【正文】 第五篇 水產(chǎn)餌料生物的培養(yǎng) （增殖） 第一章 水產(chǎn)餌料生物的室內(nèi)培養(yǎng) 藻類(lèi)培養(yǎng)方法簡(jiǎn)介 藻類(lèi) ， 特別是單細(xì)胞藻類(lèi)的營(yíng)養(yǎng)豐富 ， 含有動(dòng)物和人生長(zhǎng)發(fā)育所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 。 自上世紀(jì)四十年代以來(lái) ， 各國(guó)學(xué)者都試圖用藻類(lèi)這一資源解決人類(lèi)食物和動(dòng)物餌料的缺乏問(wèn)題 。 另一方面 ， 藻類(lèi)可直接或間接的作為魚(yú)類(lèi)及其他水生動(dòng)物的餌料 ， 因此 ， 藻類(lèi)培養(yǎng)對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖具有更大意義 。 關(guān)于藻類(lèi)培養(yǎng) ， 還有其他意義 ， 如利用培養(yǎng)固氮藍(lán)藻解決稻田氮素肥料；或從一些藻類(lèi)提取藥物；或研究藻類(lèi)生理 ， 以及用于太空食品等。 在漁業(yè)利用方面 ， 藻類(lèi)培養(yǎng)主要是解決水產(chǎn)動(dòng)物餌料 。 目前 ， 有關(guān)海水藻類(lèi)的培養(yǎng)較多 ， 我國(guó)在海水養(yǎng) 殖方面 ， 已大規(guī)模展開(kāi)了某些浮游植物的培養(yǎng) ， 如扁藻 （ Platymonas spp） 、 中肋骨條藻 （ Skeletonema costatum） 、 三 角 褐 指 藻 （ Phaeodactylum tricornutum） 、 鹽藻 （Dunaliella spp.） 、 新月菱形藻 （ Nitzschia clostertum） 、 牟氏角毛藻 （Chaetoceros muelleri） 及球等鞭金藻 （ Isochrysis galbana） 等 ， 已解決貝類(lèi)人工養(yǎng)殖的早期幼體餌料問(wèn)題 。 在淡水養(yǎng)殖方面 ， 我國(guó)只進(jìn)行了螺旋藻 、 魚(yú)腥藻 、 小球藻 、 柵列藻等的培養(yǎng) 。 今后 ， 隨著養(yǎng)殖事業(yè)的發(fā)展 ， 對(duì)一些新品種的養(yǎng)殖以及解決某些品種幼魚(yú)的餌料 ， 必然涉及到藻類(lèi)的培養(yǎng) 。 因此 ， 有必要了解藻類(lèi)培養(yǎng)的基礎(chǔ)知識(shí) 。 先僅就藻類(lèi) 、 主要是單細(xì)胞藻類(lèi)的一般培養(yǎng)方法及有關(guān)理論加以簡(jiǎn)述 。 藻類(lèi)的生長(zhǎng)模式 單細(xì)胞藻類(lèi)在培養(yǎng)過(guò)程中，生長(zhǎng)繁殖的速度，出現(xiàn)一定的起伏，這種生長(zhǎng)模式可劃分為六個(gè)時(shí)期 藻類(lèi)的培養(yǎng)方式 藻類(lèi)的培養(yǎng)方式 ， 以藻類(lèi)培養(yǎng)的目的要求而各種各樣 。 但可分為密閉式培養(yǎng)和開(kāi)放式培養(yǎng)兩大類(lèi) 。 1． 密閉式培養(yǎng)：密閉式培養(yǎng)的目的是不使外界雜藻 、 菌類(lèi)及其他有機(jī)體混入培養(yǎng)物中 。 將培養(yǎng)液密封在與外界完全隔離的透明容器中 ， 由此通氣 、攪拌 、 輸送培養(yǎng)液及調(diào)節(jié)水溫和取樣等設(shè)備 ， 也都要與外界隔離 。 培養(yǎng)容器多為管狀 、 也有池狀 ， 用有機(jī)玻璃或透明的聚乙烯所料做成水平管道 ， 直立或斜立在地上 ， 暴露陽(yáng)光或人工光照下 。 這種培養(yǎng)方式 ， 成本高 ， 好控制 ，產(chǎn)量亦穩(wěn)定 。 2． 開(kāi)放式培養(yǎng)：將藻類(lèi)培養(yǎng)于敞開(kāi)的容器 （ 如水泥池 、 管道 、 木盆等 ）中 。 方法設(shè)備較簡(jiǎn)便 ， 可進(jìn)行小量或大面積的培養(yǎng) 。 該法培養(yǎng)物中易發(fā)生敵害生物污染 ， 但成本低 ， 使用較普遍 ， 也是今后藻類(lèi)培養(yǎng)所應(yīng)采取的方式 。開(kāi)放式可分如下幾種類(lèi)型： ⑴ 開(kāi)放循環(huán)培養(yǎng)：其特點(diǎn)式培養(yǎng)液借助循環(huán)水泵而不斷循環(huán)流動(dòng) 。 培養(yǎng)物能循環(huán) ， 就可省卻攪拌工作 。 ⑵ 開(kāi)放非循環(huán)培養(yǎng)：其特點(diǎn)是培養(yǎng)液不循環(huán)流動(dòng) ， 而定時(shí)由小管通入 CO2和空氣到培養(yǎng)液中；同時(shí)也起攪拌作用 。 此法在大面積培養(yǎng)中使用較普遍 。優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單 ， 無(wú)需動(dòng)力 ， 水泵及大量的 CO2及通氣設(shè)備 。 ⑶半開(kāi)放循環(huán)培養(yǎng)：半開(kāi)放培養(yǎng)是指培養(yǎng)容器或池、槽等場(chǎng)所雖仍敞開(kāi)，但有些部分密閉，或用塑料布覆蓋。這種培養(yǎng)方式，利用管道，依靠動(dòng)力，使培養(yǎng)液流動(dòng)和通入含二氧化碳的空氣。該方式設(shè)備復(fù)雜，但效果較好。 培養(yǎng)液的配制及舉例 在實(shí)驗(yàn)條件下培養(yǎng)微型藻類(lèi)有多種培養(yǎng)基配方 。 這些配方大多數(shù)是早先發(fā)表過(guò)的配方的修改方 ， 有些則從分析天然生境的水而得到 ， 有些是從生態(tài)角度考慮的 。 發(fā)展藻類(lèi)培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)配方時(shí)的主要考慮的問(wèn)題是： a． 鹽的總濃度：大多是取決于有機(jī)體的生態(tài)來(lái)源 。 b． 主要離子組分的組成及濃度：他們是鉀 、 鎂 、 鈉 、 鈣 、 硫酸鹽和磷酸鹽 。 c． 氮源：硝酸鹽 、 氨和尿素常用作配方中的氮源 ， 根據(jù)造中的性能和pH的最適點(diǎn)而定 。 藻類(lèi)的生長(zhǎng)主要依賴(lài)氮的可利用性 。 大多數(shù)微型藻干物中含有 7～ 9％ 的氮 。 因此在 1升培養(yǎng)液中生產(chǎn) 10g細(xì)胞就至少需要 500～600mgL1KNO3。 d． 碳源：無(wú)機(jī)碳通常是用含 1～ 5％ CO2的空氣來(lái)供應(yīng)的 ， 碳的另一種供應(yīng)辦法是用碳酸氫鹽 。 選用何種辦法主要是根據(jù)藻類(lèi)生長(zhǎng)的 pH最適點(diǎn)而定 。 e． pH： 通常用偏酸的 pH值來(lái)避免鈣鎂和其它微量元素發(fā)生沉淀 。 f． 微量元素：培養(yǎng)基中的微量元素通常是用早已證明有效濃度的混合溶液來(lái)提供的 （ 濃度在 μ gl1級(jí)范圍 ） 。 然而 ， 這些微量元素的組分對(duì)藻類(lèi)生長(zhǎng)是否必須卻不能總能顯示 。 為增加微量元素的穩(wěn)定性 ， 常用檸檬酸鹽和 EDTA作為螯合劑 。 維生素：許多藻類(lèi)要求有硫胺素和維生素 B12的供應(yīng)。 以下是幾種很有用的培養(yǎng)液配方 1． 單細(xì)胞綠藻 （ 柵列藻 ） 培養(yǎng)液 水生 4號(hào) （ NH4） 2SO4 Ca(H2PO4)2H 2O+2（ CaSO4H 2O） MgSO4 7H2O NaHCO3 KCL FeCL3（ 1％ ） 土壤浸出液 水 1000mL 水生 6號(hào) NH2CONH2 H2PO4 MgSO4 7H2O NaHCO3 KCL FeSO4（ 1％ 水溶液 ） Cacl2 土壤浸出液 水 1000mL 水生四號(hào)培養(yǎng)液中 ， 藻類(lèi)呈深綠色 ， 生長(zhǎng)繁殖速率較低 。 水生 6號(hào)培養(yǎng)液中 ， 藻類(lèi)呈草綠色 ， 色素不夠正常 ， 但生長(zhǎng)繁殖迅速 。 土壤浸出液是用田園土壤按水與圖 2:1的比例 ， 攪勻浸泡后的上層清液 ， 用前煮一小時(shí)后鏡檢 ， 發(fā)現(xiàn)污染生物 ， 應(yīng)再加溫消毒后使用 。 2． 浮游硅藻培養(yǎng)液 水生硅 1（ mg/l） 硝酸氨 120 硫酸鎂 70 磷酸氫二鉀 40 磷酸二氫鉀 80 氯化鈣 20 氯化鈉 10 硅酸鈉 100 檸檬酸鐵 5 土壤浸出液 20 硫酸錳 2 水 1000mL pH 水生硅 2（ mg/l） 尿素 150 氯化鉀 30 過(guò)磷酸鈣 50 硅酸鈣 100 硫酸鎂 50 碳酸氫鈉 3 硫酸錳 3 土壤浸出液 4mL EDTA－ 鐵 1mL 水 1000mL 水生硅 2號(hào)是用化肥尿素過(guò)磷酸鈣為氮磷來(lái)源，適于大量培養(yǎng)硅藻時(shí)選用，生長(zhǎng)適溫為 20～ 30℃ ；光強(qiáng)為 2,000～ 5,000米燭光。 3． 朱氏 10號(hào)培養(yǎng)液：適用于培養(yǎng)硅藻 、 藍(lán)綠藻等 。 H2O 1000mL Ca(NO3)2 g K2HPO4 g MgSO4 7H2O g Na2CO3 g Na2SiO3 g FeCL3 g 使用時(shí)按 1/ 1/ 1/10稀釋使用 。 4． f/2培養(yǎng)液 硝酸鈉 （ NaNo3） 75 mg 磷酸二氫鈉 （ NaH2PO4） mg f/2微量元素溶液 1mL f/2維生素溶液 1mL 海水 1000mL 本配方時(shí)應(yīng)與目前生產(chǎn)上使用的各種偽造的培養(yǎng)，但用于硅藻培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)再加 50mgNa2SiO3。 附 I： f/2微量元素溶液配方： 硫酸鋅 （ ZnSO4 4H2O） 23mg 硫酸銅 （ CuSO4 5H2O） 10mg 氯化錳 （ MnCl2 4H2O） 178mg 檸檬酸鐵 （ FeC6H5O7 5H2O） 鉬酸鈉 （ NaMoO4 5H2O） 乙二銨四乙酸鈉 （ Na2EDTA） 六水氯化鈷 （ CoCl2 6H2O） 12mg 純水 1000mL 附 II： f/2微量元素溶液配方： 維生素 B12 維生素 H（ 生物素 ） 維生素 B1 100mg 純水 1000mL 四 、 藻種的分離培養(yǎng) 為了要進(jìn)行某種藻類(lèi)的科學(xué)研究活大量培養(yǎng) ， 有必要把某種藻類(lèi)與其他生物分離 。 分離培養(yǎng)藻種 ， 可分為兩大類(lèi) ， 一為單種培養(yǎng) ， 即藻類(lèi)雖只有一種 ， 但還混雜細(xì)菌 。 另一為純培養(yǎng) ， 即不僅藻類(lèi)只有一種 ， 亦無(wú)其它任何生物 。 純培養(yǎng)比較困難 ， 一般的分離培養(yǎng)往往只能做到單種培養(yǎng) 。 決定培養(yǎng)哪一種藻類(lèi) ， 主要根據(jù)培養(yǎng)的目的要求 ， 及某一種類(lèi)的生物學(xué)特征。 藻類(lèi)的分離主要有以下幾種常用方法 。 1． 離心法：將混合液用離心機(jī)離心 ， 水中不同藻體及細(xì)菌就以不同的速度下沉 ， 因此得以分開(kāi) 。 這樣將不同時(shí)間下從導(dǎo)管底的藻體取出 ， 經(jīng)鏡檢選定某種藻類(lèi)最多的沉積物 ， 再加清水 ， 繼續(xù)離心 ， 如此反復(fù)就可得到比較單純的藻體 ， 在接種相應(yīng)培養(yǎng)液中培養(yǎng) 。 該法可消除細(xì)菌 ， 并增加純粹分離的可能性 ， 至少可作為藻種平板培養(yǎng)的準(zhǔn)備工作 。 另外 ， 在水液中藻體含量較少時(shí) ， 可用此法集中藻體 。 但此法不能做到使不同藻類(lèi)完全分離 。 2． 稀釋法：該法源于中野治房 （ 1933） 的方法 。 用已消毒試管 5只 ， 在第一管盛蒸餾水 10mL， 第 2～ 5管都裝 5mL， 用高壓蒸汽消毒 ， 待冷卻后 ， 第 1管用滴管滴入混合藻液 1～ 2滴 ， 充分振蕩 ， 使均勻稀釋 。 次用消毒吸管 ， 從第 1管中吸取5mL滴入第二管中如前振蕩 ， 使均勻稀釋 。 以后依次同樣滴入第 3～ 5管 ， 并都充分均勻稀釋 。 然后把五個(gè)已盛又消毒的瓊膠培養(yǎng)基培養(yǎng)皿 ， 加熱使之溶解 ， 待冷卻而尚未凝固時(shí) ， 分別滴入五個(gè)試管的藻液各一滴 ， 用力振蕩 ， 使藻液充分混乳培養(yǎng)基中 。 待冷凝后 ， 把五個(gè)培養(yǎng)皿放在受著漫射光窗口 ， 一直到出現(xiàn)藻群時(shí)為止