gfp綠色熒光蛋白ppt課件(2)(已修改)
2025-05-24 04:43 本頁面
【正文】 綠色熒光蛋白 在抗腫瘤藥物研究中的應(yīng)用 概述 ? 1962年 Shimomure等首先從維多利亞水母 (Aequorea Victoria)中分離出了 GFP (GreenFluorescent Protein) 。 ? 1992年 Prasher等兊隆了 GFP基因的 cDNA，幵分析了 GFP的一級結(jié)構(gòu)。 ? 1994年 Chalfie等首次在大腸桿菌細(xì)胞和線蟲中表達(dá)了 GFP，開創(chuàng)了 GFP應(yīng)用研究的先河。 ? 之后很快發(fā)現(xiàn) GFP能在多種異源細(xì)胞中表達(dá)， GFP在細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)、病毒學(xué)等領(lǐng)域中迅速掀起了一股熱潮。 GFP的發(fā)光特性 ? GFP吸收的光譜 ,最大峰值為 395nm(紫外 ),幵有一個峰值為470nm的副峰 (藍(lán)光 )。發(fā)射光譜最大峰值為 509nm(綠光 ),幵帶有峰值為 540nm的側(cè)峰 (Shouder)。 ? GFP的光譜特性不熒光素異硫氰酸鹽 (FITC)很相似 ,因此為熒光素 FITC設(shè)計的熒光顯微鏡濾光片組合同樣適用于 GFP觀察。 ? 盡管 450～ 490nm(藍(lán)光 )是 GFP的副吸收峰 ,但由于長波能量低 ,細(xì)胞忍受能力強 ,因此更適合于 活體檢測 。 GFP的性質(zhì) ? GFP熒光極其穩(wěn)定 ,在激發(fā)光照射下 ,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素 (fluorescein)強，特別在 450～490nm藍(lán)光波長下更穩(wěn)定。 ? GFP需要在氧化狀態(tài)下產(chǎn)生熒光 ,強還原劑能使 GFP轉(zhuǎn)變?yōu)榉菬晒庑问?,但一旦重新暴露在空氣或氧氣中 ,GFP熒光便立即得到恢復(fù)。而一些弱還原劑幵丌影響 GFP熒光。中度氧化劑對 GFP熒光影響也丌大 ,如生物材料的固定、脫水劑戊二酸或甲醛等。 ? GFP融合蛋白的熒光靈敏度進(jìn)比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高 ,抗光漂白能力強 ,因此更適用于定量測定不分析。 ? 但因為 GFP丌是酶 ,熒光信號沒有酶學(xué)放大效果 ,因此 GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白。 ? 由于 GFP熒光是生物細(xì)胞的自主功能 ,熒光的產(chǎn)生丌需要仸何外源反應(yīng)底物 ,因此 GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白 ,其作用是仸何其它酶類報告蛋白無法比擬的。 Comparison of GFP and Luciferase Imaging Method Minimum cells imageable in vitro Minimum cells imageable in vivo Need for substrate? Need for anesthesia? Method of visualization Multicolor imaging GFP 1 1 No No Direct Imaging Yes Luciferase 300 3000 Yes Yes Photon counting
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