【正文】 析???????????????????????????? ? ? 6 硼和鉬對鹽藻生長的調控????????????????? ? ??? ??? 6 硼和 鉬對培養(yǎng)液中 β胡蘿卜素 積累的調控????? ???? ???????? 7 硼和 鉬對 中細胞 β胡蘿卜素 積累的調控????????????? ??? ? ? 8 硼和鉬對培養(yǎng)液中蛋白質積累的調控??????????? ? ? ?????? 9 硼和鉬對細胞中蛋白質積累的調控 ??????????????????? 10 4 討論 ??????????????????????????? ?? ???? 11 結論????????????????????????? ??? ?????? 13 致謝?????????????????????? ?? ?????? ? ??? 14 參考文獻????????????????????????? ??? ???? 15 附錄 A??????????????????????? ???? ?????? 17 附錄 B????????????????????????? ???? ???? 18 淮海工學院二○○七屆畢業(yè)設計（論文） 第 1 頁 共 19 頁 1 引言 鹽藻 ,即杜氏藻 ( Dunaliella salina),為單細胞藻類 ,外包一層膠鞘 ,無細胞壁 ,是綠藻門、團藻目、多鞭毛科的一個屬 ,約 30 個種 ,其中最具代表性和應用最廣的是鹽生杜氏藻。 鹽生桿氏藻體內含 β 胡蘿卜素的量可達其干重的 10 %左右 ,并富含甘油、蛋白質、脂肪酸、葉綠素和四烯酸 ,具有營養(yǎng)保健作用 ,是一種經濟藻類和新型的“農作物” [1]。篩選出的鹽藻 β胡蘿卜素高產品系在高溫、高鹽、強光照和缺氮的條件下 ， 累積的 β胡蘿卜素占千重的 10%以上，有報道最高可達 14％ ；而在一般的生物體中僅占千重的 %左右。目前 ， 在澳大利亞西部的 Whyalla，養(yǎng)殖鹽藻達 300公頃，收獲鹽藻的設備每小時可處理藻液 1000噸。硼在植物體內的含量通常為 2～ 100 mg／ kg，小于 10 mg／ kg時則引起植物缺硼，大多數植物出現缺硼癥狀 [14]。 硼與細胞壁組分間發(fā)生反應生成多羥基化合物增強細胞壁的穩(wěn)定性和良好的結構。硼能改變植物激素活性，參與保護吲哚乙酸氧化酶系統(tǒng)，促進生長素運轉。莖形成層組織細胞分裂加強，形成層 細胞增生。硼能增強細胞壁對水分的控制，從而增強植物的抗寒和抗病能力。 鉬是硝酸還原酶的必需部分，參與硝態(tài)氮還原為銨的過程。缺鉬可引起豆科作物缺氮。還有報道說，鉬在植物對鐵的 吸收和運輸中起著不可替代的作用。一般癥狀先在老葉上出現。 4H2O 天津市化學試劑四廠 乙二胺四乙酸二鈉 Na2EDTA 南京化學試劑一廠 方法 實驗處理 （ 1） 取母液 1（ NaNO3： 5g／ L； KH2PO4： lg／ L； KC1： 7g／ L； MgSO4： 10g／ L；CaCl2： 1g／ L） 180ml 加水稀釋至 1000ml。 4H20，使其濃度分別為： A瓶 Mo 40μ g/L、 B 2mg/L。 I瓶 Mo 80μ g/L、 B 6mg/L 使瓶有溶液 60 ml，每組重復 3 個。 藻液中細胞密度的計算 公式： Y(x107cells/mL)=（ 943X61） x104 Y藻液中鹽藻細胞密度 (x107cells/mL)； X藻液吸光度 A450 鹽藻β 胡蘿卜素含量的測定 取 5mL 藻液，離心 （ 4000rmp,20min） 棄上清，加入適量 90%丙酮溶液提取色素，重復 2 次，合并各次提取液，定容到 10mL，于分光光度計波長 450nm 處讀取 A450。mL1)； N： 細胞密度 (107cells 從圖 1 和表 1 的整體來看 ， 九種組合中 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g /L 的組合最適合鹽藻細胞生長 ， 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 的組合最不適合鹽藻細胞生長。 當硼元素的濃度為 2mg/L 和 4mg/L 時， 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的含量在 鉬元素密度 為40μ g /L 和 80μ g /L 時 明顯高于 60μ g /L 的鉬 ；當硼元素 的濃度為 6mg/L 時， 培養(yǎng)液中 β胡蘿卜素 含量在 鉬元素濃度 為 60μ g /L 時明顯大于 40μ g /L 和 80μ g /L 的鉬濃度 。 硼和鉬對 培養(yǎng)液中蛋白質積累的調控 培養(yǎng) 15d 后， 藻液經離心 、反 復凍融和超聲波破碎后得到的提取液經 檢測 其在波長280nm 和 260nm 處的吸光度通過計算得出培養(yǎng)液中蛋白質含量 ,從而 可以看出 不同濃度的硼和鉬對鹽藻培養(yǎng)液中蛋白質積累的調控作用，結果見 圖 4。當硼元素的濃度為 6mg/L 時， 鉬元素密度為 60μ g/L 時鹽藻培養(yǎng)液中蛋白質含量明顯高于 40μ g /L 和 80μ g /L 的鉬濃度。 4 討論 實驗結果表明 ，隨硼和鉬 濃度的改變鹽藻的生長、培養(yǎng)液中蛋白質含量、細胞中蛋白質含量、培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量以及細胞的 β 胡蘿卜素 含量都發(fā)生了相應的變化，其影響主要取決與硼和鉬 分別 在培養(yǎng)液中的濃度。 淮海工學院二○○七屆畢業(yè)設計（論文） 第 13 頁 共 19 頁 結 論 硼和鉬是鹽藻細胞生長與物質代謝積累的必需元素 ， 其影響主要取決與硼和鉬 分別在培養(yǎng)液中的濃度 。郭老師以長者的胸懷來包容我在實驗中所犯的失誤和錯誤，并耐心的幫我糾正，在這里我由衷的向郭老師表示感謝。cell1） 編號 A B C D E F G H I 硼酸 mg/L 2 4 6 2 4 6 2 4 6 鉬酸銨 μg/L 40 40 40 60 60 60 80 80 80 重復 1 重復 2 重復 3 平均值 編號 A B C D E F G H I 硼酸 mg/L 2 4 6 2 4 6 2 4 6 鉬 酸銨 μg/L 40 40 40 60 60 60 80 80 80 重復 1 重復 2 重復 3 平均值 編號 A B C D E F G H I 硫酸銅 μg/L 75 75 75 125 125 125 175 175 175 鉬酸銨 μg/L 40 60 80 40 60 80 40 60 80 重復 1 重 復 2 重復 3 平均值 淮海工學院二○○七屆畢業(yè)設計（論文） 第 19 頁 共 19 頁 表 4 鹽藻培養(yǎng)液蛋白質含量 單位： （ mg 2020。 實驗中得到的數據硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g /L 鹽藻最適合藻細胞生長與物質代謝積累， 該結論 對鹽藻的培養(yǎng)應用方面具有一定的參考價值。細胞中蛋白質含量和細胞中 β 胡蘿卜素 的含量 則 與細胞密度無太大關系。 硼和鉬對 細胞中蛋白質積累的調控 培養(yǎng) 15d 后， 計算出培養(yǎng)液中蛋 白質含量后，通過公式可得到單個細胞中蛋白質的含量 ,從而可以看出 不同濃度的硼和鉬對鹽藻單個細胞中蛋白質積累的調控作用，結果見圖淮海工學院二○○七屆畢業(yè)設計（論文） 第 11 頁 共 19 頁 5。 6mg/L 的硼濃度又過高， 過多的硼會影響細胞對鈣、鐵等元素的吸收不利于細胞生長，因而不利于蛋白質的積累 ； 當鉬的濃度為 60μ g/L 時，硼元素密度 為 6mg/L 時 的 培養(yǎng)液中蛋白質的含量 明顯高于 2mg/L 和 4mg/L的硼濃度。 其原因可能是在九種組合中硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g/L時，兩種元素之間相互促進的作用較大，而在硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 時兩元素間的抑制作用較強。 表 2 各組 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量數據的 兩兩比較 Tukey B 硼鉬對 培養(yǎng)液中β 胡蘿卜素積累的影響 Subset for alpha = .01 N 1 2 3 3 4 3 5 3 2 3 1 3 9 3 7 3 8 3 6 3 圖 2 和表 2 表明 ， 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量隨硼和鉬元素濃度的變化而發(fā)生規(guī)律性變化 。 鉬的濃度為40μ g/L和 80μ g/L時 ， 鹽藻的細胞密度在 硼 濃度 為 4mg/L 時 明顯大于硼 為 2mg/L 和 6mg/L時的細胞密度 。 蛋白質含量的 測定采用紫外吸收法，將蛋白質的提取液置于 1cm的石英比色杯中，以蒸餾水為對照，于分光光度計波長 280nm 和 260nm 處分別讀取 A280和 A260。 鹽藻細胞生長的測定 培養(yǎng)液中鹽藻細胞密度統(tǒng)計采用血球計數板法。 E瓶 Mo 60μ g/L、 B 4mg/L。 4H2O mg， ZnSO4 藥品 氯化鉀 KCl 南京化學試劑廠 氯化鈣 CaCl2 天津市塘沽濱?；S 氯化鈉 NaCl2 南京化學試劑有限公司 氯化錳 MnCl2一般表現葉片出現黃色或橙黃色大小不一的斑點，葉緣向上卷曲呈杯狀。固氮過程中，首先是鐵蛋白接受 1個電子，傳遞至鎂 ATP，形成鐵蛋白 .鎂 ATP復合體，降低氧化還原電位；然后與鐵鉬蛋白結合形成鐵蛋白 ?鎂 ATP鐵鉬蛋白復合體，固定游離氮分子。硝酸還原酶是一種復合酶，含有血紅素鐵和兩個鉬原子，存在于高等植物細胞質中，需要 NADP+/NADPH 作為電子受體。硼不足時根端、莖端生長停止，嚴重時生長點壞死，側芽、側根萌發(fā)生長，枝葉叢生。 硼在碳水化合物代謝中有兩方面的功能：細胞壁物質的合成和糖運輸。在吲哚乙酸的刺激作用下，根伸長正常?；ㄊ侵参矬w含硼量最高的部位，尤其是柱頭和子房。缺硼能使向日葵嫩芽中的細胞壁微纖維排列不正常 [16]。我國雖然 1982 年在西藏扎淮海工學院二○○七屆畢業(yè)設計（論文）