進作物生長，增加作物產(chǎn)量 枯草芽孢桿菌國外研究概況二十世紀四十年代，枯草芽孢桿菌被證明具有防止植物病害的作用。韓國研制的殺菌劑Mildewide, 主要防治霜霉病、白粉病等真菌病害。下表2詳細列出了近年來世界各國研發(fā)的主要枯草芽孢桿菌制劑。 產(chǎn)品標準化 在衡量農(nóng)藥產(chǎn)品的標準中，只把側(cè)重點放在藥效上而忽略了有害雜質(zhì)的含量，沒有明確要求對對有害雜質(zhì)進行限量導致一些農(nóng)藥產(chǎn)品產(chǎn)生副作用。 實際應用中存在問題 枯草芽孢桿菌菌劑從實驗室研發(fā)到走向田間是一個復雜的過程，主要問題是菌劑的貨架儲存期短。病菌以菌絲和分生孢子在病株殘體上越冬，第二年產(chǎn)生分生孢子，成為初次侵染源。近年來隨著種植面積的逐年擴大和感病品種的擴種，發(fā)病有加重趨勢，已成為甜玉米的嚴重病害之一。得6500ml LB培養(yǎng)基,待用（以下實驗部分需用不同容量及數(shù)量的LB培養(yǎng)基，按照比例重新配置即可） 活化菌種①將裝有Bacillus subtilis A16的種子瓶拿入無菌操作室，同時將200ml的LB培養(yǎng)基拿進超凈工作臺，紫外滅菌20min.②按1:1000比例，每瓶培養(yǎng)基中加入200μl種子③將接種完的LB培養(yǎng)基放入搖床內(nèi)36℃,200r/min培養(yǎng)過夜④將種子瓶放回冰箱4℃保存 菌種擴大培養(yǎng)①將上步得到的200ml接種枯草芽孢桿菌的LB培養(yǎng)基，18500ml LB培養(yǎng)基拿入無菌操作臺，開紫外燈對超凈工作臺滅菌20min左右②把上步試驗中接種到200ml培養(yǎng)瓶中的菌種按照3%的接種量接種到500ml的LB培養(yǎng)基中，共有9L18個大瓶③36℃,200r/min搖床培養(yǎng)，預得上罐前種子 發(fā)酵生產(chǎn)監(jiān)測（對0004,0005,0006罐進行實驗室發(fā)酵罐模擬實驗） 取樣從0004,0005,0006三罐中分別取樣 壓片復染①制作菌種常規(guī)涂片：取潔凈載玻片，滴一滴取樣液于玻片中央，室溫自然干燥，涂面朝上，通過火焰23次進行熱固定②于圖片上滴35滴孔雀綠溶液；用試管夾夾住載玻片在火焰上用微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時開始計時約45min；傾去染液，待玻片冷卻后，用自來水沖洗至孔雀綠不再褪色為止；%的堿性復紅溶液進行復染1min，水洗； 觀察結果將制作好的壓片置片干燥后用油鏡觀察 Bacillus subtilis A16與Bipolaris maydis的拮抗實驗 各種培養(yǎng)基的配制①酵母浸膏培養(yǎng)液：蔗糖`，酵母浸膏12g，K2HPO4 4g,無菌水1000ml②酵母浸膏培養(yǎng)基：酵母浸膏培養(yǎng)液+瓊脂20g③燕麥培養(yǎng)基：燕麥片30g，瓊脂18g，無菌水1000ml 玉米小斑病菌（Bipolaris maydis）的培養(yǎng)將玉米葉表面分離的玉米小斑病菌移植于燕麥片培養(yǎng)基上，2530℃培養(yǎng)7d左右，待菌落表面達培養(yǎng)皿面積2/3時，22℃光照培養(yǎng)3d 拮抗細菌（Bacillus subtilis A16）的培養(yǎng)將A,B,C三罐的枯草芽孢桿菌分別接種于盛有150ml酵母浸膏培養(yǎng)液的三角瓶中，30℃，240r/min震蕩培養(yǎng)48h 拮抗實驗以玉米小斑病菌為靶標菌，采用平板對峙法測定枯草芽孢桿菌對玉米小斑病菌的拮抗作用。4 討論 實驗室發(fā)酵生產(chǎn)監(jiān)測工業(yè)生產(chǎn)之前一般都要進行實驗室小規(guī)模的發(fā)酵罐實驗，在該實驗發(fā)酵生產(chǎn)監(jiān)測過程中，實驗室小罐發(fā)酵周期與工業(yè)生產(chǎn)發(fā)酵周期基本相符。在發(fā)酵前期過程中觀察0006罐一直發(fā)酵正常，但從第三天觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)酵罐里含有大量雜質(zhì)而菌體量和芽孢量很少，可能原因就是發(fā)酵過程中被污染，應屬于發(fā)酵中期污染，在該種情況下會嚴重影響產(chǎn)生菌的代謝，雜菌大量產(chǎn)酸致使培養(yǎng)液pH下降，糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時甚至會會使已產(chǎn)生的產(chǎn)物分解。該實驗只是粗略地測定了枯草芽孢桿菌對玉米小斑病菌生長的抑制作用，對于枯草芽孢桿菌作用的最適條件還應有進一步的要求，比如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、溶氧量、pH等。通過這些作用機理的研究，可以有效指導枯草芽孢桿菌制劑的產(chǎn)品生產(chǎn)工藝和應用技術方法，是其的應用和研究水平有更大的發(fā)展和提高。同時建立與完善市場檢查和監(jiān)督機制，一旦發(fā)現(xiàn)不合格產(chǎn)品，立刻依據(jù)法律給予對應的處罰。 現(xiàn)在市場上出售的生物菌肥大部分對土壤的溫度、濕度、pH等要求比較嚴格，使得施用后菌種可能不能發(fā)揮最大的作用。 生物菌肥的推廣使用及展望 生物菌肥的推廣使用從目前的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)形勢和肥料使用狀況來看，農(nóng)藥化肥將逐步被生物肥料、生物農(nóng)藥所取代，化學制劑防治害蟲是一種治標不治本的方案，雖然在短期內(nèi)可能達到消滅害蟲，提供作物營養(yǎng)的目的，但是但是時間久了害蟲雜草逐漸產(chǎn)生了抗性，土壤中殘留大量的化肥農(nóng)藥，都將嚴重影響人類及牲畜的健康以及環(huán)境的協(xié)調(diào)穩(wěn)定。 從示范和施用效果的角度來看，推廣和應用生物菌肥具有一定的可行性。不同的生物菌肥可以適應不同的種植環(huán)境，從而改善不同質(zhì)量的土壤，也就是說，生物菌肥的多樣化使得生物菌肥在各種地質(zhì)上