【正文】 ?? ??? ? ? 8 硼和鉬對(duì)培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)積累的調(diào)控??????????? ? ? ?????? 9 硼和鉬對(duì)細(xì)胞中蛋白質(zhì)積累的調(diào)控 ??????????????????? 10 4 討論 ??????????????????????????? ?? ???? 11 結(jié)論????????????????????????? ??? ?????? 13 致謝?????????????????????? ?? ?????? ? ??? 14 參考文獻(xiàn)????????????????????????? ??? ???? 15 附錄 A??????????????????????? ???? ?????? 17 附錄 B????????????????????????? ???? ???? 18 淮海工學(xué)院二○○七屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 第 1 頁(yè) 共 19 頁(yè) 1 引言 鹽藻 ,即杜氏藻 ( Dunaliella salina),為單細(xì)胞藻類 ,外包一層膠鞘 ,無(wú)細(xì)胞壁 ,是綠藻門、團(tuán)藻目、多鞭毛科的一個(gè)屬 ,約 30 個(gè)種 ,其中最具代表性和應(yīng)用最廣的是鹽生杜氏藻。Mo 80μg/L、 B 4mg/L。Mo 60μg/L、 B 2mg/L。 所以 在 鹽藻的培養(yǎng)過(guò)程中 ，不僅應(yīng)注意單一元素的濃度，而且要考慮元素之間的平衡，同時(shí)還需注意它們之間的互作效應(yīng)，以便收到最佳的效果。Mo 80μ g/L、 B 4mg/L。Mo 60μ g/L、 B 2mg/L。 淮 海 工 學(xué) 院 畢業(yè)設(shè)計(jì) (論文 )說(shuō)明書 題 目： 硼、鉬對(duì)鹽藻生長(zhǎng)與物質(zhì)積累的影響 作 者： 陳 震 東 學(xué) 號(hào)： 5203102202 系 (院 )： 海洋學(xué)院 專業(yè)班級(jí) ： 生物技術(shù) 生技 032 指導(dǎo)者： 郭 金 耀 教 授 評(píng)閱者： 秦 蕾 副 教授 2020年 6 月 連 云 港 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）中文摘要 硼、鉬對(duì)鹽藻生長(zhǎng)與物質(zhì)積累的影響 摘 要： 本實(shí)驗(yàn)設(shè)定 Mo 40μg/L、 B 2mg/L。Mo 60μ g/L、 B 4mg/L。Mo 80μ g/L、 B 6mg/L 九種 硼和鉬的組合 ， 研究其 對(duì)鹽藻細(xì)胞生長(zhǎng)和物質(zhì)積累的影響。 關(guān)鍵詞： 鹽藻 硼 鉬 物質(zhì)積累 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）外文摘要 Regulation of B and Mo on Growth and Material Accumulation of Dunaliella salina Abstract: This experiment was conducted to determine the effects of B and Mo on growth and material accumulation of Dunaliella salina at 9 different groups(Mo 40μg/L、 B 2mg/L。Mo 60μg/L、 B 4mg/L。Mo 80μg/L、 B 6mg/L).The results showed B and Mo are the necessary elements to the growth and Material Accumulation of Dunaliella Salina. In the given concentrations of these two binations, only this bination (B: 6mg/g, Mo: 60ug/L) is the optimum condition to the growth of Dunaliella salina and material accumulation of βcarrot and protein in the culture medium. The contain of βcarrot and protein of the solo cell in this condition(Mo 60μg/L、 B 6mg/L) is the lowest of all, and in that condition(Mo 40μg/L、 B 6mg/L), the contain of βcarrot and protein of the solo cell is the relative analysis indicated that during the cultivation of Dunaliella Salina, we should not only pay attention to the solo element but also to the balance of every element and their influences, only in this way can we achieve the perfect result. Keywords: Dunaliella salin。鹽藻個(gè)體呈梨形、卵形或橢圓形 ,具有兩條等長(zhǎng)的鞭毛 ,可自由游動(dòng)。生長(zhǎng)于海水及咸水湖、鹽湖等高鹽環(huán)境下 ,是耐鹽性強(qiáng)的單細(xì)胞藻類。 鹽藻的研究概況 β 胡蘿卜素除了在人體內(nèi)按需要轉(zhuǎn)變?yōu)?VA 外 ,還具有保護(hù)機(jī)體免受輻射損傷、延緩機(jī)體衰老及防癌、抗癌作用 ,可增強(qiáng)機(jī)體免疫力 。其中有些甚至對(duì)人體有害，遠(yuǎn)不能滿足人類的要求。鹽藻累積的 β胡蘿卜素其順式異構(gòu)體最多可占 60%以上。 因此 ， 鹽藻被認(rèn)為是一種大有發(fā)展前途的經(jīng)濟(jì)作物 。日本在以色列也建立了鹽藻養(yǎng)殖場(chǎng)。 1986 年天津輕工部制鹽所在聯(lián)合國(guó)開(kāi)發(fā)計(jì)劃署援助下引入藻種 ,成功的實(shí)現(xiàn)了 β 胡蘿卜素的工廠化生產(chǎn)。硼與許多植物細(xì)胞壁的果膠層中半乳糖醛酸鼠李聚糖組成 B— RG— II復(fù)合物，此復(fù)合物又與果膠多糖形成果膠網(wǎng)絡(luò) [15]。缺硼還可增強(qiáng)核酸酶、蛋白酶和果膠酶等酶的活性，導(dǎo)致核酸、蛋白質(zhì)、果膠等分解加快，從而加速植物細(xì)胞的衰老和死亡。通過(guò)這種作用，硼影響生長(zhǎng)迅速的分生組織、花粉管的穩(wěn)定性、花粉的萌動(dòng)及生長(zhǎng)。硼的間接作用可能與花蜜中糖量增高 及其組成的變化有關(guān)，使蟲(chóng)媒植物的花對(duì)昆蟲(chóng)更有吸引力。缺硼植株中積累生長(zhǎng)素（吲哚乙酸）。吲哚乙酸只在維管植物中形成，它參與木質(zhì)部導(dǎo)管的分化。酚類化合物積累抑制吲哚乙酸氧化酶的活性。硼能促進(jìn)葡萄糖 1磷酸的循環(huán)和糖的轉(zhuǎn)化。硼有利于豆科作物固氮。 硼在綠色植物中起到如此重要的作用因此它 也應(yīng)該對(duì) 綠色藻類鹽藻 的生長(zhǎng)及代謝產(chǎn)物的積累有相當(dāng)重要的影響。植物中大多數(shù)鉬都集中在這種酶中，這是一種水溶性鉬黃 蛋白，存在于葉綠體被膜中。硝酸還原酶是誘導(dǎo)酶，硝酸鹽濃度高誘導(dǎo)硝酸還原酶活性提高。所有生物固氮系統(tǒng)都需要固氮酶。傳遞 1個(gè)電子給氮分子可使其還原為氨分子，同時(shí)鎂 ATP還原生成鎂 ADP和無(wú)機(jī)磷酸鹽。 鉬促進(jìn)磷的吸收和水解各種磷酸酯的磷酸酶活性，增加植物體內(nèi) VC 的合成。葉肉脫落殘缺或發(fā)育不全。 在鹽藻培養(yǎng)過(guò)程中，各種培養(yǎng)條件均會(huì)影響鹽藻的生長(zhǎng)和其體內(nèi)的物質(zhì)積累 [21， 22]，硼和鉬這兩種 元素 對(duì) 植物 起著重要作用的微量元素，對(duì)鹽藻 的生長(zhǎng)及代謝產(chǎn)物的積累 又有那些影響目前未見(jiàn)報(bào)道，所以本次論文就此方面進(jìn)行了探討。 4H2O 天津市化學(xué)試劑三廠 硫酸鎂 MgSO4 天津市大茂化學(xué)試劑廠 硫酸銅 CuSO4 上?；瘜W(xué)設(shè)備采購(gòu)供應(yīng)站 硫酸鐵 FeSO4 （ 2） 取母液 2（ Na2EDTA： 18g／ L； FeS04 7H2O mg， CuSO4 mg， NaCl 216g，NaHCO3 g，均加入混合液中加水至 1500 ml，調(diào) PH 至 ～ 。 B瓶 Mo 40μ g/L、 B 4mg/L。 F瓶 Mo 60μ g/L、 B 6mg/L。封口后培養(yǎng)。先作出吸光度與細(xì)胞密度的關(guān)系曲線，然后測(cè)定培養(yǎng)液在 450nm 處的吸光度，以此確定培養(yǎng)液中鹽藻細(xì)胞密度。根據(jù) Jensen公式換算出藻液中的 β胡蘿卜素含量，并根據(jù)藻液中的細(xì)胞密度計(jì)算出每單個(gè)細(xì)胞內(nèi) β胡蘿卜素含量： β胡蘿卜素含量 P（ mg/L） =A450Vf103/2500=8A 450 V： 提取液的體積 （ 10mL） ； f： 稀釋倍數(shù) （ 2） 單個(gè)細(xì)胞內(nèi) β胡蘿卜素含量 （ pg根據(jù)下列公式計(jì)算藻液中的蛋白質(zhì)含量，并根據(jù)藻液中的細(xì)胞密度計(jì)算出單個(gè)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量： 蛋白質(zhì)含量 （ mgmL1) 3 結(jié)果與分析 硼和鉬對(duì)鹽藻的生長(zhǎng)調(diào)控 培養(yǎng) 15d后， 通過(guò) 檢測(cè) 各瓶藻液 在 450nm處的吸光度 計(jì)算出鹽藻的細(xì)胞密度 ,從而可以看出 不同濃度的硼和鉬對(duì)鹽藻細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)控作用，結(jié)果見(jiàn)圖 1。 這因?yàn)?硼 與 核酸酶、蛋白酶和果膠酶等酶的活性 以及糖的運(yùn)輸有關(guān) ， 所以缺硼 鹽藻中 可導(dǎo)致核酸、蛋白質(zhì)、果膠等分解加快和糖的運(yùn)輸受阻從而加速細(xì)胞的衰老和死亡，但是過(guò)多的硼會(huì)影響 細(xì)胞 對(duì)鈣、鐵等元素的吸收，所以多硼反而會(huì)抑制鹽藻的生長(zhǎng) ；當(dāng)鉬濃度為 60μ g/L 時(shí)，硼元素的濃度 在 6mg/L 時(shí)鹽藻的細(xì)胞密度 明顯大于 硼 2mg/L 和4mg/L 時(shí)的鹽藻細(xì)胞密度 ， 且 硼 在 2mg/L 和 4mg/L 時(shí)兩組 的 差異不 大 ， 原因可能是在鉬濃度為 60μ g/L 時(shí)， 2mg/L 和 4mg/L 的硼濃度過(guò)低造成的不利于細(xì)胞生長(zhǎng) 。其原因可能是在九種組合中硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g/L 時(shí)，兩種元素之間相互促進(jìn)的作用較大， 而在硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 時(shí)兩元素間的抑制作用較強(qiáng)。 當(dāng)鉬的濃度為 40μ g/L 時(shí) ， 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量 硼元素密度 在 2mg/L 和 4mg/L時(shí)明顯高于 6mg/L， 但是 前 兩組 的差異不大。 原因是在 硼 元素濃度為 6mg/L 時(shí)， 40μ g /L 的鉬濃度過(guò)低不利于氮和磷等元素的吸收利用， 而且缺鉬會(huì)使 葉綠體的結(jié)構(gòu)受損， 從而影響培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的含量。 硼和鉬對(duì) 細(xì)胞 中 β 胡蘿卜素 積累的調(diào)控 計(jì)算出培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量后 ， 通過(guò)公式可得到單個(gè) 細(xì)胞 中 β 胡蘿卜