cr引物設(shè)計(jì)及相關(guān)軟件使用-wenkub
2023-01-27 07:49:46 本頁(yè)面
【正文】 核酸擴(kuò)增技術(shù)?，F(xiàn)在 PCR 引物設(shè)計(jì)大都通過計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行。 ?必要時(shí)還需對(duì)引物進(jìn)行修飾，如增加限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，引進(jìn)突變等。 一般原則 3’端的末位堿基對(duì) Taq 酶的 DNA 合成效率有較大的影響。 一般原則 4. 引物序列的 GC 含量一般為 4060%，過高或過低都不利于引發(fā)反應(yīng)。 一般原則 6. ?G 值是指 DNA 雙鏈形成所需的自由能，該值反映了雙鏈結(jié)構(gòu)內(nèi)部堿基對(duì)的相對(duì)穩(wěn)定性。 一般原則 8. 對(duì)引物的修飾一般是在 5’端增加酶切位點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)下一步實(shí)驗(yàn)中要插入 PCR 產(chǎn)物的載體的相應(yīng)序列而確定。引物的 3’端的 ?G 值過高，容易在錯(cuò)配位點(diǎn)形成雙鏈結(jié)構(gòu)并引發(fā) DNA 聚合反應(yīng)。 5. 引物所對(duì)應(yīng)模板位置序列的 Tm 值在 72℃左右可使復(fù)性條件最佳。另外，引物二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)也可能導(dǎo)致 PCR 反應(yīng)失敗。 2. 引物序列在模板內(nèi)應(yīng)當(dāng)沒有相似性較高，尤其是 3’端相似性較高的序列，否則容易導(dǎo)致錯(cuò)配。 引物設(shè)計(jì)的原則 ?引物與模板的序列要緊密互補(bǔ) ?引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu) ?引物不能在模板的非目的位點(diǎn)引發(fā) DNA 聚合反應(yīng) (即錯(cuò)配 )。 PCR ?引物設(shè)計(jì)是 PCR 技術(shù)中至關(guān)重要的一環(huán)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一 DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍 ,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的 DNA供分析研究和檢測(cè)鑒定?？梢灾苯犹峤荒０逍蛄械教囟ňW(wǎng)頁(yè)，得到設(shè)計(jì)好的引物，也可以在本地計(jì)算機(jī)上運(yùn)行引物設(shè)計(jì)專業(yè)軟件。 一般原則 1. 引物
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