【正文】 第1章 緒論 蛹蟲(chóng)草簡(jiǎn)介蛹蟲(chóng)草(Cordyceps militaris) 又稱北蟲(chóng)草， 屬子囊菌亞門(mén)、麥角菌科、 蟲(chóng)草屬。蛹蟲(chóng)草中蟲(chóng)草素含量較冬蟲(chóng)夏草高約3～ 6 倍[1]。蟲(chóng)草素具有抗病毒、抑菌、抑制腫瘤生長(zhǎng)的功效，與環(huán)磷酰胺有明顯的協(xié)同作用，并有降血糖的作用；腺苷是一種遍布人體細(xì)胞的內(nèi)源性核苷，可直接進(jìn)入心肌經(jīng)磷酸化生成腺苷酸，參與心肌能量代謝，同時(shí)還參與擴(kuò)張冠脈血管，增加血流量，對(duì)心血管系統(tǒng)和肌體的許多其它系統(tǒng)及組織均有明顯的生理作用[2]。蛹蟲(chóng)草作為傳統(tǒng)珍貴中藥材，我國(guó)人民對(duì)其藥用價(jià)值早有認(rèn)識(shí)。李時(shí)珍 (1518) 在《本草綱目》中指出，蟬花能主治“小兒天吊驚癇，夜啼，心悸”[3]。 蛹蟲(chóng)草對(duì)多種腫瘤均有良好的療效。陳桂寶等 (1997)證明蛹蟲(chóng)草對(duì)人黑色素瘤 B16細(xì)胞，人白血病HL 60細(xì)胞，人體紅血病K562細(xì)胞及喉癌細(xì)胞具有較好抑制效果，且部分作用優(yōu)于冬蟲(chóng)夏草[3]。 蛹蟲(chóng)草對(duì)多種病源微生物均有抑制作用。目前已發(fā)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草活性成分中起抗菌作用的主要成分是蟲(chóng)草素。Sugar等 (1998)發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)草素對(duì)念珠菌表現(xiàn)出良好的拮抗作用。Ahn等 (2000)利用平板試紙法證明了蛹蟲(chóng)草對(duì)類腐敗梭菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌有強(qiáng)烈的抑制作用，并確定是蟲(chóng)草素起主要作用，認(rèn)為蟲(chóng)草素可用于防治梭菌引起的腸道疾病[3]。 保護(hù)肝腎及呼吸系統(tǒng) 蛹蟲(chóng)草菌絲能明顯改善慢性腎功能衰竭患者的身體狀況如提高肌酐清除率，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，糾正負(fù)氮平衡等，提高患者的生活質(zhì)量。程曉霞等 (2003)認(rèn)為人工蟲(chóng)草提取物能夠防治慶大霉素導(dǎo)致的急性腎小管損傷，抑制人體自身低密度脂蛋白 ( LDL)引起的人腎小球膜細(xì)胞增生[3]。 清除人體自由基 蛹蟲(chóng)草對(duì)體內(nèi)自由基具有很好的清除能力。王 琦 ( 2002 )報(bào)道，蛹蟲(chóng) 草能提高老齡老鼠體內(nèi)的超氧化物歧化酶 ( SOD )和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶 ( GSH2Px ) 的活性并降低過(guò)氧化脂質(zhì) ( LPO)的含量，延緩器官及機(jī)體的衰老[3]。 調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)作用 蛹蟲(chóng)草主要在免疫器官、免疫細(xì)胞及免疫分子等水平上發(fā)揮作用，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。崔新穎等 ( 2004)報(bào)道蛹蟲(chóng)草能顯著提高小鼠脾、胸腺的重量和腹腔巨噬細(xì)胞數(shù)量及吞噬活性[3]。 蛹蟲(chóng)草還具有其他作用，如雄激素樣作用 ，能提高胰島素的分泌；賈景明等 ( 2003 )證明了蛹蟲(chóng)草對(duì)血乳酸的消除及延緩疲勞的發(fā)生也有較明顯的作用[3]。我國(guó)是第一個(gè)對(duì)蛹蟲(chóng)草進(jìn)行商業(yè)化栽培生產(chǎn)的國(guó)家。1986年吉林省蠶科研究所以家蠶和柞蠶為寄主培養(yǎng)蛹蟲(chóng)草，獲得與天然蛹蟲(chóng)草相一致的子實(shí)體 ，開(kāi)啟了我國(guó)蛹蟲(chóng)草人工栽培的新紀(jì)元。大米、小米或高粱米等可為蛹蟲(chóng)草子實(shí)體生長(zhǎng)提供部分碳源[3]。 沈陽(yáng)市農(nóng)科所等單位于1986 1987年在大米培養(yǎng)基和柞蠶蛹上接種北蟲(chóng)草菌，均獲得完整的子座。經(jīng)檢測(cè)和臨床研究證實(shí)，人工培育的北蟲(chóng)草具有和野生蟲(chóng)草相似的化學(xué)成分、藥理作用及臨床療效，完全可以作野生蟲(chóng)草的替代品，用于醫(yī)療及保健等領(lǐng)域[4]。張顯科(1997)成功利用小米加上適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)液培育出正常的子實(shí)體。李 以大米為基本培養(yǎng)基加入營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)出正常子座，而以小米替代大米時(shí)則只形成橙紅色菌絲結(jié)塊，營(yíng)養(yǎng)液對(duì)子實(shí)體的正常形成可能有重要作用[3]。劉荻(2004)證明了蛹蟲(chóng)草能利用植物蛋白，但仍以動(dòng)物蛋白為佳。在培養(yǎng)條件方面，溫度以 15℃～2 5 ℃為宜，不能持續(xù)低于 10 ℃，亦不能高于 30 ℃，否則會(huì)導(dǎo)致菌絲停滯生長(zhǎng)或死亡。濕度要求在 60 ％ ～90 ％之間。子實(shí)體生長(zhǎng)階段每天需要光照長(zhǎng)達(dá) 10～12 h ，生長(zhǎng)周期約為 45～ 60 d 。利用蠶蛹及蟬蛹等昆蟲(chóng)寄主生產(chǎn)子實(shí)體是另一重要培育途徑[3]。近年來(lái)，寧德市華林微生物技術(shù)研究所與廣東省梅州市華芝源食用菌推廣站生產(chǎn)基地合作，經(jīng)多年攻關(guān)，業(yè)已形成較為成熟的具低成本、高工效、 便于推廣等特點(diǎn)的盆栽北蟲(chóng)草技術(shù)。第一潮轉(zhuǎn)化率平均達(dá) 5 5 ％以上，子實(shí)體的形態(tài)、色澤接近于天然北蟲(chóng)草產(chǎn)品，品質(zhì)優(yōu)良。以直徑為35厘米，高 l2 厘米的普通塑料盆為例。每盆裝入 130克大米，蠶蛹粉 3．5克，磷酸二氫鉀 4克，葡萄糖4克，維生素 B1 l0毫克，水 160毫升[5]。冉翠香等認(rèn)為溫差刺激對(duì)子實(shí)體原基形成的效果較好， 發(fā)現(xiàn)人工蛹蟲(chóng)草培育成功的關(guān)鍵在于誘發(fā)子實(shí)體原基的形成[6]。目前蛹蟲(chóng)草的栽培主要采用以下3種方法： ①將蛹蟲(chóng)草菌接種在柞蠶、 家蠶、 蓖麻蠶等昆蟲(chóng)的活蛹體內(nèi)， 于一定的溫濕度和光照條件下培養(yǎng)。 古恒生、蔣本律、朱宏圖等先后用此法成功地人工培育出蛹蟲(chóng)草[6]。陳順志等研究表明， 子座的色澤與光線強(qiáng)弱有關(guān)， 并瓶栽蛹蟲(chóng)草獲得成功，開(kāi)始以活蛹為培養(yǎng)基的蛹蟲(chóng)草規(guī)?；a(chǎn)[6]。 ②采集野生的蛹蟲(chóng)草進(jìn)行菌種的分離、 純化， 然后將蛹蟲(chóng)草菌接種在固體培養(yǎng)基上， 于2 0～2 5℃及一定的濕度和光照條件下培養(yǎng)， 經(jīng)3 5～ 4 5 d子實(shí)體即可達(dá)到采收標(biāo)準(zhǔn)[6]。鄭晴霞等直接利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行菌絲體的培養(yǎng)， 首次將蛹蟲(chóng)草菌直接栽培在固體培養(yǎng)基上， 并長(zhǎng)出子座[6]。姜明蘭等用野生菌進(jìn)行組 織分離， 在 PDA培養(yǎng)基上分離、 純化出優(yōu)良的原種， 經(jīng)人工馴化的原種在PDA液體培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)后， 接種到大米培養(yǎng) 基上， 獲得先端膨大呈棒狀的子實(shí)體[6]。張顯科等研究認(rèn)為，高粱米、小米、玉米渣和蠶蛹可以代替大米栽培蛹蟲(chóng)草[6]。劉守華等得出大米加豬血培養(yǎng)基更適宜蟲(chóng)草菌絲的生長(zhǎng)，使產(chǎn)量有所提高[6]。錢(qián)康南等用雞蛋做培養(yǎng)基成功培育出蛹蟲(chóng)草。真正實(shí)現(xiàn)了蛹蟲(chóng)草工廠化生產(chǎn)[6]。③采用液體深層發(fā)酵培養(yǎng)蛹蟲(chóng)草菌絲體。繼人工固體栽培蛹蟲(chóng)草獲得成功 后，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的探索性研究，通過(guò)液體深層培養(yǎng)法獲得的蟲(chóng)草菌絲體，菌絲體的化學(xué)組成與從自然界中采集的蛹蟲(chóng)草的化學(xué)組成接近， 而且可 以從發(fā)酵液中得到人們需要的物質(zhì) ，還能大大縮短生產(chǎn)周期，許多研究人員對(duì)蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基的配方進(jìn)行了研究[6]。邵愛(ài)娟等研究得出蟲(chóng)草在進(jìn)行菌絲發(fā)酵時(shí)碳源以蛋白胨為最優(yōu)，采用 1 ： 2或 1：3的碳氮比較為合適[6]。 李宗軍等研究表明，蛹蟲(chóng)草菌絲發(fā)酵最佳培養(yǎng)基組成為5％大米粉、1．5％豆餅粉、1．5％麥芽粉 、0．1％KH2P04，0．05％MgS047H20[6]。陳晉安等研究得出蛹蟲(chóng)草發(fā)酵的適宜培養(yǎng)基組成(蔗糖5．O％、玉米漿3．O％、 酵母膏O．5％、 MgS047H20 0．05％、 KH2PO40．05％)[6]。柴建萍等得出玉米粉為最優(yōu)碳源，蠶蛹粉為最優(yōu)氮源，MgSO4為最優(yōu)無(wú)機(jī)鹽[6]。汪宇等以發(fā)酵得率為指標(biāo)優(yōu)化培養(yǎng)基成分，初步得到蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)條件和生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)，為蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)工業(yè)化生產(chǎn)提供了一定的理論依據(jù)[6]。明代中葉14001465年間蛹蟲(chóng)草從浙江傳到日本，并在貴族中廣泛食用。1723年由歐洲的傳教士尚加特利茨庫(kù)把從中國(guó)西北采到的冬蟲(chóng)夏草帶到法國(guó)，由Reaumur在法國(guó)科學(xué)院的學(xué)士大會(huì)作了介紹，并登在會(huì)議紀(jì)要上；Vaillant于1723年在( Botanicon Parisiense )中報(bào)道了大團(tuán)囊蟲(chóng)草和蛹蟲(chóng)草，20世紀(jì)以前人們只對(duì)野生蛹蟲(chóng)草進(jìn)行研究， 20世紀(jì)30～60 年代，國(guó)外研究人員進(jìn)行了有關(guān)蛹蟲(chóng)草生態(tài)調(diào)查和馴化、人工栽培的研究[6]。1878年由Saccardo歸為蟲(chóng)草屬（Cordyceps），冬蟲(chóng)夏草的研究在國(guó)外引起重視，中國(guó)蟲(chóng)草也開(kāi)始馳名于世。1932年，日本的小林和久山首次利用米飯為主的培養(yǎng)基培養(yǎng)出蛹蟲(chóng)草子座[3]。1943年，Berkeley鑒定了中國(guó)的冬蟲(chóng)夏草，正式定名為：中國(guó)蟲(chóng)草Sphaeri sienesis。冬蟲(chóng)夏草以其藥性溫和、補(bǔ)而不峻的特點(diǎn)一直以來(lái)倍受關(guān)注，但其特殊的生長(zhǎng)條件又使其成為稀缺資源[7]。近年來(lái)，很多研究都表明，人工栽培的蛹蟲(chóng)草化學(xué)成分及藥理作用與冬蟲(chóng)夏草相似，但價(jià)格卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于冬蟲(chóng)夏草，因此，蛹蟲(chóng)草的開(kāi)發(fā)應(yīng)用具有極大的潛在市場(chǎng)[6]。由于巨大的市場(chǎng)需求和極其有限的自然資源，造成了市場(chǎng)上的蛹蟲(chóng)草產(chǎn)品良莠不齊，因此，必須加強(qiáng)對(duì)蛹蟲(chóng)草的開(kāi)發(fā)與利用研究[8]。目前，蛹蟲(chóng)草的人工栽培技術(shù)已經(jīng)成熟， 并進(jìn)入了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)階段，但在栽培過(guò)程中仍有許多難題， 如菌種退化、 栽培技術(shù)不易掌握等問(wèn)題還有待于進(jìn)一步研究。在栽培時(shí)由于蛹蟲(chóng)草分布廣，種類繁多等因素，其藥理作用存在一定差異，應(yīng)加強(qiáng)蛹蟲(chóng)草菌種的選育與保存，選育出藥理成分高的品種。在人工栽培方法上，由于發(fā)酵法生產(chǎn)菌絲體的生產(chǎn)周期短，可以有針對(duì)性地提高某種或某些有效成分的含量，液體發(fā)酵法生產(chǎn)菌絲體將是今后蛹蟲(chóng)草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的重要發(fā)展方向，為蛹蟲(chóng)草在醫(yī)藥學(xué)方面進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)。同時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)蛹蟲(chóng)草的醫(yī)藥基礎(chǔ)研究，從分子水平揭示蛹蟲(chóng)草的藥理作用，為臨床使用蛹蟲(chóng)草提供客觀的科學(xué)依據(jù)，從而拓寬蛹蟲(chóng)草的臨床應(yīng)用范圍[6]。隨著人們對(duì)蛹蟲(chóng)草的研究越來(lái)越深入，蛹蟲(chóng)草這一藥用真菌必將具有更廣闊的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景，為蠶業(yè)資源開(kāi)發(fā)利用開(kāi)拓新的領(lǐng)域[9]。目前蛹蟲(chóng)草生產(chǎn)有多重方式，多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。最大的問(wèn)題是需要人工的地方太多，未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)必將是標(biāo)準(zhǔn)化，工業(yè)化的機(jī)器生產(chǎn)模式。第2章 生產(chǎn)工藝流程在實(shí)驗(yàn)室配制液體菌種，貯存等待接種培養(yǎng)基各個(gè)成分進(jìn)行裝瓶操作對(duì)灌裝完成的培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌操作（121℃，）冷卻到室溫 無(wú)菌操作下接種進(jìn)行暗培養(yǎng)（避光2025℃，濕度50%80%RH）3d光培養(yǎng)（日光燈2025℃ 50%80%RH） 采收（一般從見(jiàn)光到采收需要40d） 烘干 包裝進(jìn)入儲(chǔ)藏庫(kù)生產(chǎn)過(guò)程中出現(xiàn)的菌種退化現(xiàn)象大大限制了蛹蟲(chóng)草的大規(guī)模生產(chǎn)，嚴(yán)重影響了蛹蟲(chóng)草的產(chǎn)量[8]。所以配備專門(mén)配備軍菌種的實(shí)驗(yàn)室，選用菌絲潔白、適應(yīng)性強(qiáng)、見(jiàn)光后轉(zhuǎn)色和出草快、性狀穩(wěn)定的速生高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌種，是獲得栽培成功和高產(chǎn)的關(guān)鍵。培養(yǎng)基配方 大米70．0％，蠶蛹粉23．0％，％，蛋白胨1．5％，酵母粉0．5 ％，維生素B %。每瓶干料約50g,加入水50g。原料精選驗(yàn)收大米選用無(wú)霉變、無(wú)異味、無(wú)雜質(zhì)的粳米，要求是當(dāng)年新產(chǎn)的干燥無(wú)霉粒米，濕度大則不宜儲(chǔ)存且易滋生雜菌，這對(duì)蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)是致命的，剛收購(gòu)的表面上附著很多的塵土和麥殼，浸泡裝瓶前應(yīng)進(jìn)行清理除雜。裝瓶后用專用小推車(chē)將裝好的栽培瓶推入滅菌柜內(nèi)滅菌。采用高壓滅菌柜進(jìn)行高壓滅菌，在121℃， min即可。滅菌后瓶?jī)?nèi)米飯應(yīng)上下干濕一致，米