酶分子修飾壓縮ppt課件-文庫吧在線文庫
【正文】 為 酶分子修飾 。 氨基修飾 ?使酶分子側(cè)鏈上的氨基發(fā)生改變的化合物，稱為氨基修飾劑 ?修飾劑 :乙酸酐、二硝基氟苯、碘代乙酸等。 ? 用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，通過 共價鍵 連接于酶分子的表面，形成一層覆蓋層。 應(yīng)用最廣的修飾劑 ? 聚乙二醇 是線性分子，溶解度高，具有良好的生物相容性，在體內(nèi)無毒性、無殘留、無抗原性，分子末端有可活化的羥基，活化后可以與酶產(chǎn)生交聯(lián)，因而，它被廣泛用于酶的修飾。 定點突變過程 酶分子結(jié)構(gòu)設(shè)計（根據(jù)已知的酶結(jié)構(gòu)和其存在的問題） 突變基因序列的確定（考慮物種差異） 突變基因的獲得（ DNA合成儀＋ PCR） 新酶的獲得（重組、轉(zhuǎn)入宿主、表達） （五）金屬離子置換修飾 ? 概念 ? 作用范圍 ? 常用金屬離子 ? 方法步驟 概念 ?通過改變酶分子中所含金屬離子，使酶的特性和功能發(fā)生改變的方法。此時，酶往往成為無活性狀態(tài)。 ? 半衰期 ：一般在體內(nèi)的半衰期得到有效延長。為此，有時需要通過反復(fù)試驗來確定。 信息，如某一氨基酸殘基被修飾后，酶活力完全喪失，說明該殘基是酶活性所“必需”的，為什么是必需的，還得用 X射線和其他方法來確定。 ?該基因的序列 。 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)測定 ? 1）一級結(jié)構(gòu)測定 ? 2）三維結(jié)構(gòu)測定 ? 3） 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分類 1）一級結(jié)構(gòu)測定 ?蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定是蛋白質(zhì)立體結(jié)構(gòu)測定的前提 , 其 基本步驟 是 : ?①應(yīng)用化學(xué)裂解法或蛋白酶水解法將多膚鏈專一性 裂解 , 得到一系列 肽 段 。 分辨率 分辨率 分辨率 分辨率 分辨率 分辨率 分辨率 分辨率 ②多維磁共振法 ?多維磁共振法近年來發(fā)展較快 , 可以直接測定蛋白質(zhì)在溶液中的構(gòu)象 , 但對樣品的需要量大、純度要求高 , 被測定的蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量一般不超過 20220, 因此其應(yīng)用也受到很大限制。 ?從遺傳信息到最后的遺傳物質(zhì)的表達即具有活性的蛋白質(zhì) , 可以說包含兩組密碼 , 從 DNA 到蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu) , 再從一級結(jié)構(gòu)到空間結(jié)構(gòu)。 教案引言 (2) 反向折疊法 ? 蛋白質(zhì)反向折疊又稱蛋白質(zhì)逆折疊。 酶體外定向進化的意義 ? 理論上，蛋白質(zhì)分子蘊藏著很大的 進化潛力 ，很多功能有待于開發(fā)，這是酶的體外定向進化的基本先決條件。 ?試管中的進化是生物工程的未來 —— 諾貝爾獎金獲得者 M. Eigen 定向進化的原理 ? 在待進化酶基因的 PCR擴增反應(yīng)中，利用 Taq DNA聚合酶不具有 3’ 5’ 校對功能的性質(zhì)，配合適當條件，以很低的比率向目的基因中 隨機引入突變 ，構(gòu)建突變庫，憑借 定向的選擇 方法，選出所需性質(zhì)的優(yōu)化酶 (或蛋白質(zhì) )，從而排除其他突變體。 ? 因此 , 若知道了同源蛋白家族中某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu) , 就可以預(yù)測其他一些序列已知而結(jié)構(gòu)未知的同源蛋白的結(jié)構(gòu) , 可以用同源模型構(gòu)建的方法預(yù)測未知蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。 ? ③既有 α—螺旋 , 又有 β—折疊 , 又可分為兩類 α /β類 : α—螺旋和 β—折疊交替出現(xiàn) , 如黃素氧化還原蛋白 。 2）三維結(jié)構(gòu)測定 ? 測定蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的方法主要有兩類 : ? ①蛋白質(zhì)晶體 X 線衍射法 。 ? 在對于天然的蛋白分子的研究還未總結(jié)出可以基本涵蓋絕大多數(shù)情況的結(jié)構(gòu)與功能的規(guī)律之前 , 酶的蛋白質(zhì)工程 不可能成為主要的創(chuàng)造新酶源的 手 段 。 變性、誘導(dǎo)與構(gòu)象重建 （對酶高級結(jié)構(gòu)調(diào)整） 酶肽鏈 變性 松散后，使其在有底物類似物或抑制劑存在的非天然條件下 復(fù)性 ，酶將折疊成所需要的特殊結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生新的性狀，此即變性誘導(dǎo)構(gòu)象重建的原理。 在酶結(jié)構(gòu)功能研究中： ，如酶的活性中心研究； ； 。 ? Km的變化 ：大
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