【正文】 艾滋病實驗室檢測管理與 設備維護 河北省疾病預防控制中心 性病艾滋病預防監(jiān)測中心 趙翠英 HIV抗體檢測的目的 ?監(jiān)測 :以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群 HIV感染率及其變化趨勢而進行的檢測，檢測的人群包括各類高危人群和一般人群。 ?診斷 :以診斷為目的的檢測是為了確定個體 HIV感染狀況而進行的檢測，包括臨床檢測和自愿咨詢檢測、術前檢測、根據(jù)特殊需要進行的體檢等。 ?血液篩查 : 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播 HIV而進行的檢測，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。 HIV抗體檢測的要點 ?篩查試驗陽性不能出陽性報告 。 ?嚴格遵守實驗室標準操作程序（ SOP） 。 ?嚴格按照試劑盒說明書操作 。 ?注意防止樣品間交叉污染 。 常規(guī)程序 ? 初篩 復檢 確認 復檢： 對初篩呈陽性反應的樣品用原有試劑 和另外一種不同原理或不同廠家的篩 查試劑重復檢測 。 如兩種試劑復測均 呈陰性反應 ， 則報告 HIV抗體陰性； 如均呈陽性反應 ， 或一陰一陽 ， 需送 艾滋病確認實驗室進行確認 。 樣 品 篩查檢測 篩查試劑 陽性反應 陰性反應 重復檢測 原有試劑加另外一種篩查試劑 一陰一陽 均陰性反應 均陽性反應 送確認實驗室進行確認 陰性報告 HIV抗體篩查試驗流程圖 免疫印跡法 ( H I V 1/ 2 混合型 ) H I V 1 陽性反應 不確定反應 應 出現(xiàn) H I V 2 指示條帶 H I V 1 陽性報告 不確定反應 陽性反應 陰性反應 報告 H I V 2 血清學陽性 必要時測核酸 陰性報告 免疫印跡法（ H I V 2 ） 每 3 個月隨訪一次，共 2 次，仍屬可疑，則作陰性報告如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應則報告陽性 陰性反應 陰性報告 HIV抗體確認試驗流程圖 一、 HIV抗體診斷 ? 臨床上實際應用的是測定特異性 HIV抗體 ，包括初篩和確認兩個方面 。 HIV抗體一般在感染后幾周逐漸出現(xiàn) ， 可延續(xù)至終身 ，是重要診斷依據(jù) ， 但是從感染到血清抗體陽轉(zhuǎn)有一段窗口期 ， 平均為 1到 3個月 ，還有一小部分比例的 HIV感染者出現(xiàn)遲緩反應 ， 95%以上 HIV1感染者產(chǎn)生抗體的時間是在感染后 6個月以內(nèi) 。 常用樣品 主要為血液 此外還可用唾液檢測 HIV（ Orasure， 如Salivacard）， 尿液檢測 HIV抗體 。 常用方法 ? 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA） ? 明膠顆粒凝集試驗（ PA） ? 斑點免疫試驗（或免疫層析）：膠體金或膠體硒 雙抗原夾心 ELISA試驗原理 ▲ 此類試驗比較敏感和特異，可檢測血清中的 IgA、 IgM、 IgG抗體。 ▲ 將 HIV 1/2混合 抗原包被在微孔板底部。 ? “一步法” 實驗時加入待檢血清和辣根過氧化物酶標記 HIV1/2混合抗原 ? “二步法” 實驗時先加入待檢血清，溫度處理后，再加酶標記 HIV1/2混合抗原 雙抗原夾心 ELISA試驗原理 ▲ 溫度處理后洗滌。待檢血清中如有特異性抗體，即將包被抗原和酶標記的抗原橋聯(lián)在一起，如無抗體，通過洗板而洗去酶標記的混合抗原。加入的底物同被橋聯(lián)抗原上的酶發(fā)生顏色反應，指示抗體存在，如無抗體參與則無顯色。 ▲ 實驗中設陰性對照和陽性對照。 明膠顆粒凝集試驗 (PA)原理 以 HIV抗原致敏粉紅色明膠粒子 (載體 )。這種致敏載體和血清中 HIV抗體相遇被橋聯(lián)而出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應 ,非致敏的明膠粒子因無抗原參與 ,則不發(fā)生凝集。如果試驗中的未致敏粒子對照出現(xiàn)凝集，即提示血清中含非特異性凝集因子，需用未致敏粒子吸附處理，重新做試驗。 目前已有 HIV1和 HIV2抗原共同致敏的 PA試劑（ AFD HIV 1/2 PA） 和 HIV HIV2抗原分別致敏的 PA試劑（ AERODIAHIV1/2）。 前者可用于 HIV1/2的篩查，后者可用于區(qū)分 HIV1型和 HIVII型。 其缺點是判定結(jié)果用肉眼觀察，無法保存。 目前這問題已得到解決，為了保存試驗結(jié)果，試劑盒可配備數(shù)碼相機。 雅培 Determine（ 硒標） 快速試劑試驗原理 雅培 Determine HIV1/2快速測試試劑是一種用免疫層析法原理 ,定性測定血樣中 HIV1/2抗體 。 加樣本入反應條 ， 當樣品通過硒膠體 抗原結(jié)合物時 ， 與硒膠體 抗原結(jié)合物混合重組結(jié)合 ， 此混合物繼續(xù)遷移通過固相包被的合成肽和重組抗原的結(jié)果窗 。如果樣品中含有 HIV1/2抗體 ， 其抗體將會與硒膠體 抗原結(jié)合 ， 并在窗口處被固相包被的合成肽和重組抗原所捕獲固定 ，形成一條紅線 。 如果樣品中不含 HIV1/2抗體 ， 則無紅線形成 。 為了保證結(jié)果有效 ， 在反應條中含有質(zhì)控條帶 。 金標快速試劑試驗原理 CHEK HIV1+2 （ EY） 將 HIV抗原吸附在基膜上 ， 加入待檢標本后 ,如果標本中有 HIV1或 HIV2抗體 ，抗體便被吸附在基膜的抗原上 ， 加入 PA金標記溶液 ， 而其 Fc部位則和 PA金標記物結(jié)合 , 形成如三明治般的粒子 ， 出現(xiàn)肉眼可見的粉紅色圓點 。 窗口期和殘余危險度 窗口期： HIV感染后至抗體檢出前的一段時間稱為窗口期。 殘余危險度 (residue risk)： 在目前條件下，篩查后仍具感染性的機率。影響殘余危險度的主要因素包括窗口期、試劑質(zhì)量、實驗室質(zhì)控以及人群感染率等。各國的殘余危險度不一，美國 1985年是1/2500,隨著檢測試劑完善，包括“ O”亞型的檢出、IgM和 p24抗原的檢測，到 1995年降至 1/4466萬；據(jù)報道非洲為 5/1000,泰國 1/775,肯尼亞 1/50。 二、艾滋病病毒的抵抗力 HIV抵抗力 ?HIV一旦離開宿主在外界環(huán)境中生存能力便很快消失 ， HIV對環(huán)境中的物理因素和化學因素抵抗力均較弱 ，比乙肝病毒 （ HBV） 的抵抗力低得多 。因此 ， 對 HBV有效的消毒和滅活方法均適用于 HIV。 HIV抵抗力 物理因素 ?HIV對熱很敏感，對低溫的耐受性強于高溫。因此，可以