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質(zhì)粒dna的抽提、純化與檢測-wenkub

2023-05-21 23:02:07 本頁面
 

【正文】 堿裂解法提取質(zhì)粒操作步驟 ? 步驟 1中可用移液槍將殘留液體吸取,勿吸到沉淀。 原理示意圖 溶液 Ⅰ : 50mmol/L葡萄糖 , ( ) 10mmol/L EDTA , 25mmol/L TrisHCl 溶液 Ⅱ : , 1% SDS 溶液 Ⅲ : , [K+]=3mol/L, ( ) [Ac]=5mol/L 重懸細(xì)菌;保護(hù)和緩沖作用 裂解細(xì)菌 蛋白、 DNA變性 中和 NaOH 質(zhì)粒 DNA復(fù)性 染色質(zhì) DNA、蛋白不能復(fù)性 重要試劑 堿裂解法 提取質(zhì)粒的 流程 離心收集菌體 溶液 III中和 溶液 I充分重懸 溶液 II裂解 上清液 抽提 離心洗滌 酒精沉淀 干燥溶解 沉淀 質(zhì)粒 DNA溶液 1. 取 1mL菌液于 , 10000rpm離心 1min, 棄上清 。 質(zhì)粒 作為載體的質(zhì)粒: ? 多克隆位點(diǎn) ? 選擇標(biāo)記 ? 容納較大的外源 DNA 質(zhì)粒的特性: ? 相對(duì)獨(dú)立性 ? 獨(dú)立的復(fù)制單位 ? 賦予宿主細(xì)胞一些表型 ? 與宿主菌染色體 DNA不同 質(zhì)粒 提取質(zhì)粒 DNA的 目的與意義 ?基因載體 /基因克隆 /基因工程: 在基因工程中,常用人工構(gòu)建的質(zhì)粒作為載體。YL1 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(綜合性) 質(zhì)粒 DNA的抽提、酶切及電泳鑒定 常規(guī) PCR技術(shù) 感受態(tài)細(xì)胞的制備及重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 真核細(xì)胞基因組 DNA的分離、純化與檢測 YL2 質(zhì)粒 DNA的抽提、酶切及 電泳鑒定 實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)安排 上午:質(zhì)粒 DNA 的提取與純化 中午: 質(zhì)粒 DNA 的酶切 下午: 電泳鑒定 ?質(zhì)粒 (plasmid):是細(xì)菌、酵母菌和放線菌中自然存在的獨(dú)立于染色體外、具有復(fù)制能力的小分子共價(jià)閉合環(huán)狀雙鏈 DNA。人工
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