核酸的凝膠電泳(留存版)
【正文】 與其堿基對數(shù)的常用對數(shù)近似成反比； 2 瓊脂糖濃度 濃度越低，相同核酸分子遷移越快； 3 DNA的構(gòu)象 一般同一分子：超螺旋環(huán)狀＞線狀＞切口環(huán)狀。 載樣緩沖液有三個作用： 1）增加樣品密度保證 DNA沉入加樣孔內(nèi)； 2）使樣品帶有顏色便于簡化上樣過程； 3）其中的染料在電場中以可以預(yù)測的泳動速率向陽極遷移。 用途：制備高純度的 DNA片段。 4 溫度： 標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖電泳基本在室溫進行，PFGE一般應(yīng)在 4℃ 進行。 變性的 DNA在這些凝膠中的遷移率幾乎與其堿基組成及序列完全無關(guān)。 6 瓊脂糖種類 常見的有兩種：標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖和低熔點瓊脂糖； 不同類型瓊脂糖的性質(zhì) 瓊脂糖類型 凝結(jié)溫度 /℃ 熔化溫度 / ℃ 標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖 35~38 90~95 不同廠家生產(chǎn)的不同商品其凝結(jié)溫度和熔化溫度有一定差異 40~42 85~90 高強度瓊脂糖 34~43 85~95 修飾的低熔點 / 凝點瓊脂糖 25~35 63~65 35 65 超低熔點 8~15 40~45 低黏性低熔點瓊脂糖 25~30 70 38 85 30 75 不同類型瓊脂糖分離 DNA片段的范圍 濃 度（ %） 標(biāo) 準(zhǔn) (kb) 高強度(kb) 低熔點(kb) 低黏度低溶點 (kb) 1~50 ~25 ~15 ~10 ~10 ~12 ~8 ~8 ~6 ~7 ~7 ~4 ~4 ~4 ~3 ~3 ~1 ~1 ~ ~ 7 電泳緩沖液 常用的有 TAE、 TPE及 TBE TAE、 TPE及 TBE電泳緩沖液比較
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