基因工程的基本操作程序(共55張ppt)(已修改)
2025-01-15 17:39 本頁面
【正文】 基因工程基本操作的四個步驟目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測與鑒定一、目的基因的獲取 目的基因主要是 ______________________編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 獲取目的基因的常用方法有哪些 ?從基因文庫中獲取利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增人工合成1) 基因文庫的概念基因文庫的概念 : 將含有某種生物不同基因的許多將含有某種生物不同基因的許多 DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因。群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因。2) 基因文庫的種類基因文庫的種類 :基因組文庫：基因組文庫： 含有一種生物的含有一種生物的 全部全部 基因基因部分基因文庫：部分基因文庫： 只包含了一種生物的只包含了一種生物的 部分部分 基因，基因， 如：如： cDNA文庫文庫基因組文庫與部分基因文庫的關(guān)系3)基因組 DNA文庫與 cDNA文庫某生物體內(nèi)全部 DNA 許多 DNA片段受體菌群體限制酶與運(yùn)載體連接導(dǎo)入基因組文庫cDNA反轉(zhuǎn)錄受體菌群體與運(yùn)載體連接導(dǎo)入cDNA文庫某種生物某個時期的 mRNA基因組文庫和部分基因組文庫 (cDNA文庫 )比較怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因呢 ?依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。如：根據(jù)基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色體上的位置基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 mRNA基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性4)從基因文庫中得到目的基因的方法構(gòu)建基因組 DNA文庫時，首先應(yīng)分離細(xì)胞的A、染色體 DNAB、線粒體 DNAC、總 mRNAD、 tRNA目的基因可從基因文庫中獲得，下列有關(guān)基因文庫的描述正確的是A、某生物的全套基因就是一個基因文庫B、將含有某種生物不同的許多 DNA片段，導(dǎo)入某個生物體內(nèi)，則這個生物就是一個基因文庫C、含有一種生物所有基因的基因文庫叫做基因組文庫D、含有一種生物的一部分基因的基因文庫叫 cDNA文庫AC利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因PCR—— 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一項生物 體外 復(fù)制 特定 DNA片段 的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù)，可獲取大量的目的基因。 以 方式擴(kuò)增， 即 （ n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）指數(shù)2nn方式 使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴(kuò)增n結(jié)果原理：DNA雙鏈復(fù)制PCR技術(shù)? 前提：? 條件PCR擴(kuò)增儀一段已知目的基因的核苷酸序列模板 DNA； DNA引物；四種脫氧核苷酸； 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（ Taq酶）PCR技術(shù)的操作過程a、 DNA變性 （ 90℃95℃ ）：雙鏈 DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成 ________b、退火 （ 復(fù)性 55℃65℃ ）：系統(tǒng)溫度降低， 引物 與 DNA模板結(jié)合，形成局部________。 c、延伸 （ 70℃75℃ ）：在Taq酶 的作用下，合成與模板互補(bǔ)的 ________。 氫鍵 單鏈 DNA雙鏈DNA鏈 ：每重復(fù)一次，目的基因增加 ___倍一PCR技術(shù)擴(kuò)增與 DNA復(fù)制的比較堿基互補(bǔ)配對原則 堿基互補(bǔ)配對原則四種脫氧核苷酸、模板、酶、 ATP四種脫氧核苷酸、模板、酶、 引物DNA在高溫下變性解旋解旋酶催化解旋半保留復(fù)制、邊解旋邊復(fù)制半保留復(fù)制、
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