【正文】 T法系通過改變照射 1H核的脈沖寬度 （ θ ） 或設(shè)定不同的弛豫時間（ De1ay time， 2D3） ， 使不同類型的 13C信號在譜圖上呈單峰并分別呈現(xiàn)正向峰或倒置峰 ， 故靈敏度高 ， 信號之間很少重疊 ， 目前已成為 13CNMR譜的一種常規(guī)測定方法 。 通常主要用于推斷化合物的骨架類型；某些場合下 ， 如香豆素類 、 黃酮類等化合物 ， 它們的 UV光譜在加入某種診斷試劑后可因分子結(jié)構(gòu)中取代基的類型 、數(shù)目及排列方式不同而發(fā)生不同的改變 ， 故還可用于測定化合物的精細結(jié)構(gòu) 。 測得的吸收圖譜叫紅外光譜 。 當(dāng)流動相流過交換柱時 ， 溶液中的中性分子及不與離子交換樹脂交換基團發(fā)生交換的化合物將通過柱子從柱底流出 ， 而具有可交換的離子則與樹脂上的交換基團進行離子交換并被吸附到柱上 ， 隨后改變條件 ， 并用適當(dāng)溶劑從柱上洗脫下來 ， 即可實現(xiàn)物質(zhì)分離 。 ① SephadexG 型只適于在水中應(yīng)用 ， 且不同規(guī)格適合分離不同分子量的物質(zhì) 。 前兩者系利用半透膜的膜孔或凝膠的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的分子篩濾過作用；超濾法則利用因分子大小不同引起的擴散速度的差別 。 分子篩性是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)的性質(zhì)所決定 。 ② 成鍵位置對吸附力也有影響 。 （ 2） 活性炭 為非極性吸附劑 ， 與硅膠 、 氧化鋁相反 ， 對非極性物質(zhì)具有較強的親和能力 ， 在水中對溶質(zhì)表現(xiàn)出強的吸附能力 。 硅膠 、 氧化鋁因均為極性吸附劑 ， 故有以下特點： ① 對極性物質(zhì)具有較強的親和能力 ， 極性強的溶質(zhì)將被優(yōu)先吸附 。 根據(jù)烴基 （ R） 長度分別命名為 RP RP8及 RP18。 物質(zhì)在兩相溶劑中相對作逆流移動 ， 在移動過程中不斷進行動態(tài)分配而得以分離的方法 。 ③ 分配比與 pH 對酸性 、 堿性及兩性有機化合物來說 ， 分配比還受溶劑系統(tǒng)pH的影響 。 此時如果其中含有溶質(zhì) ， 則溶質(zhì)在兩相溶劑中的分配比（ K） 在一定的溫度及壓力下為一常數(shù) ， 可以用下式表示： K＝ CU / C L K：表示分配系數(shù)； CU：表示溶質(zhì)在上相溶劑中的濃度； CL：表示溶質(zhì)在下相溶劑中的濃度 。 （ 4） 酸性或堿性化合物還可通過加入某種沉淀試劑使之生成水不溶性的鹽類等沉淀析出 。 （ 2） 在溶液中加入另一種溶劑以改變混合溶劑的極性 ， 使一部分物質(zhì)沉淀析出 ， 從而實現(xiàn)分離 。 但此法時間較長 。 【 重點與難點提示 】 一 、 有效成分常用提取方法及特點 1． 溶劑法 （ 1） 浸漬法 適用于成分遇熱不穩(wěn)定的或含大量淀粉 、 樹膠 、果膠 、 粘液質(zhì)中藥 。 ：結(jié)晶法 、 兩相溶劑萃取法 、 各種柱色譜法 （ 包括硅膠 、 氧化鋁 、 聚酰胺譜 、 凝膠柱色譜和大孔樹脂吸附色譜等 ） 。 、 膜過濾法和分餾法在中藥化學(xué)成分分離中的應(yīng)用 。 （ 2） 滲漉法 消耗溶劑量大 、 費時長 、 操作比較麻煩 。 2． 水蒸氣蒸餾法：適用于具有揮發(fā)性的 ， 能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞 ， 且難溶或不溶于水的成分的提取 。 如在藥材濃縮水提取液中加入數(shù)倍量高濃度乙醇 ， 以沉淀除去多糖 、 蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì) （ 水 /醇法 ） ；或在濃縮乙醇提取液中加入數(shù)倍量水稀釋 ，放置以沉淀除去樹脂 、 葉綠素等水不溶性雜質(zhì) （ 醇 /水法 ） 等 。 例如酸性化合物可作成鈣鹽 、鋇鹽 、 鉛鹽等；堿性化合物如生物堿等 ， 則可作成苦味酸鹽 、苦酮酸鹽等有機酸鹽或磷鉬酸鹽 、 磷鎢酸鹽 、 雷氏鹽等無機酸鹽 。 ② 分離難易與分離因子 β分離因子 β值用來表示分離的難易 。 因為 pH變化可以改變它們的存在狀態(tài) （ 游離型或離解型 ） ， 從而影響在溶 劑系統(tǒng)中的分配比 。 正相色譜與反相色譜 液 液分配柱色譜用的載體主要有硅膠 、 硅藻土及纖維素粉等 。 3． 根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進行分離 以固 液吸附用得最多 ，并有物理吸附 、 化學(xué)吸附及半化學(xué)吸附之分 。 ② 溶劑極性越弱 ， 則吸附劑對溶質(zhì)將表現(xiàn)出較強的吸附能力 。 溶劑極性降低 ， 則活性炭對溶質(zhì)的吸附能力也隨之降低 。 易形成分子內(nèi)氫鍵者 ， 其在聚酰胺上的吸附即相應(yīng)減弱 。 大孔吸附樹脂現(xiàn)在已被廣泛應(yīng)用于天然化合物的分離和富集工作中 ， 如苷與糖類的分離 、 生物堿的精制 。 以上這些方法主要用于水溶性大分子化合物 ， 如蛋白質(zhì) 、 核酸 、 多糖類的脫鹽精制及分離工作 ， 對分離小分子化合物來說不太適用 。 ② 羥丙基葡聚糖凝膠 （ Sephadex LH20） 不僅可在水中應(yīng)用 ， 也可在極性有機溶劑或它們與水組成的混合溶劑中膨潤使用 。 三 、 結(jié)構(gòu)研究方法 1. 質(zhì)譜 （ MS） 可用于確定分子量及求算分子式和提供其它結(jié)構(gòu)信息 。 許多特征官能團可據(jù)此進行鑒別 。 4. 核磁共振譜 (1) 1HNMR 測定中通過化學(xué)位移 （ δ ） 、 譜線的積分面積以及裂分情況 （ 重峰數(shù)及偶合常數(shù) J） 可以提供分子中 1H的類型 、 數(shù)目及相鄰原子或原子團的信息 ， 對有機化合物的結(jié)構(gòu)測定具有十分重要的意義 。 【 本章練習(xí)題 】 一 . A 型題 （ 單選 ） A .回流法 E .升華法 A壓力高 B吸附劑的顆粒小 C流速快 D有自動記錄 E操作簡單 A丙酮 B乙醇 C乙酸乙酯 D水 E正丁醇 ， 可以透過半透膜的成分為 A多糖 B蛋白質(zhì) C樹脂 D葉綠素 E無機鹽 A硅膠色譜法 BAl2O3色譜法 C凝膠過濾法 D聚酰胺 E離子交換樹脂 A丙酮 B甲醇 C二甲基甲酰 D水 E NaOH水溶液 A分餾 B回流法 C連續(xù)回流法 D水蒸氣蒸餾法 E升華法 , 固定相是 A纖維素 B濾紙所含的水 C展開劑中極性較大的溶劑 D醇羥基 E 有機溶劑 13C信號在圖譜上作為單峰出現(xiàn)采用的是技術(shù) A DEPT法 B全氫去偶技術(shù) C同位素法 D偏共振去偶 E選擇氫核去偶 10只適于在水中應(yīng)用的是 A sephadex G B sephadex LH20 C硅膠 G D聚酰胺 E大孔吸附樹脂 A皂苷類 B糖類 C生物堿類 D強心苷類 E黃酮苷類 12 DEPT譜中 ， 出現(xiàn)倒峰的是 (θ =135o ) A季碳 B叔碳 C仲碳 D伯碳 E全部 13自中藥中提取含揮發(fā)性成分時不宜采用的方法是 A浸漬法 B 滲漉法 C 煎煮法 D 回流提取法 E連續(xù)提取法 14用于判斷分子結(jié)構(gòu)中是否有無共軛體系的是 A IR B UV C MS D 1HNMR E 13CNMR 15兩相溶劑萃取法分離混合物中各組分的依據(jù)是 A結(jié)構(gòu)類型不同 B化學(xué)性質(zhì)不同 C極性差異較小 D極性差異較大 E分配系數(shù)不同 16離子交換色譜法 ， 適用于下列 （ ） 類化合物的分離 Ａ萜類 Ｂ生物堿 Ｃ淀粉 Ｄ甾體類 E 糖類 17堿性氧化鋁色譜通常用于 （ ） 化合物的分離 Ａ香豆素類Ｂ生物堿類Ｃ酸性Ｄ酯類 E黃酮類 18用 TLC檢測化合物的純度時 ， 多采用 A一種展開系統(tǒng) B二種展開系統(tǒng) C三種展開系統(tǒng) D四種展開系統(tǒng) E一種展開系統(tǒng)并更換多種顯色方式 19不易燃的有機溶劑是 A甲醇 B丙酮 C乙酸乙酯 D石油醚 E四氯化碳 20 與水不能互溶的溶劑是 A甲醇 B 乙醇 C丙酮 D正丁醇 E冰醋酸 二 B型題 (配伍題 ) [21—25] A 大孔吸附樹脂 B 凝膠過濾法 C 硅膠色譜法 D 液－液萃取法 E 聚酰胺 21根據(jù)分子大小進行分離的方法是 22主要用于極性較大的物質(zhì)的分離和富集的吸附劑是 23用正丁醇將皂苷類成分從水溶液中分離出來的方法是 24分離黃酮苷元類成分最適宜的方法是 25常用于分離酸性物質(zhì)的吸附劑是 [26—30] A 酸堿法 B 水醇法 C醇醚法 D 活性炭 E 熱析法 2６欲純化總皂苷通常采用方法是 2７提取生物堿常用方法是 28用于除去親脂性色素的是 29除去生藥中多糖常用的方法是 30在溶液中加入無機鹽促使有效成分析出的方法是 [3135] A 季胺生物堿 B 纖維素 C 皂苷類 D 油脂 E 黃酮苷類 31從中藥的乙醇提取液中加入數(shù)倍量石油醚后可能析出的成分是 32采用堿提酸沉法的成分是 33在中藥醇提液加入數(shù)倍量水后可能析出的成分是 34能溶于石油醚的是 35能溶于水的是 三 x題型 （ 多項選擇題 ） 36提取分離中藥有效成分時需加熱的方法是 A 浸漬法 B 回流法 C 鹽析法 D 升華法 E 滲漉法 37不與水互溶的溶劑 A 乙醇 B 乙醚 C 乙酸乙酯 D 正丁醇 E丙酮 38通常認為是無效成分或是雜質(zhì)的是 A 皂苷類 B 樹脂 C 萜類 D 氨基酸類 E 油脂 39利用分子篩原理對物質(zhì)進行分離的方法 A 透析法 B 硅膠色譜 C 凝膠過濾法 D 聚酰胺 E Al2O3 40可用于化合物的純度測定的方法有 A 薄層色譜 (TLC) B 氣相 (GC) C HPLC D 熔點 E 均勻一致的晶型 第二章 生物堿 【 學(xué)習(xí)要點 】 1． 掌握生物堿的含義及結(jié)構(gòu)特征 。 5 掌握生物堿的提取分離原理和方法 。 9． 熟悉生物堿的分類及其在動 、 植物界的分布和存在情況 。 13． 熟悉馬錢子 、 烏頭的主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)類型 、 毒性和鑒別方法 。 ② 雙稠哌啶類：喹諾里西丁母核 。 3． 異喹啉類的結(jié)構(gòu)特征及代表化合物 。 主要由色氨酸衍生而成 。 典型例子是 從長春花分得的抗癌藥長春堿 、 長春新堿等 。 pKb值越小 , 酸性越大；相反 , pKa值越大 , 堿性越強 。 (2) 電性效應(yīng)與堿性的關(guān)系 ① 誘導(dǎo)效應(yīng) 生物堿分子中氮原子上電荷密度受到分子中供電基 (如烷基等 )和吸電基 (如芳環(huán) 、 ?；?、 醚氧 、 雙鍵 、 羥基等 )誘導(dǎo)效應(yīng)的影響 。 (3)空間效應(yīng) 盡管質(zhì)子的體積較小 , 但生物堿氮原子質(zhì)子化時 , 仍受到空間效應(yīng)的影響 , 使其堿性增強或減弱 。 而異和鉤藤堿的鹽則無類似氫鍵的形成 , 故前者堿性大于后者 。 （ 3） 親脂性有機溶劑提取 一般操作方法是將提取材料用堿水 (石灰乳 、Na2CO3溶液或 10％ 氨水等 )潤濕后 , 再用有機溶劑如 CH2Cl CHCl CCl4或苯等直接進行固－液提取 。 濾取沉淀 , 用少量水洗滌 1~2次 , 抽干 , 將沉淀溶于丙酮 (或乙醇 )中 , 過濾 , 濾液即為雷氏生物堿復(fù)鹽丙酮 (或乙醇 )溶液 。 若欲利用這種方法系統(tǒng)分離生物堿 , 則常采用 pH梯度萃取 。 高速逆流色譜儀的出現(xiàn) , 則更開拓了這方面的應(yīng)用 。 四 、 生物堿沉淀反應(yīng) 1． 常用生物堿沉淀試劑的名稱 有碘化鉍鉀試劑 (Dragendorff39。s reagent)等 。麻黃堿、咖啡堿需用其他檢識反應(yīng)鑒別，在生物堿的檢識中還應(yīng)注意假陽性結(jié)果的排除。 2． 掌握苷類化合物的一般性狀 、 溶解度和旋光性 。 7． 熟悉苷類化合物中常見糖的種類 、 結(jié)構(gòu)和紙色譜鑒定法 。 、 蒽醌苷 、 苯丙素苷 、 生物堿苷 、 三萜苷等 。 凡有利于苷鍵原子質(zhì)子化和中間體形成的一切因素均有利于苷鍵的水解 。 ④ 由于五元呋喃環(huán)是平面結(jié)構(gòu) ， 各取代基處于重疊位置比較擁擠 ， 酸水解時形成的 中間體使擁擠狀態(tài)有所改善 ， 環(huán)的張力減少 ， 故呋喃糖苷較吡喃糖苷的水解速率大 50~100倍 。 ⑦ 當(dāng)苷元為小基團時 ， 由于橫鍵上的原子易于質(zhì)子化 ， 故橫鍵的苷鍵較豎鍵易水解 。該法特別適合于那些苷元不穩(wěn)定的苷和碳苷的裂解 。 ：多用水或醇提取 ， 提取原生苷時注意抑制或破壞酶的活性 。 通常具有游離羥基的部位即是糖的連接位點 。 4苷鍵的構(gòu)型 苷鍵構(gòu)型的確定方法有核磁共振法 、 酶解法 、 分子旋光差法 （ Klyne法 ）等 ， 其中目前最常用的是核磁共振法 。 ② 在吡喃糖中端基碳的碳氫偶合常數(shù) （ 1JC1H1） 也可用于確定苷鍵的構(gòu)型 。 3． 掌握蒽醌類化合物的酸性及酸性強弱與結(jié)構(gòu)的關(guān)系 。 7． 掌握丹參中所含主要醌類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu) 、 鑒定方法和生物活性 。 11． 了解蒽醌類化合物的 MS裂解規(guī)律 。 蒽酚 （ 或蒽酮 ） 的羥基衍生物一般存在于新鮮植物中 ， 該類成分可以慢慢被氧化成蒽醌類成分；中藥大黃 、 番瀉葉中致瀉的主要成分番瀉苷 A、 B、 C、 D等皆為二蒽酮類衍生物 。 （ 2） Borntrager反應(yīng)：羥基醌類在堿性溶液中發(fā)生顏色改變 ， 會使顏色加深 。