[醫(yī)藥衛(wèi)生]第六章動(dòng)物細(xì)胞制藥-wenkub
2023-01-19 11:57:54 本頁(yè)面
【正文】 基因拷貝數(shù)，從而獲得能高效表達(dá)的穩(wěn)定的工程細(xì)胞株。 牛痘病毒：構(gòu)建多價(jià)疫苗； 腺病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒：用于基因治療； 桿狀病毒：作載體用于外源基因表達(dá)。 二倍體細(xì)胞系：原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)傳代、篩選、克隆，而從多種細(xì)胞成分的組織中挑選并純化出某種具有一定特征的細(xì)胞株。 蛋白質(zhì)的合成途徑和修飾功能與細(xì)菌不同。 正常二倍體細(xì)胞的壽命是有限的。 兼性貼壁細(xì)胞：有些細(xì)胞的生長(zhǎng)不嚴(yán)格地以來(lái)于支持物，它既可以貼附于支持物表面上生長(zhǎng)，也可以在培養(yǎng)基中呈懸浮狀態(tài)良好地生長(zhǎng)。 貼壁細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)必須有給以貼附的支持物表面，細(xì) 胞依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面生長(zhǎng)、增殖。當(dāng)細(xì)胞在該表面生長(zhǎng)后，一般形成兩種形態(tài)：成纖維樣細(xì)胞型、上皮樣細(xì)胞型。 第一節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)與生理特點(diǎn) 二、動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞的生理特點(diǎn) 細(xì)胞的分裂周期長(zhǎng)：一般需要 1248h，隨不同的種屬不同而不同。隨著年齡增大而細(xì)胞的培養(yǎng)代數(shù)會(huì)減少。 第二節(jié) 生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的獲得 一、生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的獲得 什么樣的細(xì)胞才能允許用以生產(chǎn)人用的藥品，這一直是一個(gè)引起人們爭(zhēng)論的熱點(diǎn) 。 二倍體細(xì)胞株仍具有正常細(xì)胞的特點(diǎn)： A、 2n染色體核型 B、具有明顯的貼壁依賴(lài)和接觸抑制 C、只有有限的增殖能力、一般可連續(xù)傳代培養(yǎng) 50代。 桿狀病毒作為載體的優(yōu)點(diǎn)： ①是雙 DNA，易于重組； ②插入 78個(gè) bp的 DNA不會(huì)影響正常正常病毒粒子的形成； ③多角體蛋白質(zhì)和病毒粒子的形成無(wú)直接關(guān)系，因此用外源基因更換多角體蛋白基因，仍能形成有感染力的病毒粒子； ④多角體蛋白基因有強(qiáng)啟動(dòng)子，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可占全部蛋白質(zhì)的 2030%； ⑤用顯微鏡可以看到多角體，可以此為標(biāo)記物來(lái)挑選陽(yáng)性克??； ⑥如果用家蠶桿狀病毒，可以在家蠶體內(nèi)直接表達(dá)外源基因。 三、常用生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的特性（自學(xué)） 四、細(xì)胞庫(kù)的建立 除原代細(xì)胞外，其他的細(xì)胞株、細(xì)胞系，無(wú)論是二倍體細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞、融合細(xì)胞還是經(jīng)重組的工程細(xì)胞，一旦建立后都要建立細(xì)胞庫(kù)加以保存。 ④ MWCB細(xì)胞還需確定其最高使用的傳代數(shù)。 （ 2）器材的消毒滅菌：所有培養(yǎng)用的器材和液體必須進(jìn)行嚴(yán)格的消毒滅菌處理，方法有：物理消毒 紫外線、干熱、濕熱、過(guò)濾；化學(xué)法 化學(xué) 消毒劑和抗生素。 pH：最適 — ，常在培養(yǎng)基中加入緩沖系統(tǒng)：Na2HPO4/NaH2PO4， NaHCO3/CO2， Tricineglycine等。 ℃ ，昆蟲(chóng)為27℃ 。用動(dòng)物細(xì)胞制藥之所以成本高，培養(yǎng)基的復(fù)雜和昂貴是其主要原因。 合成培養(yǎng)基的組成： ①氨基酸類(lèi)： 12種必須氨基酸。 葡萄糖、谷氨酰胺。還有 FeSO4,CuSO4,ZnSO4等 ⑤ 其他成分：合成核酸的前體物質(zhì)，如腺苷、鳥(niǎo)苷、胞苷、尿苷、胸苷。 無(wú)血清培養(yǎng)基中一般需要加入： A、激素和生長(zhǎng)因子； B、結(jié)合蛋白； C、貼附和伸展因子； D、其他利于細(xì)胞生長(zhǎng)的因子和元素：如消除氧自由基損害的谷胱苷肽，微量元素如硒等。培養(yǎng)條件比較均一，傳質(zhì)和傳氧較好，容易擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模。 缺點(diǎn)：操作比較麻煩，需要合適的貼壁材料和足夠的面積，培養(yǎng)條件不易單一，傳質(zhì)和傳氧較差。其他如膠原酶、鏈霉蛋白酶、木瓜酶等。 優(yōu)點(diǎn)：可創(chuàng)造相當(dāng)大的貼附面積，供細(xì)胞貼附生長(zhǎng)增殖。有利于細(xì)胞均勻分布在各
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