基因工程考試重點(已修改)
2024-11-12 09:59 本頁面
【正文】 第一章 ：通過工具酶，在體外將目的基因、基因片段或其他 DNA 元件進行切割，與適當?shù)妮d體進行連接和重組，導入相應(yīng)的受體細胞，并使外源基因進行復(fù)制和表達，定向改造受體生物性狀或獲得表達產(chǎn)物。 ：從一個親本細胞增殖而來的細胞群體。 3． 1997 年轉(zhuǎn)基因番茄上市，俗稱“百日鮮”。 4． DNA 的組成：五碳糖，即脫氧核糖；磷酸基團； 4 種含氮堿基。 5． RNA 聚合酶：核心酶和 σ 因子。轉(zhuǎn)錄終止子：依賴 ρ 因子，不依賴 ρ 因子。 6． 起始密碼： AUG 終止密碼： UAA,UAG,UGA ： 初始克隆中 的外源 DNA 片段往往較長，含有許多目的基因以外的 DNA 片段，在諸如表達、序列分析和突變等操作中不便進行，因此必須將目的基因所對應(yīng)的小段 DNA找出來，這個過程就叫亞克隆。 8．原核生物基因組成：啟動區(qū)， SD 區(qū)，基因區(qū)，轉(zhuǎn)錄終止子和終止因子；真核生物基因組成：轉(zhuǎn)錄啟動區(qū)，基因區(qū)，轉(zhuǎn)錄終止子。 結(jié)構(gòu)基因：轉(zhuǎn)錄啟動區(qū)，核糖體識別區(qū)，編碼區(qū)，轉(zhuǎn)錄終止區(qū)。 第二章 DNA，維護宿主遺傳穩(wěn)定的保護機制。 。宿主細胞通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質(zhì)和外來遺傳物質(zhì)的目的 。 ：依次取宿主屬名第一字母、種名頭兩個字母、菌株號、序號（羅馬字）。 4 限制與修飾系統(tǒng)的比較 Ⅱ （所占比例最大） Ⅰ Ⅲ 酶分子 內(nèi)切酶與甲基化酶 三亞基雙功能酶 二亞基雙功能酶 分子不在一起 識別位點 46bp, 大多數(shù)為 二分非對稱 57bp 非對稱 回文對稱結(jié)構(gòu) 切割位點 在識別位點中或 無特異性，至少在 在識別位點下 游 2426bp 靠近識別位點 識別位點外 1000bp 限制反應(yīng)與 分開的反應(yīng) 互斥 同時競爭 甲基化反應(yīng) 限制作用是 否 是 是 否需用 ATP (大都為回文對稱序列 ) 識別的長度一般為 48 個堿基， 6 個為常見。 EcoRⅠ G↓ AATTC Hind Ⅲ A↓ AGCTT BamHⅠ G↓ GATCC ：識別相同序列的限制酶稱為同裂酶，但它們的切割位點可能不同。 同尾酶 ：許多不同的限制酶切割 DNA 產(chǎn)生的末端是相同的，且是對稱的，即它們可產(chǎn)生相同的粘性末端，這些酶統(tǒng)稱為同尾酶。 ：是指在建議使用的緩沖液及溫度下，在 20ｕ l 反應(yīng)液中反應(yīng) 1h，使 1ugDNA完全消化所需的酶量。 :某些限制酶對同一底物中的有些位點表現(xiàn)出偏愛性切割，即對不同位置的同一個識別序列表現(xiàn)出不同的切割效率，這種現(xiàn)象稱作位點偏愛。 ：穩(wěn)定 PH 的緩沖劑、鎂離子、 DTT、 BSA 法： EDTA 可螯合鎂離子，終止酶切反應(yīng)，終止?jié)舛葹?10mmol/L；
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