【正文】 蛋白質(zhì)翻譯過程。泡沫細(xì)胞逐漸增多并融合，形成脂質(zhì)條紋，繼而發(fā)展為成熟的粥樣斑塊。血管壁內(nèi)和動(dòng)脈粥樣硬化損傷處的所有主要細(xì)胞都能氧化LDL, 產(chǎn)生氧化型LDL(OxLDL)。這兩類細(xì)胞膜表面具有清道夫受體(scavenger receptor, SR)，攝取清除血漿中的修飾LDL。LDL受體家族、清道夫受體家族、脂解激活受體。經(jīng)過氧化或其他化學(xué)修飾后的LDL, 具有更強(qiáng)的致AS作用。脂蛋白結(jié)構(gòu):甘油三酯及膽固醇酯構(gòu)成內(nèi)核。HDL主要由肝和小腸合成。目前認(rèn)為血漿中LDL的來源有兩條途徑：①主要途徑是由VLDL異化代謝轉(zhuǎn)變而來；②次要途徑是肝合成后直接分泌到血液中。正常人極低密度脂蛋白大部分代謝變成低密度脂蛋白。分為：CM,VLDL,IDL,LDL,HDL。 分子減少或缺失（蠶豆?。?gòu)象病　折疊錯(cuò)誤導(dǎo)至功能改變酵母雙雜交系統(tǒng) 其原理是當(dāng)靶蛋白和誘餌蛋白特異結(jié)合后，誘餌蛋白結(jié)合于報(bào)道基因的啟動(dòng)子，啟動(dòng)報(bào)道基因在酵母細(xì)胞內(nèi)的表達(dá).第二章 糖蛋白、蛋白聚糖及脂蛋白糖蛋白：蛋白質(zhì)與糖類構(gòu)成的共價(jià)復(fù)合物，含糖類較少，含糖量一般為2%~50%。HB變性（denaturation）：物理化學(xué)因素使蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)變化,生物學(xué)功能降低或喪失，其實(shí)質(zhì)是破壞維系蛋白質(zhì)空間構(gòu)象的次級鍵，但不涉及肽鍵的斷裂。Leucine zipper)ββ、βαβ。二面角決定了兩個(gè)相鄰肽平面的空間相對位置。構(gòu)象的改變不涉及共價(jià)鍵的破裂，僅涉及氫鍵、疏水鍵等次級鍵的變化。第一章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能構(gòu)型：指在立體異構(gòu)體中取代原子或基團(tuán)在空間的取向。 一級結(jié)構(gòu) ：指多肽鏈中氨基酸的排列順序。二級結(jié)構(gòu)與一級結(jié)構(gòu)的關(guān)系：各種氨基酸殘基在不同的二級結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)的頻率不同 a. 形成α螺旋能力強(qiáng)的氨基酸有：Glu、Met、Ala、Leu b. 形成β折疊能力強(qiáng)的氨基酸有：Val、Ile、Tyrc. 形成β轉(zhuǎn)角能力強(qiáng)的氨基酸有：Pro、 Gly、Asn、Asp、Ser；此外，多肽鏈中若存在連續(xù)酸性或堿性的氨基酸殘基時(shí)，因同電相斥也影響構(gòu)象的形成，所以，多肽鏈的R側(cè)鏈的位置、大小、極性、荷電情況等，最終決定蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的形成。結(jié)構(gòu)域：超二級結(jié)構(gòu)進(jìn)一步組合折疊成半獨(dú)立緊密的球狀 類型：1,平行α/β型 2,反平行β型 3,全α型 4,小的不規(guī)則結(jié)構(gòu) 三級結(jié)構(gòu)：在二級結(jié)構(gòu)，超二級結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)域基礎(chǔ)上，一級結(jié)構(gòu)相隔較遠(yuǎn)的氨基酸殘基以次級鍵相連，盤旋折疊成球狀，形成包括主鏈和側(cè)鏈在內(nèi)所有原子和基團(tuán)的特定空間排布。復(fù)性：將蛋白質(zhì)從結(jié)構(gòu)不規(guī)則、無活性的狀態(tài)，恢復(fù)到有唯一立體結(jié)構(gòu)、有生物活性的狀態(tài)的過程。蛋白聚糖：蛋白質(zhì)與糖類構(gòu)成的共價(jià)復(fù)合物，含糖類較多，含糖量一般為50%~90%。脂蛋白中的蛋白質(zhì)稱為載脂蛋白apolipoprotein。這類脂蛋白由于攜帶膽固醇數(shù)量相對較少，且它們的顆粒相對較大，不易透過血管內(nèi)膜，因此，正常的極低密度脂蛋白沒有致動(dòng)脈硬化作用，像乳糜微粒一樣也不是冠心病的主要危險(xiǎn)因素，極低密度脂蛋白代謝產(chǎn)生的中密度脂蛋白具有致動(dòng)脈硬化作用。LDL的降解是經(jīng)LDL受體途徑進(jìn)行代謝， 當(dāng)?shù)兔芏戎鞍走^量時(shí)，它攜帶的膽固醇便積存在動(dòng)脈壁上，久了容易引起動(dòng)脈硬化。肝合成的新生HDL以磷脂和ApoAⅠ為主。載脂蛋白、磷脂及膽固醇等兼性分子以單分子層借助其非極性的疏水基團(tuán)與內(nèi)核相連，而極性的親水基團(tuán)位于表面.脂蛋白的臨床意義:CM可能與AS有關(guān)。HDL被認(rèn)為是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白,是冠心病的保護(hù)因子。LDL在內(nèi)小體的酸性環(huán)境中與LDL受體分離1. 含受體部分的小泡成再循環(huán)小泡，又回到細(xì)胞表面—— LDL受體的再循環(huán)途徑2. LDL被運(yùn)送到溶酶體，并被溶酶體內(nèi)的酶類分解，載脂蛋白（主要為apoB100）降解成氨基酸，膽固醇酯則被酸性酯酶水解為游離膽固醇。oxLDL引起動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)理：沉積在動(dòng)脈粥樣斑塊上的脂質(zhì)是來源于血漿中低密度脂蛋白(LDL)。但是, 在動(dòng)脈樣硬化的早期階段, 內(nèi)皮細(xì)胞對LDL的輕度氧化可能是至關(guān)重要的。Lp(a)的組成 1. 脂質(zhì) 成分與LDL相似 含量:TG高于LDL，(a) 以二硫鍵相連Lp(a)致As的機(jī)制 Lp(a)與纖溶酶原結(jié)構(gòu)同源 1. Lp(a)與纖溶酶原競爭底物的結(jié)合部位 Lp(a)中的apo(a) 與纖溶酶原競爭同一底物纖維蛋白或纖維蛋白原，但由于apo(a)不具備酶的活性，導(dǎo)致其不能溶解或分解與其結(jié)合的纖維蛋白，相反它還促進(jìn)或有利于纖維蛋白沉著于血管壁，參與血栓形成，繼而啟動(dòng)As的發(fā)生和發(fā)展。miRNA 是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼RNA，其大小長約20~25個(gè)核苷酸。它是不符合孟德爾遺傳規(guī)律的遺傳。重建復(fù)合物：為多蛋白巨型分子，分離純化時(shí)輔基或結(jié)合的蛋白質(zhì)共沉淀；具解旋酶基序或結(jié)構(gòu)域，能直接在DNA模板區(qū)引入負(fù)超螺旋，對染色質(zhì)結(jié)構(gòu)極具影響；有ATP依賴性ATPase活性，靠ATP供能而調(diào)節(jié)核小體結(jié)構(gòu)；有些亞基具有組蛋白修飾酶活性，體外促核小體重定位或解體。染色質(zhì)化學(xué)修飾與基因表達(dá) 核染色質(zhì)化學(xué)修飾是指其組成（DNA、RNA、組蛋白和非組蛋白）分子加入/去除某個(gè)化學(xué)基團(tuán)的反應(yīng)。（基因表達(dá)）/去乙?；ɑ蜿P(guān)閉） HAT/HDAC、蘇氨酸和酪氨酸羥基上，與負(fù)電荷磷酸基團(tuán)結(jié)合，誘導(dǎo)分子構(gòu)象改變，增加分子間排斥力或吸引力，產(chǎn)生特有的生物學(xué)效應(yīng)。 啟動(dòng)子：位于基因編碼區(qū)上游并為RNA聚合酶識別、結(jié)合和啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA序列。 隔離子：在真核基因組內(nèi)建立獨(dú)立轉(zhuǎn)錄活性結(jié)構(gòu)域的調(diào)節(jié)元件。 分類：：內(nèi)分泌信號(endocrine signal) 特點(diǎn) 由內(nèi)分泌細(xì)胞分泌；通過血循環(huán)到達(dá)靶細(xì)胞 作用時(shí)間較長 ：旁分泌信號(paracrine signal) 特點(diǎn)：由特定細(xì)胞分泌 通過擴(kuò)散作用于鄰近的靶細(xì)胞 作用時(shí)間較短 ：突觸分泌信號(synaptic signal) 特點(diǎn)：由神經(jīng)元突觸前細(xì)胞分泌 通過突觸間隙到達(dá)突觸后細(xì)胞 作用時(shí)間較短 特點(diǎn) 直接穿越細(xì)胞膜進(jìn)入靶細(xì)胞 直接改變效應(yīng)酶的活性 舉例：NO, CO細(xì)胞內(nèi)的信號分子： 第一信使與受體結(jié)合后在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的傳遞信號的化學(xué)物質(zhì)。單鏈糖蛋白,七個(gè)跨膜α螺旋 N端在細(xì)胞膜外側(cè)，C端在細(xì)胞內(nèi)側(cè)，三個(gè)細(xì)胞外環(huán)，三個(gè)細(xì)胞內(nèi)環(huán)?？杀籧AMP抑制。在這些因子作用下，IκB激酶（IKK）激活，使抑制蛋白磷酸化，后經(jīng)泛素化被降解。DNA聚合酶：催化體外DNA合成。載體條件：1 必須有自身的復(fù)制子，能在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立自主地進(jìn)行復(fù)制，并能使靶DNA片段同步擴(kuò)增；2 載體分子上必須有限制性內(nèi)切酶點(diǎn)，以供外源DNA插入，具有多種酶的單一位點(diǎn)，賦予載體在使用上有更大的靈活性；3 應(yīng)具有可供選擇的遺傳標(biāo)志，以便于陽性重組體的篩選；4 載體分子本身應(yīng)盡量小，可容納較大的外源DNA片段，并具有拷貝數(shù)高、易與宿主DNA分離及抗剪切力強(qiáng)等特點(diǎn)；5對于表達(dá)型載體還應(yīng)具備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動(dòng)子、前導(dǎo)順序、增強(qiáng)子等調(diào)控元件。轉(zhuǎn)化：質(zhì)粒DNA及其重組體導(dǎo)入細(xì)菌；轉(zhuǎn)染：病毒及其重組體導(dǎo)入受體細(xì)胞；轉(zhuǎn)導(dǎo)：噬菌體及其重組體導(dǎo)入受體細(xì)胞。堿基插入突變 DNA鏈中插入1個(gè)或多個(gè)堿基（轉(zhuǎn)座子Tn），突變后可引起DNA序列閱讀框架改變堿基缺失突變 DNA鏈中1個(gè)或多個(gè)堿基發(fā)生丟失，突變后可引起DNA序列閱讀框架改變：同義突變：堿基被替代后沒有密碼子改變，其產(chǎn)物AA序列也無變化。如形狀、大小、色澤等的改變。 4．發(fā)生突變的細(xì)胞分類：體細(xì)胞突變: 在保持分裂的身體組織的一個(gè)細(xì)胞發(fā)生突變，這個(gè)細(xì)胞便成為一群相同突變細(xì)胞的祖先。如果突變的性細(xì)胞參與受精過程，那么突變基因就會傳給下一代。 ★正突變(forward mutation)：顯性基因A232。 復(fù)等位基因(multiple allele)：位于同一基因位點(diǎn)上的多種等位基因。Kunkel定點(diǎn)誘變法：通過篩除含尿嘧啶DNA模板鏈。 PCR定點(diǎn)突變重疊延伸PCR誘變：用PCR法各擴(kuò)增兩條帶有預(yù)設(shè)突變堿基的DNA片段，擴(kuò)增的DNA片段在預(yù)設(shè)突變處有重疊區(qū)域，混合重疊片段，并與兩個(gè)原始片段互補(bǔ)的側(cè)翼引物進(jìn)行第三次PCR擴(kuò)增，以獲得全長DNA。病毒癌基因 （vonc） 存在于病毒基因組的癌基因稱為病毒癌基因。只有在一定的條件下發(fā)生改變而有過度表達(dá)時(shí)，才可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān),正常狀態(tài)下為非活化形式即原癌基因（proonc）：病毒癌基因轉(zhuǎn)錄效率高；細(xì)胞癌 基因轉(zhuǎn)錄效率低。 點(diǎn)突變常見于ras癌基因ras基因的表達(dá)產(chǎn)物RAS是一種小分子G蛋白，在信號傳導(dǎo)中起重要作用， ras基因的點(diǎn)突變主要發(fā)生在第113和61位密碼子，正常RAS的作用因其自身的GTP酶活性而受到嚴(yán)格控制，而突變了的RAS其GTP酶活性下降或喪失，失去了原有控制，致使增殖信號持續(xù)作用，細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化?；驍U(kuò)增導(dǎo)致染色體結(jié)構(gòu)異常：雙微小染色體，無著絲粒，4. 染色體易位 原癌基因在腫瘤細(xì)胞中從染色體正常位置轉(zhuǎn)移到其他某個(gè)位置上稱為染色體易位。例如cmyc的激活就有基因擴(kuò)增和基因重排兩種方式，很少見cmyc的突變；而ras的激活方式則主要是突變，各種癌基因之間存在協(xié)同作用,腫瘤的發(fā)生是多步驟，多因素的，不同的癌基因作用于腫瘤發(fā)生的不同階段。當(dāng)Rb基因發(fā)生缺失或突變，喪失結(jié)合、抑制E2F的能力，于是細(xì)胞增殖活躍，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。 mRNA，編碼生成393個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量為53kD。 102292肽段為DNA結(jié)合區(qū)，能與DNA特異序列結(jié)合，結(jié)合時(shí)需要Zn2+參與。 P53蛋白與復(fù)制因子A相互作用參與DNA的損傷修復(fù)；如果修復(fù)失敗，P53蛋白即啟動(dòng)程序性死亡過程誘導(dǎo)細(xì)胞自殺，阻止有癌變傾向突變細(xì)胞的產(chǎn)生，從而防止細(xì)胞惡變。 另外，當(dāng)DNA損傷時(shí)，細(xì)胞表達(dá)p53 mRNA而導(dǎo)致GADD45基因表達(dá)水平升高，使細(xì)胞的生長停止或凋亡。適應(yīng)性強(qiáng)：其應(yīng)用的范圍已從原先局限的遺傳性疾病擴(kuò)大到感染性疾病、腫瘤、心血管疾病等領(lǐng)域。 分子雜交技術(shù)過程： 探針制備及標(biāo)記（同位素或非同位素） 待測核酸樣品制備（分離，純化）雜交（液相，固相）雜交后處理（去掉非特異雜交分子）顯示結(jié)果（顯色，發(fā)光，放射自顯影） 結(jié)果分析分子雜交的基本方法 原位雜交 不須提取DNA或RNA。斑點(diǎn)印跡雜交 把提取的DNA/RNA樣本，直接點(diǎn)到硝酸纖維膜或尼龍膜上與標(biāo)記核酸探針雜交。該方法主要用于檢測基因組中待測的基因或序列Northern 印跡雜交 檢測RNA（主要是mRNA）的方法PCR 基本原理－DNA復(fù)制 167。結(jié)果，內(nèi)切酶位點(diǎn)本身堿基序列雖未改變，但原有內(nèi)切酶位點(diǎn)在基因組中的相對位置改變了從而導(dǎo)致RFLP。限制性內(nèi)切酶譜分析法( RE )等位基因特異寡核苷酸探針( ASO ) 原理：針對已知突變位點(diǎn)的基因：可以分別針對已知突變位點(diǎn)的序列，設(shè)計(jì)一對寡核苷酸探針，其中一條為野生型探針，與無突變序列互補(bǔ)，另一個(gè)為突變型探針，與突變序列互補(bǔ)。 Normal βΑGene Probe——與正常βΑ雜交穩(wěn)定 Mutation βS Gene Probe——與異常βS雜交穩(wěn)定病原體基因診斷的主要技術(shù)方法 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR （ Real Time Flourescence quantitative PCR, FQ—PCR ） 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR在常規(guī) PCR 基礎(chǔ)上，添加了一條標(biāo)記 2 個(gè)熒光基團(tuán)的熒光雙標(biāo)記探針。此時(shí)檢測不到熒光信號。分析發(fā)現(xiàn)， DNA 指紋圖譜中幾乎每一條帶紋都能在其雙親之一的圖譜中找到，這種帶紋符合經(jīng)典的孟德爾遺傳規(guī)律，即雙方的特征平均傳遞 50 ％ 給子代。直接基因治療和間接基因治療 直接基因治療(致病基因的原位置換)：糾正突變基因，在原位修復(fù)缺陷的基因，以達(dá)到治療目的，為較理想的基因治療策略。2基因干預(yù)(gene interference)：指采用特定的方式抑制某個(gè)基因的表達(dá)，或者通過破壞某個(gè)基因而使之不表達(dá)，以達(dá)到治療疾病的目的。該酶可以切割DNA 基因治療的基本程序：目的基因的選擇與獲得；載體的選擇；將