基因診斷ppt課件(已修改)
2025-05-10 22:56 本頁面
【正文】 基因診斷 Gene Diagnosis ? 疾病的根本原因 : 疾病的各種表型的改變 是 基因的改變 造成的 ?基因診斷 : 采用 分子生物學的技術方法 來分析受檢者的 某一特定基因的結構 (DNA水平 )或 功能 (RNA水平 )是否異常，以此來對相應的疾病進行診斷。 是病因的診斷。 檢查基因的存在、缺陷或表達異常，對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。 基因診斷 (Gene Diagnosis)的含義 基因診斷的原理 基因診斷的原理： ?DNA診斷 檢測相關基因的結構及其表達功能是否正常。 ?RNA診斷 對表達產物 mRNA質和量表 達的分析。 第一節(jié) 基因診斷的技術方法 一、基因診斷中常用的分子生物學技術 ㈠ 核酸分子雜交 ㈡ PCR ㈢ SSCP（ PCRSSCP） ㈣ 限制酶酶譜分析 ㈤ DNA序列測定 ㈥ DNA芯片技術 核酸分子雜交：按照堿基互補配對原則，將不同來源的序列互補單鏈的 DNA/DNA， RNA/RNA，互補配對成雙鏈雜交分子，這一過程叫核酸分子雜交。 一、原位分子雜交技術 DNA變性 : 當溶液中的 DNA分子處于高溫或高 pH值 (13)條件下 , 維持雙螺旋在一起的堿基互補對就被破壞 ,DNA雙鏈解離 成兩條單鏈 ,這一過程叫 DNA變性。 DNA復性 : 當溫度降低至合適溫度或恢復 pH值 至中性，兩條裂 解的單鏈按堿基互補配對原則重新形成雙鏈結構 ,這一 過程叫 DNA復性 ,又叫 DNA雜交。 原位雜交：用核苷酸探針對特殊的核苷酸順序在其原位進行 (in situ hybridization)雜交 ,叫原位雜交?？捎? 于 DNA、 RNA定位研究。 熒光原位雜交（ fluorescence in situ hybridization,FISH） 印跡技術的類別及應用 （一） DNA印跡技術 (Southern blotting) 用于基因組 DNA、重組質粒和噬菌體的分析。 (不僅可以檢出特異的 DNA片段，而且能進行定位和測定分子量，可用于基因的酶切圖譜分析、基因突變分析等 ) （二） RNA印跡技術 (Northern blotting) 用于 RNA的定性定量分析。 （三）蛋白質的印跡分析 (Western blotting) 用于蛋白質定性定量及相互作用研究。 Southern 印跡雜交用于基因探測的基本過程 Southern印跡雜交常用于探測 DNA的限制性內切酶圖譜 。 通過檢測某個體特定基因及旁側區(qū)域限制性內切酶圖譜的變化 ， 可判斷是否發(fā)生了明顯的 DNA突變 。 具體方法圖示如下 ： 組織或細胞 含已知基因的重組質粒菌株 基因組 DNA 質粒 DNA 限制酶酶解及電泳分離 限制酶酶解及電泳分離 回收含已知基因的 DNA片段 轉移到硝酸纖維膜或尼龍膜 標記的探針 預雜交 雜交 洗膜 放射自顯影 圖 用 Southern 印跡雜交方法進行基因診斷的基本步驟 三種印跡技術的比較 分子雜交實驗 ① ② ③ 目 錄 放射自顯影照片 目 錄 核酸分子雜交 制備樣品 制備探針 雜交
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1