【正文】 ? 有很多品種采用 HPLC梯度洗脫法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，如：頭孢地尼，頭孢唑林鈉，拉氧頭孢鈉 , 阿莫西林及其復(fù)方制劑，氨芐西林等?？衫脤?duì)照品溶液色譜圖中雜質(zhì)的保留時(shí)間，對(duì)特定雜質(zhì)進(jìn)行控制。 ? 對(duì)雜質(zhì)數(shù)多或多組分的、分離難度大的品種，中檢所提供混合雜質(zhì)對(duì)照品，多組分對(duì)照品及標(biāo)準(zhǔn)圖譜 . ? 如阿莫西林、阿莫西林克拉維酸、氨芐西林、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等。 ? 喹諾酮類 46個(gè)品種就有 40個(gè)品種用 HPLC法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)。 硫酸卡那霉素及制劑的有關(guān)物質(zhì)卡 B以及含量測(cè)定， 硫酸慶大霉素及制劑的慶大霉素 C組分及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定， 硫酸小諾霉素及其制劑的組分測(cè)定。 應(yīng)用 HPLCELSD測(cè)定氨基糖苷類抗生素的組分，有關(guān)物質(zhì)，特定雜質(zhì)及含量的品種進(jìn)一步增加。 中國(guó)藥典 2022年版抗生素品種 增修訂概況 一 、概況 : 2022年版藥典抗生素品種收載情況，見表： 品種 原料 新增 制劑 新增 總數(shù) 新增 β 內(nèi)酰胺類 頭孢菌素類 27 11 48 19 75 30 青霉素類與酶抑制劑 20 3 28 6 48 9 碳青酶烯類及單環(huán) β 內(nèi)酰胺類 2 1 2 1 4 2 大環(huán)內(nèi)酯類 13 2 35 4 48 6 氨基糖苷類 14 25 1 39 1 四環(huán)素類 6 12 18 利福霉素類 1 7 8 林可霉素類 2 4 6 酰胺醇類 4 11 15 多肽類與肽類 4 2 4 2 8 4 抗真菌類 3 3 6 抗腫瘤抗生素類 6 2 6 1 12 3 磷霉素類 3 5 8 其他抗生素 3 4 7 喹諾酮類 12 3 34 5 46 8 總計(jì) 120 24 228 39 348 63 ?二、 2022年版藥典抗生素類藥標(biāo)準(zhǔn)增修訂要點(diǎn) : ? 鑒別項(xiàng)下盡可能應(yīng)用專屬性強(qiáng)的鑒別反應(yīng) , 如：光譜法： IR 色譜法：HPLC TLC等，與鈉、鉀、鹽酸鹽、硫酸鹽的鑒別反應(yīng) . 標(biāo)準(zhǔn)中鑒別反應(yīng) HPLC與TLC二法并列。 同時(shí)又用該方法測(cè)定硫酸鹽（ SO4）的含量。 妥布霉素及制劑的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定等。 ? 其他如 : ? 氯霉素類，大環(huán)內(nèi)酯類，氨基糖苷類 ,利福平等均增修訂了有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)。 ? ? 該混合對(duì)照品用于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，測(cè)得的色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致。 ? 有關(guān)物質(zhì)采用自身對(duì)照時(shí)，對(duì)本身純度低于 85%的品種，提出對(duì)自身對(duì)照溶液主峰進(jìn)行校正。 ? 5. 喹諾酮類抗生素的有關(guān)物質(zhì)檢查， EP、 BP、USP均采用 TLC、 HPLC兩種方法進(jìn)行控制。 ? 6. 四環(huán)素類統(tǒng)一了該品種有關(guān)物質(zhì)與含量測(cè)定的HPLC法色譜條件，與 2022年版方法比較有較大改進(jìn)。 ? 8. 紅霉素類經(jīng)對(duì)幾種 HPLC方法比較后，采用同一 HPLC方法檢查紅霉素與其衍生物以及制劑中紅霉素 A、 B、 C及有關(guān)物質(zhì)。 ? 10. 增加有機(jī)溶媒檢查的品種較多。在原來 21個(gè)品種基礎(chǔ)上增加至 42個(gè)品種 . ? 2022年版藥典 β 內(nèi)酰胺類抗生素品種進(jìn)行高分子雜質(zhì)檢查時(shí)，由于該方法的分析周期較長(zhǎng)，本版藥典對(duì)測(cè)定方法進(jìn)一步完善，采用直徑較細(xì)內(nèi)徑為 1cm,長(zhǎng)為 30cm的玻璃柱作為色譜柱。 ? 13. 更多的品種用細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查替代熱原檢查 。 ?三、抗生素品種分類介紹 下面將重點(diǎn)介紹 β 內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、酰胺醇類、利福霉素類、喹諾酮類、抗腫瘤類、肽類的抗生素在新版藥典中的增修訂的情況。 ? 鑒別 ? 原料藥與注射用粉針的鑒別均采用色譜法HPLC，光譜法 IR以及鉀、鈉離子火焰反應(yīng)，也有多個(gè)品種采用 HPLC與 TLC二法并列。 ? ? 檢查溶液的澄清度與顏色是控制 β 內(nèi)酰胺類注射用的原料藥與制劑內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。 ? 頭孢菌素品種有關(guān)物質(zhì)檢查均采用 HPLC法，除頭孢西丁鈉以苯基鍵合硅膠為填充劑外；其他均以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，反相色譜，紫外檢測(cè)。 ? 其中有阿莫西林、阿莫西林鈉、青霉素鈉(鉀 )、青霉素 V鉀、氨芐西林、氨芐西林鈉、氨曲南等原料及其制劑共 27個(gè)品種采用梯度洗脫方法。 ? 如：頭孢克洛規(guī)定 : ? 頭孢克洛峰的保留時(shí)間約為 23分鐘，頭孢克洛峰與頭孢克洛 δ 3異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)不小于 ，頭孢克洛峰的拖尾因子應(yīng)小于 。 ? 用雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法計(jì)算已知雜質(zhì)的含量 ,用加校正因子與不加校正因子的自身對(duì)照法計(jì)算已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的含量和雜質(zhì)的總量。 ? 如：頭孢拉定中已知雜質(zhì)： ? 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（ 7ADCA） ? 雙氫苯苷氨酸（ 220nm） ? 頭孢氨芐 ? 頭孢氨芐中已知雜質(zhì)： ? 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（ 7ADCA） ? α 苯苷氨酸 ? 頭孢羥氨芐中已知雜質(zhì)： ? 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（ 7ADCA） ? α 對(duì)羥基苯苷氨酸 ? 頭孢哌酮鈉中已知雜質(zhì)： ? 雜質(zhì) A（原稱為頭孢哌酮降介物 β ） ? 如：頭孢羥氨芐 : ? 供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，含 α 對(duì)羥基苯甘氨酸和 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算， 均不得過 %；其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面（ %），其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的 3倍（ %） ,供試品溶液色譜圖中任何小于對(duì)照溶液主峰面積 . ? 如：頭孢哌酮鈉 ? 供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，含 雜質(zhì) A按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算， 不得過 %，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的 2倍（ 2％），其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的 3倍（ %） ,供試品溶液色譜圖中任何小于對(duì)照溶液主峰面積 可忽略不計(jì)。 ? 其中 40個(gè)品種以葡聚糖凝膠 G10(40～120μ m)為填充劑的玻璃柱（ ～ 30cm）色譜柱的凝膠色譜法測(cè)定， ? 2個(gè)品種以球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量為 1000－ 5000）為填充劑為色譜柱的 HPLC法測(cè)定。 ? 作為常規(guī)檢驗(yàn)方法有必要進(jìn)行改進(jìn)，考慮到原藥典收載的方法在原理，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以及方法驗(yàn)證專屬性、重現(xiàn)性、準(zhǔn)確性等方面均符合要求，而僅僅是分析周期過長(zhǎng) . ? 因此在研究建立新的方法時(shí)，我們?nèi)圆捎媚z色譜的分離模式，并采用原方法中的自身對(duì)照外標(biāo)法，進(jìn)行高分子聚合物雜質(zhì)的測(cè)定。 Kv=0也降低。 ? 根據(jù)上面公式，分離度隨著聚合物峰高的增大而增大，故加入藍(lán)色葡聚糖 2022的量應(yīng)該有一定的要求，在研究方法時(shí)，根據(jù)品種項(xiàng)下規(guī)定的限度及藍(lán)色葡聚糖 2022在該系統(tǒng)中的響應(yīng)值 ,－般加入的量為聚合物規(guī)定限度響應(yīng)值的 12倍即可。 品種 2022年版藥典方法 F值 改進(jìn)后的方法 F值 相對(duì)偏差 阿莫西林 均值： F=*103 (n=36) 均值： F=*103 (n=31) 177。 % * F值為對(duì)照品溶液濃度 (μ g/ml)與峰面積的比值 表 F值的比較 表 高分子聚合物測(cè)定結(jié)果的比較 品種 批號(hào) 2022年版藥典方法 高聚物含量（ %） 改進(jìn)后的方法 高聚物含量（ %） 相對(duì)偏差 阿莫西林囊 0507501 （聯(lián)邦制藥） 均值： % (n=2) 均值： % (n=4) 177。 ％ 頭孢唑林鈉 CZSS051142 （奧奇特） 均值： % (n=3) 均值： % (n=3) 177。 ? 由于生產(chǎn)工藝的不同，各廠使用的有機(jī)溶媒也不同，同一品種中可能有幾十種的溶媒，為方便操作、經(jīng)試驗(yàn)在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定各溶劑的相對(duì)調(diào)整保留時(shí)間（ RART）， ? 檢查時(shí)可先做供試品，從供試品中檢出的溶媒的 RART與規(guī)定的 RART比較，確定為何種溶媒時(shí)，再進(jìn)行對(duì)照品測(cè)定，可減少工作量，大大降低檢驗(yàn)成本，提高工作效率。 ? 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正丙醇適量，用二甲基亞砜稀釋制成每 1ml中約含 200μ g的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。分別精密稱取各溶劑適量，用內(nèi)標(biāo)溶液定量稀釋制成規(guī)定濃度的溶液，作為混合對(duì)照品溶液，混合對(duì)照品溶液中各溶劑的濃度分別為每 1ml中含甲醇 600 ug、丙酮 1mg、異丙醇 1mg、乙腈 82ug、二氯甲烷 120ug、丁酮 1mg、乙酸乙酯 1mg，四氫呋喃 150 ug、四氯化碳 1 ug、環(huán)己烷 760 ug、苯 1 ug、 1,2二氯乙烷 1 ug、乙酸異丙酯 1mg、二氧六環(huán) 76 ug、甲基異丁基酮1mg、吡啶 40 ug、甲苯 178 ug。方法也收載在 2022年版藥典二部（附錄 Ⅷ L ） . ? 如 :頭孢地嗪鈉、 ? 頭孢呋辛鈉、 ? 頭孢孟多酯鈉、 ? 氨芐西林鈉等。 ? 由于不溶性微粒光阻法測(cè)定結(jié)果僅與一定濃度范圍內(nèi)的樣品溶液成正比關(guān)系，因此在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定不溶性微粒檢查供試品溶液濃度。m以上的微粒不得過 600粒； ? 規(guī)格 （包括 ）的制劑按每 1個(gè)供試品容器中含 10181。 ? 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，反相色譜，紫外檢測(cè)。 ? 如：拉氧頭孢鈉 ? 【 含量測(cè)定 】 照高效液相色譜法（附錄 Ⅴ D ）測(cè)定。 ? 如：頭孢地尼 ? 【 含量測(cè)定 】 照高效液相色譜法（附錄 Ⅴ D ）測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。 ? 測(cè)定法 取本品約 50mg，精密稱定，置 50ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 20μ l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取氨曲南對(duì)照品適量，同法測(cè)定。它們均為多組分抗生素。如圖 。 紅霉素 紅霉素腸溶片 紅霉素腸溶膠囊 紅霉素 A 紅霉素 B 紅霉素 C 修訂 HPLC法 紅霉素 A：對(duì)照品外標(biāo)法計(jì)算； 紅霉素 B：加校正因子自身對(duì)照計(jì)算； 紅霉素 C：自身對(duì)照法計(jì)算。 ? 測(cè)定方法 :HPLC，色譜柱 C1檢測(cè)波長(zhǎng) 232nm ? 紅霉素、乳糖酸紅霉素、硬脂酸紅霉素 ? 紅霉素、乳糖酸紅霉素、硬脂酸紅霉素主要組分均為紅霉素 A、 B、 C . ? 測(cè)定方法： HPLC法，色譜柱 C18 , ? 檢測(cè)波長(zhǎng) 215 nm； ? ? 3個(gè)品種規(guī)定限度相同： ? 紅霉素 A: 以無水物計(jì)不得少于 %，用對(duì)照品外標(biāo)法計(jì)算 . ? 紅霉素 B: 不得大于 5%,用加校正因子（ ）的自身對(duì)照法計(jì)算。 表 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 (1) 品種 方法（ HPLC） 丙酸交沙霉素 231nm 交沙霉素 231nm 克拉霉素 克拉霉素片 克拉霉素膠囊 克拉霉素顆粒 2．檢測(cè)波長(zhǎng) 210nm 阿奇霉素 阿奇霉素干混懸劑 阿奇霉素片 阿奇霉素分散片 阿奇霉素膠囊 阿奇霉素顆粒 TLC法修訂為 HPLC法，無該項(xiàng)檢查的已增訂 （阿奇霉素 Gx為 A偕亞胺醚為 ）與不加校正因子（阿奇霉素 B和其他單個(gè)雜質(zhì)）的自身對(duì)照 210nm ，不同限度 紅霉素 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對(duì)照 215nm 乳糖酸紅霉素 注射用乳糖酸紅霉素 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對(duì)照 215nm 表 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 (2) 品種 方法（ HPLC） 硬脂酸紅霉素 硬脂酸紅霉素片 硬脂酸紅霉素膠囊 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對(duì)照 215nm 依托紅霉素 檢測(cè)波長(zhǎng) 190nm 麥白霉素 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過 25%） 檢測(cè)波長(zhǎng) 232nm 麥白霉素片 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過 30%） 232nm 麥白霉素膠囊 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過 30%） 232nm 羅紅霉素 羅紅霉素片 羅紅霉素分散片 羅紅霉素膠囊 ，并對(duì)該峰定位。 ? 共 25個(gè)制劑，其中 2個(gè)紅霉素腸溶制劑檢查釋放度，其