核酸的凝膠電泳(已修改)
2025-08-13 15:04 本頁面
【正文】 第四節(jié) 核酸的凝膠電泳 Nucleic Acid Gel Electrophoresis Content of Table 前 言 一、 瓊脂糖凝膠電泳 二、 聚丙烯酰胺凝膠電泳 三、 脈沖場(chǎng)凝膠電泳 前 言 核酸凝膠電泳是分子克隆核心技術(shù)之一，用于分離、鑒定和純化 DNA或 RNA片段； 優(yōu)點(diǎn)： （ 1）便于分離 。（ 2）便于檢測(cè) 。（ 3）便于回收： 核酸凝膠電泳的基本原理 1） 核酸分子之糖 磷酸骨架中的磷酸基團(tuán)，呈 負(fù)離子化 狀態(tài)；核酸分子在一定的電場(chǎng)強(qiáng)度的電場(chǎng)中，它們會(huì)向正電極方向遷移； 2） 由于在電泳中往往使用 無反應(yīng)活性的穩(wěn)定的支持介質(zhì) ，電泳遷移率（或遷移速度）與分子的摩擦系數(shù)成反比。而摩擦系數(shù)是分子大小、介質(zhì)粘度等的函數(shù)； 因此，可在同一凝膠中、一定電腸強(qiáng)度下、可在凝膠上分離出不同分子量大小或相同分子量但構(gòu)型有差異的核酸分子。 Home 一、 瓊脂糖凝膠電泳 Agarose gel electrophoresis （一）凝膠的制備及電泳 （二） DNA的遷移速率決定因素 1 DNA分子的大小 雙鏈 DNA分子遷移的速率與其堿基對(duì)數(shù)的常用對(duì)數(shù)近似成反比； 2 瓊脂糖濃度 濃度越低，相同核酸分子遷移越快； 3 DNA的構(gòu)象 一般同一分子：超螺旋環(huán)狀＞線狀＞切口環(huán)狀。 4 凝膠和電泳緩沖液中的溴化乙錠 溴化乙錠（ EB）插入雙鏈 DNA造成其負(fù)電荷減少、剛性和長(zhǎng)度增加。 5 所用的電壓 低電壓時(shí) DNA片段遷移率與所用的電壓成正比。 6 瓊脂糖種類 常見的有兩種：標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖和低熔點(diǎn)瓊脂糖；
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