【正文】 《 色譜分析 》 ? 第一章 緒論 ? 第二章 經(jīng)典柱層析 ? 第三章 平面色譜法 ? 第四章 氣相色譜法 ? 第五章 高效液相色譜法 ? 第六章 其他色譜技術(shù) ? 第七章 色譜分析樣品處理 參考書目 (1) 傅若農(nóng) 色譜分析概論 (2) 達(dá)世祿 色譜學(xué)導(dǎo)論 (3) 鄒漢法 高效液相色譜法 (4) 劉虎威 氣相色譜方法及應(yīng)用 (5) 何麗一 平面色譜方法及應(yīng)用 第一章 緒論 混合物最有效的分離、分析方法 俄國(guó)植物學(xué)家 茨維特 于 1903年研究 植物色素 時(shí)使用的示意 裝置： ? 其中的一相固定不動(dòng)，稱為 固定相 ； ? 另一相是攜帶試樣混合物流過此固定相的流體（氣體或液體），稱為 流動(dòng)相 。 色譜法的出現(xiàn) 色譜法 利用混合物中各組分在兩相間分配系數(shù)的不同 ,當(dāng)兩項(xiàng)作相對(duì)位移時(shí)，各組分在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時(shí)間不同，從而獲得分離（各組分按一定次序由固定相中流出）。 與適當(dāng)?shù)闹髾z測(cè)方法結(jié)合，實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測(cè)。 ? 兩相及兩相的相對(duì)運(yùn)動(dòng)構(gòu)成了色譜法的基礎(chǔ) 色譜法的特點(diǎn) （ 1） 分離效率高 復(fù)雜混合物 ， 有機(jī)同系物 、 異構(gòu)體 。 手性異構(gòu)體 。 （ 2） 靈敏度高 可以檢測(cè)出 μ (106)級(jí)甚至 (109)級(jí)的物質(zhì)量 。 （ 3） 分析速度快 一般在幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣的分析 。 （ 4） 應(yīng)用范圍廣 氣相色譜：沸點(diǎn)低于 400℃ 的各種有機(jī)或無(wú)機(jī)試樣的分析 。 液相色譜：高沸點(diǎn) 、 熱不穩(wěn)定 、 生物試樣的分離分析 。 不足之處 ： 被分離組分的定性較為困難 。 氣相色譜 （ 流動(dòng)相為氣體 ） 液相色譜（ 流動(dòng)相為液體） 柱色譜 平面色譜 吸附色譜 分配色譜 離子交換色譜 排阻色譜 流動(dòng)相物態(tài) 固定相使用形式 分離過程機(jī)制 流動(dòng)相為氣體 （ 稱為載氣） 固定相為固體吸附劑 氣相色譜 氣固色譜 氣液色譜 流動(dòng)相為氣體 （ 稱為載氣） 固定相為液體 流動(dòng)相為液體 （淋洗液） 固定相為固體吸附劑 。 液相色譜 液固色譜 液液色譜 流動(dòng)相為液體 （淋洗液）固定相為液體 按分離柱不同可分為：填充柱色譜和毛細(xì)管柱色譜 第二章 經(jīng)典柱層析 ? 1. 吸附的分類 ? 物理吸附（特點(diǎn)：無(wú)選擇性；吸附與解吸可逆） ? 常用的硅膠、氧化鋁為這一類型； 應(yīng)用最廣 ? 化學(xué)吸附（特點(diǎn)：具有選擇性；吸附十分牢固，甚至不可逆） ? 如黃酮等酚酸性化合物被氧化鋁吸附、生物堿被硅 ? 膠的吸附； 應(yīng)用較少 ? 半化學(xué)吸附（介于上述之間，如聚酰胺對(duì)黃酮、酚類、醌類的 ? 氫鍵吸附） 有一定應(yīng)用 ? 2. 極性及其強(qiáng)弱判斷 ? 極性強(qiáng)弱是支配物理吸附過程的主要因素 ? 所謂極性乃是一種抽象概念，用以表示分子中電荷不對(duì)稱的程度，大體上與偶極矩、極化度、介電常數(shù)等概念相對(duì)應(yīng) 官能團(tuán)的極性強(qiáng)弱比較 ? 3. 吸附色譜 ? 吸附色譜法 ,是指用吸附劑作固定相 ,利用試樣對(duì)吸附劑表面的吸附差異來進(jìn)行分離分析的方法 ? 吸附色譜三要素 （吸附劑、洗脫劑、 試樣） 吸附劑一般是多孔性物質(zhì)，具有較大的比表面積，在表面有許多吸附中心。 常用的吸附劑 有：硅膠、氧化鋁、聚酰胺、活性碳等 硅 膠 ? 吸附性來源于硅羥基 ? 硅羥基有三種 結(jié)合型 活性型 游離型 ? 三種硅羥基吸附性強(qiáng)弱為： ? 硅膠吸附劑的缺點(diǎn)：對(duì)弱酸性敏感的化合物會(huì)被破壞 氧化鋁 ? 吸附性來源于鋁原子上未公用電子對(duì) ? 堿性吸附劑，適用于堿性（如生物堿）和中性化合物的分離 ? 缺點(diǎn)：有時(shí)會(huì)引起 異構(gòu)化、氧化、皂化、脫除氯化氫形成雙鍵 等副作用。 聚酰胺 ? 通過形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附； ? 分子中的酰胺羰基作為質(zhì)子受體； ? 或以酰胺鍵上的 NH作為質(zhì)子給體； ? 適用范圍：酚類、黃酮類、醌類 。 溶劑的極性 ? 溶劑的極性 :與介電常數(shù)大小一致 ? ? 環(huán)己烷 ? 苯 ? 無(wú)水乙醚 ? 氯仿 極性遞增 ? 乙酸乙酯 ? 乙醇 ? 甲醇 ? 水 ? ◆ 按照 極性增強(qiáng) 順序，常用混合洗脫溶劑 ? 體系如下： ? (己烷 /苯 ) → (苯 /乙醚 ) → ( 苯 /乙酸乙酯 ) ? → ( 氯仿 /乙醚 ) → ( 氯仿 /乙酸乙酯 ) → ? (氯仿 /甲醇 ) → ( 丙酮 /水 ) → （甲醇 /水） 三要素的相互關(guān)系 第三章 平面色譜法 ? 第一節(jié) TLC的特點(diǎn)、技術(shù)參數(shù) ? 第二節(jié) TLC的制板、點(diǎn)樣、展開、顯色 ? 第三節(jié) TLC的定性與定量分析 ? 第四節(jié) TLC的應(yīng)用 ? 第五節(jié) 紙色譜簡(jiǎn)介 第一節(jié) 概 述 ? 1938年俄國(guó)人首先實(shí)現(xiàn)了在氧化鋁薄層上分離一種天然藥物。 1965年德國(guó)化學(xué)家 Stahl出版了 “ 薄層色譜法 ” 一書，推動(dòng)了這一技術(shù)的發(fā)展。 ? 因 TLC法設(shè)備簡(jiǎn)單，分析速度快，分離效率高，結(jié)果直觀，很快被用作定性和半定量的方法。 ? 70年代中后期發(fā)展了高效薄層色譜。 80年代以后發(fā)展了薄層色譜光密度掃描儀，和各步操作的儀器化，并實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)化。 ? 薄層層析流動(dòng)相的移動(dòng)是依靠毛細(xì)作用。 ? 將試樣點(diǎn)在色譜濾紙或?qū)游霭宓囊欢?，并將該端浸在作為流?dòng)相的溶劑（常稱之為展開劑）中，隨著溶劑向上的移動(dòng)，經(jīng)過試樣點(diǎn)時(shí)，帶動(dòng)試樣向上運(yùn)動(dòng)。 TLC特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)： ? 設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、運(yùn)行費(fèi)用低； ? 分離時(shí)間短，工作效率高； ? 展開劑選擇范圍廣，展開方式多樣； ? 顯色方便，檢測(cè)手段豐富； ? 既可分析，又可制備； ? 試樣一般不需要經(jīng)過嚴(yán)格預(yù)處理即可分離。 缺點(diǎn)： ? 分離效率較低；不適用揮發(fā)性試樣分離；定性定量不便。 經(jīng)典柱層析 吸附薄層層析 分離時(shí)間 幾小時(shí) 幾分鐘～十幾分鐘 分離能力 較差 強(qiáng) 吸附劑粒度 粗，一般 100～200目 細(xì) 應(yīng)用范圍 制備性分離 分析，小量制備 兩者關(guān)系 TLC與高效液相色譜的比較 – 固定相和流動(dòng)相 ? TLC——流動(dòng)相流動(dòng)靠毛細(xì)作用力，流動(dòng)相選擇較少受限制，固定相不用再生。而 HPLC是在封閉的系統(tǒng)內(nèi)，流動(dòng)相流量靠泵控制，溶劑選擇受檢測(cè)器限制，固定相需再生。 – 樣品處理 ? TLC要求沒有 HPLC嚴(yán)格。 薄層色譜參數(shù) 比移值（ Rf值） :用來表征斑點(diǎn)位置的基本參數(shù)是保留因子，通常稱作 比移值 ，用 Rf表示。 Ls ? 相對(duì)比移值 ? 理論塔板數(shù) : n=16(D/W)2 ? 理論塔板高度 : H=L/n 分離度 ? 分離數(shù) : 第二節(jié) TLC的制板、點(diǎn)樣、 展開、顯色 黏合劑： ? 無(wú)機(jī)黏結(jié)劑 ——石膏（硫酸鈣），添加石膏的吸附劑以字母“ G‖表示。沒有黏結(jié)劑的吸附劑以字母“ H‖表示。 無(wú)機(jī)黏結(jié)劑的優(yōu)點(diǎn)是：耐高溫，耐酸堿，但涂鋪薄板動(dòng)作要快，否則勻漿易凝固 。 薄層強(qiáng)度差。 ? 有機(jī)黏結(jié)劑 ——羧甲基纖維素鈉（ CMC鈉）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。 優(yōu)點(diǎn)是薄層強(qiáng)度高、使用方便，缺點(diǎn)是不能用濃硫酸作顯色。 ? 添加劑 熒光指示劑 硝酸銀溶液 制板、活化 點(diǎn)樣 ； ； ； ； :內(nèi)徑 定量分析 :微量注射器 6. TLC:原點(diǎn)直徑最大不超過 5mm,一般 3mm。 高效 TLC: 12 mm 7. 邊緣效應(yīng) 邊緣效應(yīng) 展開劑選擇的實(shí)踐 (一 ): 微量圓環(huán)法 展開劑選擇的實(shí)踐 (二 ): 三角形法 展開劑選擇的理論基礎(chǔ) 展開劑的分類 顯色 ? 顯色方法 日光下觀察 ,劃出有色物質(zhì)的斑點(diǎn)位置 在紫外燈下 (254nm或 366nm),觀察有 無(wú)熒光的產(chǎn)生 ,用硅膠 G板 熒光淬滅法 ,適用于有紫外吸收的物質(zhì) , 用 GF254板 顯色劑顯色 ,破壞性檢出方法 通用顯色劑 定性分析 1. 與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品在 三種 不同 的展開劑中展開(加熔點(diǎn) )； 2. 制備 TLC，將待定性化合物分離后，刮下、洗脫，再波譜分析； 3. TLC與其它技術(shù)聯(lián)用 定量分析 1. 間接定量（洗脫測(cè)定法）； 2. 直接定量（薄層掃描法） 薄層掃描法 ：以一定波長(zhǎng)的光照射展開后的薄層色譜板上被分離組分的斑點(diǎn)，測(cè)定斑點(diǎn)對(duì)光的吸收強(qiáng)度或所發(fā)出的熒光強(qiáng)度，進(jìn)行定量分析的方法。 薄層吸收掃描法 薄層熒光