動物模型的建立與應(yīng)用-wenkub
2023-05-23 08:51:48 本頁面
【正文】 本質(zhì) 動物模型設(shè)計(jì)原則： ?相似性：復(fù)制模型應(yīng)盡可能近似人類疾病，最好能找到與人類疾病相同的動物自發(fā)性疾病。 在生物醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用動物模型是利用不同種類動物之間生物學(xué)現(xiàn)象的一致性。疾病動物模型的復(fù)制 定義： 是生物醫(yī)學(xué)研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動物 實(shí)驗(yàn)對象和材料。例如，我們希望測試在一種動物中存在的某個(gè)系統(tǒng)，將獲得的知識外推到另一種動物，而模擬的目標(biāo)通常為人類。如大鼠自發(fā)性高血壓、小型豬自發(fā)性冠狀動脈粥樣硬化。 ?適用性和可控性：復(fù)制模型應(yīng)盡量考慮今后臨床能應(yīng)用和便于控制其疾病的發(fā)展，以利于開展研究工作。而且有些人類疾病不能用人工方法誘發(fā)出來，有它的局限性。人類 SARS冠狀病毒可以致恒河猴發(fā)病，但是其病變嚴(yán)重程度要明顯輕，疾病的結(jié)局也顯然不同。 現(xiàn)在已經(jīng)記載和保存了數(shù)百個(gè)具有模擬人類相似疾病狀態(tài)的遺傳性異常的品種和品系（ 典型例子： ? 自發(fā)性高血壓大鼠 ? 裸小鼠 自發(fā)性疾病模型的特點(diǎn) 自發(fā)性疾病模型通常是同源性模型，動物疾病的 表型 表現(xiàn)與相應(yīng)的人類疾病相似。因?yàn)榻幌敌∈蟮募膊⊥ǔ橐粋€(gè)受累基因或部位產(chǎn)生了變異，可同時(shí)研究與這些突變小鼠相同的遺傳背景的參照品系。 ? 有些自發(fā)性疾病模型不便于應(yīng)用。 基因敲除動物： 通過基因工程手段將已知基因去除，或用其他順序相近基因取代，而獲得的工程化動物。 ? 不但能從動物整體水平和組織器官水平上進(jìn)行研究，而且還可以深入到細(xì)胞水平和分子水平，為發(fā)病機(jī)制、藥物篩選和臨床醫(yī)學(xué)研究提供了比較理想的實(shí)驗(yàn)體系。 例如 ， 利用轉(zhuǎn)基因小鼠的研究證實(shí)除了單一的癌基因可以引起腫瘤外 ， 癌基因之間的協(xié)同作用也可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生 。陰性模型因此也包括表現(xiàn)對特定刺激缺乏反應(yīng)的動物。在動物體內(nèi)無毒或無效的藥物在人類體內(nèi)可能有毒或有效，反之亦然。 ? 70年代后期我國開始引進(jìn)裸鼠 免疫缺陷動物的分類 ? 先天性免疫缺陷動物： T淋巴細(xì)胞功能缺陷動物 裸鼠 B淋巴細(xì)胞功能缺陷動物 CBA/N小鼠 NK細(xì)胞功能缺陷動物 Beige小鼠 聯(lián)合免疫缺陷小鼠 SCID小鼠 ? 獲得性免疫缺陷動物模型 小鼠 AIDS模型 猴 AIDS模型 黑猩猩的 HIV感染模型 一 、 裸小鼠 無胸腺裸小鼠，含有隱性突變基因 nu，位于 11號染色 體。裸鼠對麻風(fēng)桿菌高度易感。 ? 在遺傳學(xué)方面：裸鼠的遺傳因素、免疫缺陷指標(biāo)及組織學(xué)特征均與人類免疫缺陷病相似，是研究這些疾病的發(fā)病機(jī)理和遺傳規(guī)律的重要模型。 能接受人類正常組織和腫瘤的異種移植，由于其體形大，可提供足夠的血樣進(jìn)行血液學(xué)和血清生化分析實(shí)驗(yàn)。 內(nèi)源性 NK細(xì)胞功能缺乏，是由于細(xì)胞溶解作用的識別過程受損所致。 五、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠（ Severe bined immunodeficient mice， SCID） 1. 1983年由美國學(xué)者 Bosma首先發(fā)現(xiàn)于 鼠，位于 16號染色體的 scid的單個(gè)隱性突變基因所致。淋巴結(jié)無明顯皮質(zhì)區(qū)，呈淋巴細(xì)胞脫空狀。 NK細(xì)胞功能 正常，巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和紅細(xì)胞等呈正常狀態(tài) . 5. 滲漏 ：大部分 SCID小鼠缺乏功能性淋巴細(xì)胞，但少數(shù) SCID小鼠在飼養(yǎng)過程中可出現(xiàn)極少程度的免疫功能恢復(fù)，即約有15%的 SCID小鼠血清中可檢測出免疫球蛋白，這與小鼠的年齡、品系和飼養(yǎng)環(huán)境有關(guān)。 ，是自身免疫性疾病的良好模型 七、人工培育的先天性聯(lián)合免疫缺陷動物 1. 將 3種小鼠的 3個(gè)隱性突變基因即 Beige基因、 T細(xì)胞缺陷的 nu基因以及 B細(xì)胞缺陷的 xid基因經(jīng)過雜交、篩選及導(dǎo)入，育成 T、 B、 NK細(xì)胞三連缺陷的 Beigenudexid小鼠。 (2) 多數(shù)腫瘤呈結(jié)節(jié)狀生長，周圍有膜包裹，極少可有局部 侵潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其組織形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)等均保持移植 前腫瘤的特征。 ? 一些生物學(xué)特性的丟失。 ? 體內(nèi)和體外研究互補(bǔ)配合進(jìn)行觀察 ? 利用動物模型可進(jìn)行藥物篩選 ? 在動物體內(nèi)進(jìn)行連續(xù)傳代后的腫瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)中也易獲得長期生存，可提高培養(yǎng)的成功率 （ 6）裸鼠移植瘤的評估 三、裸鼠腫瘤移植模型具有的優(yōu)點(diǎn) ，其它鼠類需另加去免疫措施，其條件恒定性受個(gè)體差異的影響。 裸鼠的飼養(yǎng)條件： SPF環(huán)境 隔離器，超凈層流架， SPF級潔凈飼養(yǎng)室 人體腫瘤裸鼠移植方法 （一）移植腫瘤的常規(guī)處理及移植方法： 組織塊移植法：新鮮的手術(shù)標(biāo)本切成 36mm3 接種 懸液移植法：大批量接種實(shí)驗(yàn) 培養(yǎng)細(xì)胞法：對數(shù)生長期的細(xì)胞 106107 /
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