dnarna合成常見問題解答-展示頁
2025-04-02 04:50本頁面
【正文】 近種 計(jì) 算 方 法 。有 多 Tm Tm(解鏈溫度)是指50%雙鏈被解開成單鏈時(shí)的溫度。Q11. 如何測(cè)定合成的寡核苷酸的Tm值?因此，最 好 用 Q6 中 提 到 的 適合于短 寡 核 苷 酸 質(zhì) 量的計(jì)算方法，可以 得 到 更 精 確的 結(jié) 果。 1 OD值 的單 鏈寡 核苷酸大約33 mg，雙鏈 寡 核 苷 酸 約為 。Q10. 如果不知道寡核苷酸的堿基組成，有什么辦法來定量合成的寡核苷酸？用寡核苷酸的摩爾數(shù)或寡核苷酸的分子量可以計(jì)算寡核苷酸的量： ↑TOPQ9. 如何測(cè)定寡核苷酸的質(zhì)量?Q8. 如何計(jì)算寡核苷酸的分子量?mol/ml) = (nmol/ml)最后。Q7. 如一個(gè)18個(gè)堿基的寡核苷酸包括3個(gè)dG,4個(gè)dC,5個(gè)dA和6個(gè)dT, ，那么它的量是多少？ 對(duì)于一段寡核苷酸，它的吸光度等于每個(gè)堿基的數(shù)目乘以它的吸光系數(shù)，然后將4種堿基的結(jié)果加起來就是整個(gè)寡核苷酸的吸光度。mol dA: ml/181。moldG: ml/181。因?yàn)樵?60nm處單個(gè)堿基的吸光度值是已知的，所以序列已知的寡核苷酸的濃度就可以測(cè)定。 寡核苷酸的量經(jīng)常用OD值來描述。Q6. 如何通過紫外吸光度值來定量寡核苷酸？通常通過測(cè)量紫外吸光度值(OD值)來定量。 ↑TOPQ5. 如何定量合成的寡核苷酸?為了保持其熒光效能，熒光染料標(biāo)記的核苷酸應(yīng)避光20℃保存。 ↑TOP 脫水的寡核苷酸是長(zhǎng)期穩(wěn)定的。重懸后，寡核苷酸應(yīng)該在20癈保存以長(zhǎng)期使用。 ↑TOPQ2. 如何重懸寡核苷酸？另外，酸性條件下，DNA會(huì)因?yàn)槊撪堰首饔枚到?；堿性條件會(huì)使磷酸二酯鍵水解斷裂。寡核苷酸在溶液中較為穩(wěn)定，但易被污染的核酸酶降解，因此我們建議應(yīng)干燥儲(chǔ)存。 ↑TOP實(shí)驗(yàn)27. 怎樣制備雙鏈DNA? Q1. 如何保存寡核苷酸？純化方法23. 怎樣純化合成的寡核苷酸?24. 用于芯片分析的60 mer寡核苷酸如何被純化呢? 或539。9. 如何測(cè)定寡核苷酸的質(zhì)量?10. 如何測(cè)定寡核苷酸的質(zhì)量?11. 如何測(cè)定合成的寡核苷酸的Tm值?12. 為什么Bioneer提供的Tm值和我們的Tm值不同?13. 用什么方法調(diào)整寡核苷酸的濃度?14. 單位換算表 么它的量是多少?6. 如何通過紫外吸光度值來定量寡核苷酸?純化和濃縮3. 如果寡核苷酸在室溫中放置超過一星期，還可以使用嗎?1. 如何保存寡核苷酸?DNA/RNA合成 常見問題解答處理和保存2. 如何重懸寡核苷酸?4. 熒光染料標(biāo)記的寡核苷酸，在儲(chǔ)存和使用過程中必須特殊處理嗎?5. 如何定量合成的寡核苷酸?7. 如一個(gè)18個(gè)堿基的寡核苷酸包括3個(gè)dG,4個(gè)dC,5個(gè)dA和6個(gè)dT, ，那8. 如何計(jì)算寡核苷酸的分子量?合成與訂購(gòu)15. 如何合成寡核苷酸?16. 標(biāo)準(zhǔn)寡核苷酸結(jié)構(gòu)17. Bioneer能合成的最長(zhǎng)的寡核苷酸是多長(zhǎng)?18. 當(dāng)我預(yù)訂50nmol的寡核苷酸，產(chǎn)品卻不足50 nmol，為什么?19. 能合成出高百分比“G”的寡核苷酸嗎?20. 能提供寡核糖核酸(RNA)合成嗎?21. 合成的寡核苷酸在339。位有磷酸基嗎?22. 簡(jiǎn)并引物及通用引物是什么?修飾寡核苷酸25. 修飾寡核苷酸26. 作為反義脫氧寡核苷酸的硫磷?；押塑账?通常，寡核苷酸應(yīng)該20℃保存，該溫度下能穩(wěn)定保存一年以上。若要以溶液形式儲(chǔ)存，最好將其分裝在幾管中分別保存，反復(fù)凍融會(huì)使寡核苷酸降解。 為便于長(zhǎng)期保存，我們建議使用TE緩沖液(10 mM TrisHCl,1 mM EDTA, )，而不用無菌水來溶解寡核苷酸。寡核苷酸在無菌水中很難溶解，加一定量的NaOH有助于寡核苷酸在水中溶解。Q3. 如果寡核苷酸在室溫中放置超過一星期，還可以使用嗎？ ↑TOP即使在溶液狀態(tài)寡核苷酸也相當(dāng)穩(wěn)定，通常情況(沒有引入使寡核苷酸降解的污染物)即使在室溫中放置超過一星期也能使用。Q4. 熒光染料標(biāo)記的寡核苷酸，在儲(chǔ)存和使用過程中必須特殊處理嗎？ 如果暴露在光線下，熒光染料標(biāo)記的寡核苷酸比未標(biāo)記的寡核苷酸更易降解，熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸降低。由于Cy3和Cy5在pH大于9時(shí)易被降解，所以Cy3和Cy5修飾 合成的寡核苷酸的量非常少，不能直接稱重來定量。 ↑TOP1個(gè)OD值是體積1ml寡核苷酸溶液，在內(nèi)徑1cm的比色杯中的吸光度值，約為33 mg寡核苷酸，序列不同的寡核苷酸OD值有所不同。dT: ml/181。mol dC: ml/181。mol它的濃度可通過下式來計(jì)算 ：. =εC (內(nèi)徑1 cm的比色杯) ↑TOP首先，用下面公式計(jì)算18個(gè)堿基的寡核苷酸的吸光度是多少 ：ε = 3 + 4 + 5 + 6 = (ml/ mmole)然后，通過下式來計(jì)算寡核苷酸的濃度：. =εC，C = ./εCC = / = (181。 ↑TOP寡核苷酸的分子量可以通過下式進(jìn)行計(jì)算：. =(NA ) + (NC ) + (NG ) + (NT ) + (寡核苷酸長(zhǎng)度1) + NA =總 A數(shù)NC = 總C數(shù)NG = 總G數(shù)NT = 總T數(shù) 通常，合成的寡核苷酸的質(zhì)量用摩爾數(shù)來描述，常用nmol。 寡核苷酸質(zhì)量(ng) =分子量(.)摩爾數(shù)(nmol) ↑TOP然而對(duì)于較短的寡核苷酸，上述值偏差較大。 ↑TOP寡核苷酸濃度
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