醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)-wenkub
2023-04-19 23:15:52 本頁面
【正文】 油鏡頭上一般刻有“ X 100”， “Oil”，“HI”等標(biāo)記。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一） 顯微鏡油鏡的使用及保護(hù)原理：在一般微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常使用的是普通光學(xué)顯微鏡的油鏡。8．作業(yè)應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成，實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求簡潔扼要，字跡清楚，畫圖力求正確、客觀。5．實(shí)驗(yàn)中用過的染菌器材如吸管，試管和用過的玻片等應(yīng)及時(shí)放人含有消毒液的容器內(nèi)，不得放在桌上，也不可在水槽里沖洗。因此，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須遵守以下規(guī)則： 1. 非實(shí)驗(yàn)必需物品，不準(zhǔn)帶進(jìn)實(shí)驗(yàn)室。微生物與寄生蟲學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)目錄實(shí)驗(yàn)一 微生物的形態(tài)學(xué)檢測 （2學(xué)時(shí)） 實(shí)驗(yàn)二 理化因素對(duì)微生物的影響（2學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)三 腸道致病性細(xì)菌的分離與鑒定（4學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)四 抗酸染色（2學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)五 寄生蟲學(xué)實(shí)驗(yàn)（2學(xué)時(shí)）微生物與寄生蟲學(xué)實(shí)驗(yàn)序 言本實(shí)驗(yàn)在于使學(xué)生加深和鞏固課堂內(nèi)容，并在掌握系統(tǒng)理論知識(shí)的基礎(chǔ)上，學(xué)習(xí)微生物與寄生蟲學(xué)的基本操作技能，通過實(shí)驗(yàn)加強(qiáng)無菌概念，培養(yǎng)獨(dú)立工作和分析問題的能力，為今后有關(guān)的疾病診斷與中醫(yī)中藥的科學(xué)研究工作打下良好的基礎(chǔ)。 2．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿工作服，按規(guī)定就座，保持肅靜。6．愛護(hù)公物，節(jié)約使用實(shí)驗(yàn)材料；注意安全使用水、電、煤氣。 實(shí)驗(yàn)一 微生物的形態(tài)學(xué)檢測 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆占?xì)菌的基本形態(tài)（球菌、桿菌、弧菌）。油鏡鏡頭透鏡很小，進(jìn)入鏡筒的光線很少，使用時(shí)為了增加亮度，必須在標(biāo)本玻片與油鏡頭之間，滴加香柏油，因?yàn)橄惆赜偷恼酃饴逝c載玻片相似，這樣就可使通過聚光器進(jìn)入載玻片的光線不會(huì)因折射而散失，幾乎全部進(jìn)入鏡筒內(nèi)，使視野明亮，物象清楚。（3）對(duì)光：用低倍鏡對(duì)光，檢查染色標(biāo)本時(shí)光線宜強(qiáng)，要抬高聚光器，放大光圈，取得最大亮度。然后將視線移至目鏡，一面觀察一面向上慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗螺旋，待看到模糊的物象時(shí)，即改用細(xì)螺旋，調(diào)節(jié)焦點(diǎn)以尋求清晰的物象。（二）細(xì)菌的革蘭氏染色法原理 G+菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密（肽聚糖層厚），且脂質(zhì)含量少，乙醇不易滲入脫色。材料 金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌培養(yǎng)液、接種環(huán)、酒精燈、革蘭染色液（結(jié)晶紫、盧戈碘液、95％乙醇、復(fù)紅或沙黃染液）。④將玻片通過火焰3次固定標(biāo)本，自然冷卻。③脫色：在玻片上加95％乙醇2～3滴，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)玻片數(shù)秒鐘，使玻片傾斜讓乙醇流去，如此重復(fù)數(shù)次，直至流下的乙醇幾乎無色或稍呈淡紫色，流水沖洗。（三）細(xì)菌的基本形態(tài)（示教）油鏡下觀察：球菌（葡萄球菌）革蘭染色片、桿菌（大腸桿菌）革蘭染色片、弧菌（霍亂弧菌）革蘭染色片，注意觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列和染色。四、思考題試比較革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的特征？實(shí)驗(yàn)二 理化因素對(duì)微生物的影響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆占?xì)菌常用的接種方法和在不同培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象，細(xì)菌的三種特殊結(jié)構(gòu)。培養(yǎng)基按其物理性狀可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基三種。再加人蛋白胨、氯化鈉，加熱使之完全溶解，～，煮沸10分鐘，過濾，分裝，高壓滅菌后備用。將預(yù)先制備好的普通固體培養(yǎng)基100ml加熱融化，待冷卻到50℃左右時(shí)，用無菌操作法加入8～10ml的脫纖維兔血或羊血，混勻后倒入無菌平皿或試管中，冷卻后即為血平板或血瓊脂斜面培養(yǎng)基。② 按無菌操作法將沾有細(xì)菌的接種環(huán)在傾斜的接近液面的管壁上輕輕涂抹研勻，試管直立使沾附在管壁上的細(xì)菌混人液體即可。接種環(huán)在火焰上滅菌，冷卻后，沾取菌種，先在平板的一端涂開，然后由此開始向下平行密集劃線，約占平板的一半。②分區(qū)劃線法：右手將接種環(huán)按無菌操作法沾取少許培養(yǎng)物（金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌等），左手拿平板略打開，將標(biāo)本涂于平板表面的一側(cè)邊緣，運(yùn)用腕力連續(xù)劃線（要密但不要重疊，不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基），劃線范圍約占平板面積的1／4。重復(fù)上述操作，劃完整個(gè)平板。塞上硅膠塞，接種針重新滅菌。在液體培養(yǎng)基上生長情況（1）表面生長：液體清晰，細(xì)菌生長在液面形成菌膜。（3）沉淀生長：液體清晰，細(xì)菌生長在管底，形成沉淀。在半固體培養(yǎng)基上的生長情況 有鞭毛的細(xì)菌，由于能運(yùn)動(dòng)，在半固體培養(yǎng)基內(nèi)沿穿刺線彌漫性長，使穿刺線變的模糊不清，出現(xiàn)試管刷現(xiàn)象。咽喉部細(xì)菌檢查 用無菌棉拭子在咽喉部涂抹后，涂在血平板上，37℃培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。蓋上蓋，置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h，觀察平板表面細(xì)菌生長的情況。觀察并測量抑菌圈的大小，比較各種藥物對(duì)試驗(yàn)菌的抗菌作用（或菌株對(duì)藥物的敏感性）。鍋蓋密閉旋緊后由鍋底加熱，因蒸氣不能外溢，可使鍋內(nèi)壓力逐漸增高，從而提高了鍋內(nèi)水的沸點(diǎn)和蒸氣的溫度。停止加熱后，等壓力逐漸自行下降到零時(shí)，慢慢開放排氣閥，消除余氣，開蓋取物。熟悉血漿
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