【正文】 料； * 根據(jù)情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐R床試驗(yàn)。 2．培養(yǎng)基主要成份 * 變更前、后的培養(yǎng)基成份改變情況、檢測方法及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢定報(bào)告； * 培養(yǎng)基成份改變對產(chǎn)品有效成分生物學(xué)影響的技術(shù)數(shù)據(jù)和驗(yàn)證資料； * 非 BSE 牛源地的證明材料。 變更引起產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量發(fā)生改變的，需要按新藥申報(bào)程序進(jìn)行申報(bào)為 I 類，請參考《藥品注冊管理辦法》附件 4 藥品補(bǔ)充申請注冊事項(xiàng)及申報(bào)資料要求； 變更可能對產(chǎn)品的安全和有效性有影響的為 II 類，需報(bào) SFDA 審批； 一般不影響產(chǎn)品安全性和有效性的為 III 類，需報(bào) SFDA 備案。 本指導(dǎo)原則首先以國 家頒布的相關(guān)法規(guī)及技術(shù)指導(dǎo)原則為基礎(chǔ)，并應(yīng)符合國家的相關(guān)要求，如國家現(xiàn)行 GMP 規(guī)范要求。 （三）進(jìn)行臨床試驗(yàn)的疫苗必 須由中國藥品生物制品檢定所進(jìn)行質(zhì)量復(fù)核。 12．佐劑的質(zhì)量評價：如最終制品含有佐劑，則應(yīng)建立佐劑含量以及與之結(jié) 合率的檢測方法，并制定相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。由于穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果直接與制品的效期有關(guān)，且試驗(yàn)觀察時間較長，因此應(yīng)在生產(chǎn)工藝確定后盡早留樣進(jìn)行，定期取樣測定制品效力和其他相關(guān)的質(zhì)量指標(biāo)；對穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果與加速穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析對比，可為正式產(chǎn)品的有效期確定提供依據(jù)。 7．抗生素檢測：預(yù)防用疫苗在生產(chǎn)過程中不得添加青霉素或其他 β 內(nèi)酰氨類抗生素；如在生產(chǎn)過程中添加除上述以外的其他抗生素，應(yīng)建立相應(yīng)的檢測方法并規(guī)定抗生素殘留量的要求。 4．宿主細(xì)胞 DNA 和蛋白殘留量檢測：采用傳代細(xì)胞生產(chǎn)疫苗，應(yīng)限制疫苗中的宿主細(xì)胞 DNA 和蛋白殘留量，進(jìn)行方法研究時應(yīng)建立相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品，并對檢測試劑的敏感性和特異性進(jìn)行驗(yàn)證。 五、質(zhì)量控制及檢定的要求 （一）生產(chǎn)過程中質(zhì)量監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)的建立及要求 在生產(chǎn)工藝的各個環(huán)節(jié)和步驟中的產(chǎn)品均應(yīng)建立相應(yīng)的監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，以便后續(xù)工藝的進(jìn)行 ,保證產(chǎn)品的質(zhì)量、工藝的穩(wěn)定性。而且要建立劑量與生物效價的關(guān)系，通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化免疫程序和接種途徑。 （四）疫苗的配方研究 應(yīng)對疫苗的配方進(jìn)行研究，如疫苗中添加的穩(wěn)定劑成分，緩沖液、佐劑、以及凍干疫苗的賦形劑成分等是否對疫苗造成影響。 2．疫苗對佐劑的要求 目前能用于疫苗的佐劑多為氫氧化鋁，而鋁佐劑通常使疫苗產(chǎn)生的抗體滯后，且增加注射局部的副反應(yīng)機(jī)率。生產(chǎn)用菌毒種、細(xì)胞和涉及生產(chǎn)的工藝技術(shù)應(yīng)注意專利，應(yīng)進(jìn)行相關(guān)專利查詢。 6．減毒特性 （ 1）如研制減毒活疫苗應(yīng)對原始菌毒株的生物學(xué)、血清型、基因型和免疫原性進(jìn)行研究；減毒方法、減毒過程、減毒程度和減毒后的生物學(xué)、血清型、基因型和免疫原性，并進(jìn)行減毒前后的特性對比，尤其要 對減毒后的安全性和免疫原性作出確切的結(jié)論； （ 2）應(yīng)建立減毒特性指標(biāo)的驗(yàn)證方法、動物模型和減毒后安全性的標(biāo)準(zhǔn)以及檢測和警戒毒力回復(fù)的依據(jù)等； （ 3）對制備注射劑的減毒活疫苗，除一般的外源因子檢測外，還應(yīng)驗(yàn)證無逆轉(zhuǎn)錄病毒的污染。 3．外源因子檢查：按照現(xiàn)行版《中國藥典》的相關(guān)要求進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定，取樣量應(yīng)足夠檢測試驗(yàn)的需要。種子批的建立應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國藥典》 “生物制品制品檢定用菌毒種管理規(guī)程 ”的要求，應(yīng)對種子批進(jìn)行菌毒種的傳代和限定代次的研究，以證明主種子和工作種子批在規(guī)定代次內(nèi)的生物學(xué)特性與原始菌毒種的一致性。 2．用動物分離病毒，對所用動物名稱、品系、級別、年齡、接種途徑、飼養(yǎng)條件和制備毒種的動物臟器名稱等須詳細(xì)記載；如再適應(yīng)到細(xì)胞，則還應(yīng)參照上述對分離用細(xì)胞的要求。 4．鑒于人類的血液在同一時間內(nèi)較少感染多種病毒或細(xì)菌，而咽試子、漱口液、痰液、尿液、糞便等樣品難免污染其他外源因子，因此用病人血液分離的菌、毒株較適宜用于研究疫苗。這種評價將是該方案能否獲得批準(zhǔn)的重要依據(jù)之一。 國家食品藥品監(jiān)督管理局 二 ○○五年十月十四日 預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則 前 言 由病毒、細(xì)菌或其他病原微生物為起始材料，經(jīng)培養(yǎng)增殖制成的減毒、滅活的病原體，或再經(jīng)純化、裂 解、亞單位（包括細(xì)菌類毒素）等方法處理制備的富含免疫原性，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫學(xué)反應(yīng)而達(dá)到預(yù)防某種疾病的產(chǎn)品，為預(yù)防用疫苗。 本指導(dǎo)原則適用于用病毒、細(xì)菌或其他病原微生物制備的預(yù)防用疫苗，其目的是為該類制劑提供一個共同的原則，指導(dǎo)制定臨床前研究的方案，和確定具體的研究內(nèi)容。 二、用于疫苗研究用的菌毒種 研究疫苗所用的菌毒種必須證明為引起本病的細(xì)菌、病毒或其他病原體，如該菌毒株分離自人體，下述內(nèi)容必須清楚。 5．分離菌、毒株的其他自然樣本名稱、來源、數(shù)量、取樣方法等。 3．確定分離菌株所用培養(yǎng)基名稱、種類，以及分離培養(yǎng)的溫度和條件。 （五）菌毒種的檢定 1．鑒別試驗(yàn)：可采用血清學(xué)、生物學(xué)、核酸序列分析等方 法證明為該菌毒種。 4．?dāng)U增能力和感染性滴度：應(yīng)能達(dá)到按生 產(chǎn)工藝要求順利生產(chǎn)合格疫苗的要求。該驗(yàn)證方法可采用 PERT 法； （ 4）如已知該病毒具有嗜神經(jīng)毒性，其驗(yàn)證要求可參考《 IABS Scientific workshop on neurovirulence test for live virus vaccines, WHO,31 January 2022》。 （二）生產(chǎn)用細(xì)胞和 /或培養(yǎng)基 1．生產(chǎn)用細(xì)胞應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國藥典》中 “生物制品生產(chǎn)用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程 ”的要求，如用傳代細(xì)胞系應(yīng)建立三級細(xì)胞庫； 2．生產(chǎn)用培養(yǎng)基盡可能避免使用動物來源和可能引起人體不良反應(yīng)的原材料，禁止使用來自瘋牛病疫區(qū)的牛源性原材料。如疫苗的抗原能滿足免疫的需要，則不加佐劑為宜。 四、藥理、毒理和生物分布 疫苗不同于一般的化學(xué)藥品，藥理、毒理的實(shí)驗(yàn)要求具有特殊性，因此，該制品的藥理學(xué)試驗(yàn)主要包括發(fā)生作用的原理、生物效價與劑量的關(guān)系、免疫程序和接種途徑與效果的關(guān)系等；在毒理學(xué)方面主要考慮接種部位和全身的 病理反應(yīng)、以及機(jī)體對該疫苗的非期望的免疫應(yīng)答反應(yīng)和這種反應(yīng)的持續(xù)時間。若無法建立動物模型，應(yīng)建立能驗(yàn)證該疫苗有效性的體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評價。 （二）產(chǎn)品的質(zhì)量檢定與要求 1．外觀檢查：根據(jù)樣品的特征建立外觀的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。疫苗中殘余宿主細(xì)胞 DNA 及蛋白殘留量可參考現(xiàn)行版《中國藥典》的相關(guān)要求。 8．滅活效果的驗(yàn)證：由于制備疫苗的病原體一般均對人類致病，因此應(yīng)建立有效的滅活方法對該制品中的病原體進(jìn)行滅活，并應(yīng)對滅活效果進(jìn)行驗(yàn)證；在成品檢定中應(yīng)建立滅活劑殘留量檢測的方法和限度標(biāo)準(zhǔn)。 11．效力試驗(yàn)（生物效價）：由于用于預(yù)防的疫苗是通過機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)發(fā)生作用的，因此應(yīng)評價其體液免疫和細(xì)胞免疫的生物效價。 13．疫苗標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的研究：對于一種新疫苗而言，建立檢測疫苗的效力、免疫原性或毒性用標(biāo)準(zhǔn)品或參考品對判斷驗(yàn)室研究階段與批量投產(chǎn)后的疫苗質(zhì)量是否一致以及臨床試驗(yàn)的評價是非常重要的。 生物制品生產(chǎn)工藝過程變更管理技術(shù)指導(dǎo)原則 前 言 本指導(dǎo)原則適用于已經(jīng)取得生產(chǎn)文號的生物制品生產(chǎn)過程等發(fā)生變更的管理技術(shù)指導(dǎo)原則，所指生物制品生產(chǎn)過程變更是指生產(chǎn)者對已獲國家藥品管理當(dāng)局批準(zhǔn)的生產(chǎn)全過程中的任何過程所進(jìn)行的任何變動。 一、原則 （一）任何生產(chǎn)過程的改動都是以提高產(chǎn)品的安全性和有效性為基本出發(fā)點(diǎn)，在提高或至少不改變最初國家批準(zhǔn)產(chǎn)品安全性和有效性的基礎(chǔ)上進(jìn)行相關(guān)改進(jìn)。詳見下表。 3．菌毒種、細(xì)胞株主代種子庫 * 種子庫制備、分析、檢定資料； * 連續(xù) 3 批產(chǎn)品質(zhì)量分析資料，包括生產(chǎn)各關(guān)鍵階段中間品、成品的分析、生物學(xué)檢測； * 應(yīng)進(jìn)行必要的安全、有效性研究，包括臨床試驗(yàn)。 7．分離、純化方法的變更 * 變更說明； * 驗(yàn)證資料； * 變更前、后主要有效成分生物學(xué)變化的研究； * 變更前、后連續(xù) 3 批產(chǎn)品質(zhì)量分析資料，包括生產(chǎn)各關(guān)鍵階段中間產(chǎn)品、原液及終產(chǎn)品的分析、檢測及穩(wěn)定性研究資料； * 應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐R床試驗(yàn)。 聯(lián)合疫苗臨床前和臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則 前 言 聯(lián)合疫苗是指含有二個或多個活的、滅活的生物體或者提純的抗原，由生產(chǎn)者聯(lián)合配制而成，用于預(yù)防多種疾病或由同一生物體的不 同種或不同血清型引起的疾病。本指導(dǎo)原則亦將隨科學(xué)技術(shù)發(fā)展和經(jīng)驗(yàn)積累而逐步完善。有時聯(lián)合疫苗中的某種成分會對其他的一種或多種活性組分起到抑制或增強(qiáng)的作用，例如：當(dāng)全細(xì)胞百日咳疫苗與滅活脊髓灰質(zhì)炎疫苗（ IPV）聯(lián)合后會使百日咳的效力下降；另外，當(dāng)用活疫苗配制聯(lián)合疫苗時，可產(chǎn)生病毒間或病毒亞型間的免疫干擾，其免疫應(yīng)答比單病毒組分疫苗的免疫應(yīng)答要低；由活疫苗配制的聯(lián)合疫苗，也可 能發(fā)生組分間的重組反應(yīng)，可能使減毒活疫苗毒力回復(fù)。還應(yīng)當(dāng)考慮到聯(lián)合疫苗中的每一組分都有可能通過聯(lián)合使毒力回復(fù)。 （三）佐劑對聯(lián)合疫苗的影響 應(yīng)研究佐劑與其他組分間的相容性及對每一成分的吸附度，同時還應(yīng)考慮多個組分若同時吸附時的吸附效率和動力學(xué)。 （五）穩(wěn)定性和有效期 在穩(wěn)定性和有效期的研究時，應(yīng)使用三批成品考核實(shí)際貯存時間內(nèi)制品的穩(wěn)定性，以制定該制品的有效期。所制定的成品有效期應(yīng)當(dāng)確保制品在其總有效期內(nèi)（即有效期開始前的貯存期加上成品的有效期）各組分都是穩(wěn)定和合格的?？刹捎孟率雎?lián)合配比方法的距陣表或采用隨機(jī)采樣法，例如： X、 Y、 Z 等組分配制的聯(lián)合疫苗可采用每一組分的第一批聯(lián)合后得到成品為第一批，即 X1+Y1+Z1+...N1 配制得到最終成品為批號 1， X2+Y2+Z2+...N2 配制得到最終成品為批號2， X3+Y3+Z3+...N3 配制得到最終成品為批號 3。 （二）效力試驗(yàn) 應(yīng)當(dāng)測定聯(lián)合疫苗中各有效組分的效力，其效價應(yīng)當(dāng)達(dá)到單價制品的規(guī)程要求。效力試驗(yàn)應(yīng)能證實(shí)組分間的相互作用使某一種組分對其他組分產(chǎn)生增強(qiáng)或減弱作用。 對于一個新的疫苗或者聯(lián)合疫苗中含有人體未曾使用過的新抗原，只要有 動物模型，就應(yīng)當(dāng)首先用動物模型對其保護(hù)力進(jìn)行研究。 （三）鑒別試驗(yàn) 應(yīng)對聯(lián)合疫苗中每一活性組分進(jìn)行檢定，目的是證明制品的內(nèi)容物與其標(biāo)簽的標(biāo)示相一致。在此種情況下則不要求對成品進(jìn)行熱原檢查。 （一）安全性研究 一般來講，聯(lián)合疫苗的安全性研究是與同時在不同部位接種聯(lián)合疫苗中的每一種單價組分疫苗進(jìn)行比較，例如，接種 DTPHB 疫苗與分別接種 DTP 和 HB 疫苗進(jìn)行比較。觀察的不良反應(yīng)包括全身反應(yīng)如：發(fā)熱、不適、頭疼、嘔吐、哭鬧，及紅斑、硬結(jié)、疼痛、 觸痛等局部反應(yīng)；以及不常見或罕見的不良反應(yīng)。在臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)包含各組分免 疫原性與其保護(hù)性之間關(guān)系研究的要求。 免疫原性比較研究的目的旨在證明聯(lián)合疫苗接種后各組份疫苗的免疫應(yīng)答與同時分別接種聯(lián)合疫苗中的各單組份疫苗后的免疫應(yīng)答之間是否有顯著區(qū)別。 用于臨床驗(yàn)證的制品批數(shù)可 以比用于生產(chǎn)一致性研究的批數(shù)少。 （三）有效性研究 每一組分的有效性均應(yīng)經(jīng)過臨床試驗(yàn)得到證明。如果一個免疫學(xué)的保護(hù)性相關(guān)指標(biāo)在能夠確定質(zhì)和量的相互關(guān)系時，就可以代替流行病學(xué)指標(biāo)。 如果聯(lián)合疫苗免疫后產(chǎn)生的抗體水平低于單價組分疫苗，但仍能達(dá)到保護(hù)性作用的，應(yīng)提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)或資料證明其保護(hù)的有效性及持久性。因此可采用相應(yīng)的替代方案。如果在臨床上已經(jīng)證明了血清學(xué)和有效性存在著相關(guān)關(guān)系時，可以使用免疫原性數(shù)據(jù)推斷其有效性。按照受試者的特性（如：年齡或者到達(dá)試驗(yàn)點(diǎn)的日期）分組的方法不符合隨機(jī)分配的原則。 對于免疫應(yīng)答，一般分析接種后的 GMT 或 GMR（應(yīng)答率的幾何均值），通常是為了排除聯(lián)合疫苗和分別注射的單價組分疫苗間在臨床上有意義的差別。 臨床結(jié)果分析時，應(yīng)同時進(jìn)行血清的陽轉(zhuǎn)率與抗體滴度的分析比較研究。因此，在分析時應(yīng)將單部位接種的反應(yīng)（聯(lián)合疫苗組）與多部位接種（對照組）當(dāng)中反應(yīng)最嚴(yán)重的一點(diǎn)進(jìn)行比較。 總之，聯(lián)合疫苗的研發(fā)和臨床試驗(yàn)不同于一般疫苗，除一般要求以外，還應(yīng)充分考慮多種組分聯(lián)合后產(chǎn)生的相互作用對聯(lián)合后疫苗的安全性和有效性的影響，以及是否產(chǎn)生毒性逆轉(zhuǎn)或重組。傳統(tǒng)疫苗一 般由兩種方式制備，一種為能誘發(fā)免疫力卻不致病的減毒疫苗，例如黃熱病、脊髓灰質(zhì)炎和麻疹疫苗或卡介苗；另一種為滅活疫苗（例如百日咳桿菌、狂犬病毒、傷寒桿菌）。多肽作為體內(nèi)引起效應(yīng)細(xì)胞免疫應(yīng)答形成的免疫原，將成為一種新型的疫苗，但還有很多理論和技術(shù)問題要繼續(xù)研究，目前尚無多肽疫苗獲準(zhǔn)上市。 其次應(yīng)選擇合適的合成方法。這些側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)必須能耐受除去 α－氨基保護(hù)基團(tuán)的條件，這樣才能生成新的氨基基團(tuán)使肽鏈得以繼續(xù)延長。片段濃縮法是經(jīng)典的 合成技術(shù)。 另外也引入一些新進(jìn)展包括改良的保護(hù)基因、新的固相載體、脫保護(hù)及側(cè)鏈功基保護(hù)等新方法。 （二）應(yīng)說明每條肽段所針對的抗原表位。如果采用了液體合成法，應(yīng)當(dāng)提供包括對中間體有特殊說明的流程圖。 （五）對肽單體或肽衍生物應(yīng)建立適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)。 （八）偶聯(lián)物 偶聯(lián)物中多肽及其它成分除了達(dá)到適當(dāng)?shù)?