基因診斷ppt課件(已修改)
2025-05-10 22:56 本頁面
【正文】 基因診斷 Gene Diagnosis ? 疾病的根本原因 : 疾病的各種表型的改變 是 基因的改變 造成的 ?基因診斷 : 采用 分子生物學(xué)的技術(shù)方法 來分析受檢者的 某一特定基因的結(jié)構(gòu) (DNA水平 )或 功能 (RNA水平 )是否異常，以此來對(duì)相應(yīng)的疾病進(jìn)行診斷。 是病因的診斷。 檢查基因的存在、缺陷或表達(dá)異常，對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。 基因診斷 (Gene Diagnosis)的含義 基因診斷的原理 基因診斷的原理： ?DNA診斷 檢測(cè)相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)及其表達(dá)功能是否正常。 ?RNA診斷 對(duì)表達(dá)產(chǎn)物 mRNA質(zhì)和量表 達(dá)的分析。 第一節(jié) 基因診斷的技術(shù)方法 一、基因診斷中常用的分子生物學(xué)技術(shù) ㈠ 核酸分子雜交 ㈡ PCR ㈢ SSCP（ PCRSSCP） ㈣ 限制酶酶譜分析 ㈤ DNA序列測(cè)定 ㈥ DNA芯片技術(shù) 核酸分子雜交：按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，將不同來源的序列互補(bǔ)單鏈的 DNA/DNA， RNA/RNA，互補(bǔ)配對(duì)成雙鏈雜交分子，這一過程叫核酸分子雜交。 一、原位分子雜交技術(shù) DNA變性 : 當(dāng)溶液中的 DNA分子處于高溫或高 pH值 (13)條件下 , 維持雙螺旋在一起的堿基互補(bǔ)對(duì)就被破壞 ,DNA雙鏈解離 成兩條單鏈 ,這一過程叫 DNA變性。 DNA復(fù)性 : 當(dāng)溫度降低至合適溫度或恢復(fù) pH值 至中性，兩條裂 解的單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則重新形成雙鏈結(jié)構(gòu) ,這一 過程叫 DNA復(fù)性 ,又叫 DNA雜交。 原位雜交：用核苷酸探針對(duì)特殊的核苷酸順序在其原位進(jìn)行 (in situ hybridization)雜交 ,叫原位雜交?？捎? 于 DNA、 RNA定位研究。 熒光原位雜交（ fluorescence in situ hybridization,FISH） 印跡技術(shù)的類別及應(yīng)用 （一） DNA印跡技術(shù) (Southern blotting) 用于基因組 DNA、重組質(zhì)粒和噬菌體的分析。 (不僅可以檢出特異的 DNA片段，而且能進(jìn)行定位和測(cè)定分子量，可用于基因的酶切圖譜分析、基因突變分析等 ) （二） RNA印跡技術(shù) (Northern blotting) 用于 RNA的定性定量分析。 （三）蛋白質(zhì)的印跡分析 (Western blotting) 用于蛋白質(zhì)定性定量及相互作用研究。 Southern 印跡雜交用于基因探測(cè)的基本過程 Southern印跡雜交常用于探測(cè) DNA的限制性內(nèi)切酶圖譜 。 通過檢測(cè)某個(gè)體特定基因及旁側(cè)區(qū)域限制性內(nèi)切酶圖譜的變化 ， 可判斷是否發(fā)生了明顯的 DNA突變 。 具體方法圖示如下 ： 組織或細(xì)胞 含已知基因的重組質(zhì)粒菌株 基因組 DNA 質(zhì)粒 DNA 限制酶酶解及電泳分離 限制酶酶解及電泳分離 回收含已知基因的 DNA片段 轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或尼龍膜 標(biāo)記的探針 預(yù)雜交 雜交 洗膜 放射自顯影 圖 用 Southern 印跡雜交方法進(jìn)行基因診斷的基本步驟 三種印跡技術(shù)的比較 分子雜交實(shí)驗(yàn) ① ② ③ 目 錄 放射自顯影照片 目 錄 核酸分子雜交 制備樣品 制備探針 雜交
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