酶分子修飾壓縮ppt課件-wenkub
2023-01-23 05:48:02 本頁面
【正文】 20世紀(jì) 80年代發(fā)展起來的一種基因操作技術(shù)。 應(yīng)用最廣的修飾劑 ? 聚乙二醇 是線性分子，溶解度高，具有良好的生物相容性，在體內(nèi)無毒性、無殘留、無抗原性，分子末端有可活化的羥基，活化后可以與酶產(chǎn)生交聯(lián)，因而，它被廣泛用于酶的修飾。 ? 修飾劑的活化 ：作為修飾劑中含有的基團往往不能直接與酶分子的基團進行反應(yīng)而結(jié)合在一起。 ? 用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，通過 共價鍵 連接于酶分子的表面，形成一層覆蓋層。 酚基修飾劑 ?蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基上含有酚基。 氨基修飾 ?使酶分子側(cè)鏈上的氨基發(fā)生改變的化合物，稱為氨基修飾劑 ?修飾劑 :乙酸酐、二硝基氟苯、碘代乙酸等。 一、化學(xué) 修飾分類 ? （一）酶分子主鏈修飾 ? （二）酶分子側(cè)鏈基團修飾 ? （三）大分子結(jié)合修飾 ? （四）氨基酸置換修飾 ? （五）金屬離子置換修飾 ? （六）親和修飾 （一） 酶分子主鏈修飾 ?利用酶分子主鏈的切斷和連接，使酶分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的特性和功能的方法。酶分子修飾具抗原性不穩(wěn)定、活性不夠高、條件溫和高效性、專一性、反應(yīng)酶??????什么是酶分子修飾？ ? 通過各種方法使酶分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的某些特性和功能的技術(shù)過程稱為 酶分子修飾 。 ?主鏈切斷修飾 ?主鏈連接修飾 主鏈切斷修飾 主鏈切斷的三種情況： ?活性中心破壞 —— 失活 ?活性中心完整 —— 保持活性，改變抗原性 ?有利于活性中心的形成 —— 顯示活性或活力提高 胃蛋白酶原的激活 H C l胃 蛋 白 酶 原p H 1 . 5 ～ 2（ 從 N 端 失 去 4 4 個 氨 基 酸 殘 基 ）自 身 激 活胃 蛋 白 酶胰蛋白酶原的激活 胰凝乳蛋白酶原的激活 主鏈連接修飾 ?將兩種或兩種以上的酶通過主鏈連接在一起，形成一個酶分子具有兩種或多種催化活性。 ?含有氨基的氨基酸：賴氨酸等 羧基修飾劑 ?可與酶蛋白側(cè)鏈上的羧基發(fā)生反應(yīng)的小分子化合物稱為羧基修飾劑。 ?修飾方法：碘化法、硝化法等 ?修飾劑： N乙酰咪唑、碘、四硝基甲烷等。 共價修飾 大分子修飾 (共價 )的過程 ? 修飾劑的選擇 ：大分子結(jié)合修飾采用的修飾劑是水溶性大分子。在使用之前一般需要經(jīng)過 活化 ，然后才可以與酶分子的某側(cè)鏈基團進行反應(yīng)。 ? 可用多種不同試劑活化，修飾不同基團 聚乙二醇均三嗪、聚乙二醇琥珀酰亞胺 聚乙二醇馬來酸酐、聚乙二醇胺 ? 將酶分子肽鏈上的某一個氨基酸換成另一個氨基酸的修飾方法稱為 氨基酸置換修飾 (四 ) 氨基酸置換修飾 ? 氨基酸或核苷酸的置換修飾可以采用 化學(xué)修飾方法 例如， Bender等成功地利用化學(xué)修飾法將枯草桿菌蛋白酶活性中心的 絲氨酸轉(zhuǎn)換為半胱氨酸 ，修飾后，該酶失去對蛋白質(zhì)和多肽的水解能力，卻出現(xiàn)了催化硝基苯酯等底物水解的活性。是指在 DNA序列中的某一 特定位點 上進行堿基的改變從而獲得突變基因的操作技術(shù)。 作用范圍 ?含有金屬離子的酶 金屬酶特點：金屬離子往往是酶活性中心的組成部分，對酶的活性起重要作用。 金屬離子置換修飾的過程 ? a. 酶的分離純化 ：首先將欲進行修飾的酶經(jīng)過分離純化，除去雜質(zhì)，獲得具有一定純度的酶液。 ? c. 加入置換離子 ：于去離子的酶液中加入一定量的另一種金屬離子，酶蛋白與新加入的金屬離子結(jié)合，除去多余的置換離子，就可以得到經(jīng)過金屬離子置換后的酶。 二、酶修飾后的性質(zhì)變化 ? 熱穩(wěn)定性 ：一般來說，熱穩(wěn)定性有較大的提高。由于酶分子經(jīng)修飾后，增強對熱、蛋白酶、抑制劑等的穩(wěn)定性，從而延長了在體內(nèi)的半衰期。 回本章目錄 側(cè)鏈基團修飾的主要作用 ? 酶的結(jié)構(gòu)、特性和功能的影響。其中： ? 對酶性質(zhì)的了解： 活性部位、穩(wěn)定條件、反應(yīng)最佳條件及側(cè)鏈基團性質(zhì)等； ? 選擇修飾劑考慮： 1）分子量、修飾劑鏈長和對蛋白吸附性； 2）修飾劑上反應(yīng)基團的數(shù)目及位置； 3）修飾劑上反應(yīng)基團的活化方法和條件（一般要求較大分子量、良好的生物相容性和水溶性、分子表面有較多反應(yīng)活性基團）； ? 選擇酶反應(yīng)條件要注意： 1）反應(yīng)體系的溶劑性
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1