22基因工程載體-噬菌體載體xxxx09(已修改)
2025-03-03 22:28 本頁(yè)面
【正文】 第二節(jié) 噬菌體載體 2噬菌體載體（ phage vectors）一、 ?噬菌體載體二、單鏈?zhǔn)删w載體三、噬菌粒載體四、柯斯質(zhì)粒載體一、 ?噬菌體載體噬菌體是一類細(xì)菌病毒（ Bacteriophage）（一）噬菌體的一般特性結(jié)構(gòu)： 蛋白質(zhì)外殼內(nèi)包裹著 DNA（雙鏈、單鏈、線性、環(huán)狀等）。T4 Bacteriophage71. 噬菌體的生物學(xué)特性溶菌周期指噬菌體將 DNA注入寄主細(xì)胞后很快環(huán)化，然后進(jìn)行自我復(fù)制、蛋白衣殼合成和新噬菌體顆粒的組裝，最后使寄主細(xì)胞破裂而釋放出大量的子代噬菌體。溶源周期中，注入寄主細(xì)胞的噬菌體 DNA是整合到寄主細(xì)胞染色體上并可以隨著寄主細(xì)胞的分裂而進(jìn)行復(fù)制。整合了一套完整的噬菌體基因組的細(xì)菌被稱為溶源性細(xì)菌。在溶源性細(xì)菌內(nèi)存在的整合或非整合的噬菌體 DNA被稱為原噬菌體。噬菌體溫和噬菌體，具有溶源生長(zhǎng)周期和溶菌生長(zhǎng)周期烈性噬菌體 ,只具有溶菌生長(zhǎng)周期分為兩種：（ 1） 溶菌周期：噬菌體的生活周期烈性噬菌體（ virulent phage)（ 2） 溶原周期：感染細(xì)菌后，將自己的 DNA整合到細(xì)菌的染色體 DNA中。形成這一過程稱為溶源化溫和噬菌體（ temperate phage) 噬菌體的結(jié)構(gòu)和其核酸類型 ： 結(jié)構(gòu)： 無(wú)尾部結(jié)構(gòu)的二十面體型、 具尾部結(jié)構(gòu)的二十面體型、 線狀體型 核酸類型：最常見的是雙鏈線性 DNA、 雙鏈環(huán)形 DNA、 單鏈環(huán)形 DNA、 單鏈線形 DNA、 單鏈 RNA?！? λDNA的物理圖譜 λDNA為線狀雙鏈 DNA分子，兩端各有一個(gè) 12核苷酸的互補(bǔ)單鏈（粘性末端）GGGCGGCGAC CT, CCCGCCGCTGGA，稱為cos區(qū)，全長(zhǎng) 。特點(diǎn)是功能相近的基因在基因組中聚集在一起。λ 噬菌體 組成特點(diǎn) ： 雙鏈線狀 DNA分子， 全長(zhǎng) 50kb， 含 65個(gè)基因， 在其分子兩端各含有12個(gè)堿基的互補(bǔ)單鏈，是天然的粘性末端，被稱為COS位點(diǎn)。 λ 噬菌體感染細(xì)菌后的溶菌性生長(zhǎng)和溶源性生長(zhǎng) 溶菌性生長(zhǎng)（ lytic pathway） 噬菌體感染細(xì)菌后，借助其 2個(gè) COS位點(diǎn)互補(bǔ)成環(huán)，在宿主菌體內(nèi)連續(xù)復(fù)制，合成大量基因產(chǎn)物，進(jìn)而裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌，釋放出來(lái)的噬菌體又可感染其他細(xì)菌。 溶源性生長(zhǎng) (lysogenic pathway) 噬菌體感染細(xì)菌后，可將自身 DNA整合到細(xì)菌的染色體中去，與之一起復(fù)制，并遺傳給子代細(xì)胞，宿主細(xì)胞不被裂解 。?噬菌體 A WB DEF Z J att xis N cl cro O P Q SR 結(jié)構(gòu)區(qū) 重組區(qū) 調(diào)控區(qū) 裂解區(qū)cos位點(diǎn) cos 位點(diǎn)A R A REcoRI目的基因EcoRIEcoRI插入型 置換型A W B C D E F Z U V G H M L K I J b2 cI cro cII O P Q S R att int xis gam red cIII NCOS COS 頭部基因 尾部基因 功能不明區(qū) 溶源化 重組 早期控制 阻遏 DNA合成 溶菌生長(zhǎng)非必須區(qū)段cI基因：溶源過程控制基因。λ噬菌體的基因組結(jié)構(gòu)5‘CGGGGCGGCGACCTCG3’3’GCCCCGCCGCTGGAGC5’ Cleavage
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