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gateway技術(shù)——克隆、表達新方法-wenkub

2023-01-27 08:03:42 本頁面
 

【正文】 ,或哺乳動物進行基因的分析表達。 Gateway技術(shù)的靈活性: Gateway技術(shù)的原理 Gateway的原理也是建立在噬菌體 DNA定點整合到細菌宿主基因組上。 ? 整合后的附著位點為 ? attL( BOP’) ? attR( POB’) ? 整合位點 attB attP 切除位點 attL attR ? 整合過程需要 Int和 IHF共同作用 attB x attP →attL x attR 完成構(gòu)建 Gateway表達克隆僅需兩步 ( 1)創(chuàng)建入門克隆 ,通過 PCR或傳統(tǒng)的克隆方法將目的基因克隆進入門載體。根據(jù)入門載體序列的特點,設(shè)計通用引物 和含部分接頭的基因特異性引物 引物設(shè)計: 1通用引物 : attB1 adapter: 5’GGGGACA AGT TTGTACAAA AAAGCAGGCT 3’ attB2 adapter: 5’GGGGAC CACTTTGTACAAGAA AGCTGGGT 3’ 2含部分接頭的基因特異性引物 : attB1+gene forward: 5’AA AAA GCA GGC TNN
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