【正文】 ......... 9 第 2 章 實驗材料及方法 .................................................................................. 10 用凱氏定氮法測定牛奶中的蛋白質(zhì)含量 ......................................... 10 實驗儀器及藥品 ......................................................................... 10 實驗操作及步驟 ......................................................................... 10 雙縮脲法測定牛奶中的蛋白質(zhì)含量 ................................................. 12 實驗儀器及藥品 ......................................................................... 12 實驗操作及步驟 ......................................................................... 12 考馬斯亮藍法測定牛奶中的蛋白質(zhì)含量 ......................................... 15 實驗儀器及藥品 ......................................................................... 15 實驗操作及步驟 ......................................................................... 15 反相高效液相色譜法測定牛奶中的三聚氰胺及尿素的含量 ......... 18 實驗儀器及藥品 ......................................................................... 18 實驗操作及步驟 ......................................................................... 18 第 3 章 實驗結果與分析 .................................................................................. 21 凱氏定氮法的實驗數(shù)據(jù)處理及結果分析 ......................................... 21 IV 實驗數(shù)據(jù)及處理 ..........................................................................21 實驗結果及分析 ..........................................................................22 雙縮脲法的實驗數(shù)據(jù)處理及結果分析 ..............................................22 樣品摻雜處理中所需尿素和三聚氰胺溶液的濃度計算 ..........22 標準蛋白曲線的繪制 ..................................................................22 雙縮脲法對摻雜尿素溶液的未知樣品溶液中的蛋白質(zhì)含量的測定 .....................................................................................................................23 雙縮脲法對摻雜三聚氰胺的未知樣品溶液中的蛋白質(zhì)含量的測定 .....................................................................................................................25 考馬斯亮藍法的 實驗數(shù)據(jù)處理及結果分析 ......................................26 樣品摻雜處理中所需尿素和三聚氰胺溶液的濃度計算 ..........26 標準蛋白曲線的繪制 ..................................................................26 考馬斯亮藍法對摻雜尿素的未知樣品溶液中的蛋白質(zhì)含量的測定 .....................................................................................................................28 考馬斯亮藍法對摻雜三聚氰胺的未知樣品溶液中的蛋白質(zhì)含量的測定 .............................................................................................................29 反向高效液相色譜法的實驗數(shù)據(jù)處理及結果分析 ..........................30 尿素標準曲線和三聚氰胺標準曲線的繪制 ..............................30 反向高效液相色譜法測樣品中的尿素和三聚氰胺 ..................33 結論 .....................................................................................................................36 參考文獻 .............................................................................................................37 致謝 .....................................................................................................................40 附錄 1 開題報告 ................................................................................................41 附錄 2 文獻綜述 ................................................................................................44 附錄 3 中文譯文 ................................................................................................47 附錄 4 外文原文 ................................................................................................56 第 1章 緒論 1 第 1章 緒論 課題背景 隨著經(jīng)濟的快速發(fā)展，人民生活水平的不斷提高，以及營養(yǎng)知識的 普及和宣傳，越來越多的人開始注重在飲食方面的質(zhì)量，越來越多的人追求營養(yǎng)的均衡發(fā)展。 關鍵詞 牛奶蛋白質(zhì)；凱氏定氮法；雙縮脲法；考馬斯亮藍法；反相高效液相色譜法；有機溶劑沉淀法 燕山大學本科生畢業(yè)設計（論文） II Abstract In this paper, the Kjeldahl method, biuret method, Coomassie brilliant blue method and high performance liquid chromatography(HPLC), respectively, for milk and milk mixed with urea and melamine test samples analyzed and measured by several methods for parison. In the biuret method and Coomassie brilliant blue method for sample pretreatment of choice is an anic solvent precipitation method using acetonitrile extract the protein in milk. HPLC with reversedphase chromatography using ZORBAX300SBC18 column (250 mm mm, 5 μm) and a UV detector, using standard addition method for pure milk sample content of urea and melamine the detection and analysis. Through analysis and parison of results shows that, with the Kjeldahl nitrogen content measured by the total nitrogen content of the milk, the method consumes a long time and plicated operation. With the biuret method and Coomassie blue staining than Kjeldahl method is simple and rapid, and these two methods can also be quickly and accurately detect the protein content. By reversedphase highperformance liquid chromatography peaks when the sample in place will not be interference from other ponents in milk, it can be used in dairy products of urea and melamine accurate detection and analysis. Keywords Kjeldahl method。高效液相色譜法是用的反相色譜法，使用 ZORBAX300SBC18色譜柱（ 250 mm mm， 5 μm）和紫外檢測器，用標準添加法對純牛奶樣品中的尿素和三聚氰胺的含量進行了檢測分析。 分析比較幾種方法，并提出自己的看法。 基 本 要 求 掌握各種檢測方法的基本原理，明確每種檢測方法的基本內(nèi)容，熟練掌握分光光度計，高效液相色譜儀等儀器的使用方法。 參 考 資 料 中國期刊數(shù)據(jù)庫 蛋白質(zhì)的檢測方法與乳制品中蛋白含量測定 奶制品中蛋白質(zhì)測定方法相關文獻 周 次 第 1 ～ 4 周 第 5～ 10 周 第 11～ 13周 第 14～ 16 周 第 17～ 20 周 應 完 成 的 內(nèi) 容 查 閱 相 關文獻，了解 奶制品中氮含量的測定方法，提交文獻綜述。 撰寫畢業(yè)論文，提交論文。 通過對結果的分析以及對比可知，用凱氏定氮法測得的氮含量是牛奶中的總氮含量，該方法消耗時間長，操作繁瑣。 biuret method。蛋白質(zhì)作為人類最重要的營養(yǎng)物質(zhì)之一 , 是生物體細胞的重要組成成分，有許多的生物學功能。在這種情況下，在巨大的經(jīng)濟利益的誘惑下，一些不法商販開始在牛乳中摻雜使假，以從中謀求暴利。例如 20xx 年的三鹿奶粉事件所造成的后果和社會影響說明，乳品質(zhì)量好壞與否不僅關系到嬰幼兒和青少年的健康成長，也關系到無數(shù)家庭的幸福、社會的和諧以及我們國家 的形象。目前蛋白質(zhì)的測定方法主要有凱氏定氮法、分光光度法、和滴定法等 [5]。其中，凱氏定氮法是國家標準和國際標準中首推的蛋白質(zhì)的檢測方法。硼酸吸收氨后使溶液中的氫離子的濃度降低 ,用標準無機酸滴定吸收后的硼酸溶液 ,直到恢復溶液中原來氫離子濃度時為止 ,最后根據(jù)所消耗標準酸的當量數(shù)即可計算出待測物中的總氮量 ,再乘以蛋白質(zhì)系數(shù)即為蛋白質(zhì)的含量 [7]。所以該方法一般是在實驗室通風性較好的條件下由訓練有素的人員來完成 [11]。在強堿性溶液 （ NaOH） 中，雙縮脲 能與銅離子（ Cu2+）作用， 生 成紫紅色絡合物（該物質(zhì)的分子結構式見圖 12），該