cr引物設計及相關軟件使用-wenkub
2023-01-27 07:49:46 本頁面
【正文】 核酸擴增技術?，F(xiàn)在 PCR 引物設計大都通過計算機軟件進行。 ?必要時還需對引物進行修飾，如增加限制性內(nèi)切酶位點，引進突變等。 一般原則 3’端的末位堿基對 Taq 酶的 DNA 合成效率有較大的影響。 一般原則 4. 引物序列的 GC 含量一般為 4060%，過高或過低都不利于引發(fā)反應。 一般原則 6. ?G 值是指 DNA 雙鏈形成所需的自由能，該值反映了雙鏈結(jié)構內(nèi)部堿基對的相對穩(wěn)定性。 一般原則 8. 對引物的修飾一般是在 5’端增加酶切位點，應根據(jù)下一步實驗中要插入 PCR 產(chǎn)物的載體的相應序列而確定。引物的 3’端的 ?G 值過高，容易在錯配位點形成雙鏈結(jié)構并引發(fā) DNA 聚合反應。 5. 引物所對應模板位置序列的 Tm 值在 72℃左右可使復性條件最佳。另外，引物二聚體或發(fā)夾結(jié)構也可能導致 PCR 反應失敗。 2. 引物序列在模板內(nèi)應當沒有相似性較高，尤其是 3’端相似性較高的序列，否則容易導致錯配。 引物設計的原則 ?引物與模板的序列要緊密互補 ?引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構 ?引物不能在模板的非目的位點引發(fā) DNA 聚合反應 (即錯配 )。 PCR ?引物設計是 PCR 技術中至關重要的一環(huán)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點；能在一個試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一 DNA片段于數(shù)小時內(nèi)擴增至十萬乃至百萬倍 ,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的 DNA供分析研究和檢測鑒定?？梢灾苯犹峤荒０逍蛄械教囟ňW(wǎng)頁，得到設計好的引物，也可以在本地計算機上運行引物設計專業(yè)軟件。 一般原則 1. 引物
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