dnarna合成常見問題解答-wenkub
2023-04-08 04:50:42 本頁面
【正文】 同的堿基序列的影響，并且通過熱力學(xué)來測定，可以更有效的測定Tm值。 但這些方法不能消除堿基堆積的影響，結(jié)果并不準(zhǔn)確，所以近鄰法被廣泛的應(yīng)用。8 3 ,3 7 4 6 5 0 )來計算。我 們 使值 ↑TOP ↑TOP 寡核苷酸質(zhì)量(ng) =分子量(.)摩爾數(shù)(nmol) ↑TOP寡核苷酸的分子量可以通過下式進行計算：. =(NA ) + (NC ) + (NG ) + (NT ) + (寡核苷酸長度1) + NA =總 A數(shù)NC = 總C數(shù)NG = 總G數(shù)NT = 總T數(shù) ↑TOP首先，用下面公式計算18個堿基的寡核苷酸的吸光度是多少 ：ε = 3 + 4 + 5 + 6 = (ml/ mmole)然后，通過下式來計算寡核苷酸的濃度：. =εC，C = ./εCC = / = (181。moldT: ml/181。 ↑TOP由于Cy3和Cy5在pH大于9時易被降解，所以Cy3和Cy5修飾即使在溶液狀態(tài)寡核苷酸也相當(dāng)穩(wěn)定，通常情況(沒有引入使寡核苷酸降解的污染物)即使在室溫中放置超過一星期也能使用。寡核苷酸在無菌水中很難溶解，加一定量的NaOH有助于寡核苷酸在水中溶解。 通常，寡核苷酸應(yīng)該20℃保存，該溫度下能穩(wěn)定保存一年以上。位有磷酸基嗎?22. 簡并引物及通用引物是什么?8. 如何計算寡核苷酸的分子量?7. 如一個18個堿基的寡核苷酸包括3個dG,4個dC,5個dA和6個dT, ，那4. 熒光染料標(biāo)記的寡核苷酸，在儲存和使用過程中必須特殊處理嗎?處理和保存1. 如何保存寡核苷酸?純化和濃縮9. 如何測定寡核苷酸的質(zhì)量?10. 如何測定寡核苷酸的質(zhì)量?11. 如何測定合成的寡核苷酸的Tm值?12. 為什么Bioneer提供的Tm值和我們的Tm值不同?13. 用什么方法調(diào)整寡核苷酸的濃度?14. 單位換算表純化方法23. 怎樣純化合成的寡核苷酸?24. 用于芯片分析的60 mer寡核苷酸如何被純化呢?寡核苷酸在溶液中較為穩(wěn)定，但易被污染的核酸酶降解，因此我們建議應(yīng)干燥儲存。Q2. 如何重懸寡核苷酸？ ↑TOP ↑TOPQ5. 如何定量合成的寡核苷酸? ↑TOPQ6. 如何通過紫外吸光度值來定量寡核苷酸？ 寡核苷酸的量經(jīng)常用OD值來描述。moldG: ml/181。 對于一段寡核苷酸，它的吸光度等于每個堿基的數(shù)目乘以它的吸光系數(shù)，然后將4種堿基的結(jié)果加起來就是整個寡核苷酸的吸光度。mol/ml) = (nmol/ml)最后。Q9. 如何測定寡核苷酸的質(zhì)量? ↑TOPQ10. 如果不知道寡核苷酸的堿基組成，有什么辦法來定量合成的寡核苷酸？ 1 OD值 的單 鏈寡 核苷酸大約33 mg，雙鏈 寡 核 苷 酸 約為 。Q11. 如何測定合成的寡核苷酸的Tm值? Tm(解鏈溫度)是指50%雙鏈被解開成單鏈時的溫度。有 多 用 近用這種方法計算前，也有多種方法來估測。但是，對于在6070 bp或15bp以下的寡核苷酸的測定，近鄰法還是有缺點。比如539。的序列用熱力學(xué)方法測定結(jié)果是不同的。R是指氣體常數(shù)( cal Bioneer會給每一個用戶提供Tm值，但這只是估計值，我們不能保證精確性，因此這個值僅供用戶參考。Q12. 為什么Bioneer提供的Tm值和我們的Tm值不同?我們通常只是簡單的乘以A、G、C、T的數(shù)目，但序列不同堿基的Tm值亦會不同。例如,，則應(yīng)向兩個管中分別加入相應(yīng)量的無菌水,即可使每個管中的寡核苷酸濃度達到100 pmol/181。l = 20,920 pmol = nmol，pmol/181。l = 100 106mol/L= 104M終濃度換算為100181。 ↑TOP科學(xué)系統(tǒng)單位: 102 = hecto [h] 106 = mega [M] 1012 = tera [T] 1018 = exa [E] 1024 = yotta [Y]寡核苷酸單位換算的例子:1 pmol/181。Q15. 如何合成寡核苷酸? ↑TOP539。 脂 Tetrahedron Lett. 1983, 24,5843)。在各種各樣的固相載體中，可控孔度玻片已經(jīng)在近年廣泛使用了，這種玻片是由均勻的玻璃基質(zhì)組成，上面有固定尺寸的孔。 通過第一個循環(huán)—脫保護，CPG裂解出539。因為三氯乙酸有很強的酸性，所以用三氯乙酸脫保護時，反應(yīng)時間不應(yīng)該太長。連接苯甲?；糜诒Ｗo酰苷和胞苷。羥基。所以，它們必須首先通過一種弱酸性激活劑激活。氧化此步反應(yīng)非?？?，在三十秒內(nèi)就可以完成。通過加帽，即將自由羥基乙酰化，解決了這個問題。末端的DMT基團，下一個核苷酸的聚合循環(huán)開始。mol: 50 mer 181。Q18. 當(dāng)我預(yù)訂50nmol的寡核苷酸，產(chǎn)品卻不足50 nmol，為什么?50 nmol是指在寡核苷酸合成開始時固相載體負荷的數(shù)量。Q19. 能合成出高百分比“G”的寡核苷酸嗎? 眾所周知，含高百分比的“G”寡核苷酸不容易被合成，特別是序列中包含一行“G”。我們能提供239。位有磷酸基嗎？ ↑TOP如果你想要339。端進行磷酸化修飾。脫鹽所有非必須有機化合物被移除的過程通常叫做脫鹽。BioRPDMT基團的寡核苷酸與反相樹脂具有親和性，因此反相親和樹脂通常被
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