基因工程考試重點(diǎn)-免費(fèi)閱讀
【正文】 其中，小片段DNA移動(dòng)速度最快，距離正極的點(diǎn)樣處最遠(yuǎn)。最常用的 T 載體有 pGEMT 和 pGEMT Tasy。 轉(zhuǎn)導(dǎo)： 是指通過(guò) λ 噬菌體（病毒）顆粒感染宿主細(xì)胞的途徑把外源 DNA 分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)的過(guò)程，必須將重組 λ 噬菌體 DNA 分子進(jìn)行體外包裝。 DNA 分子的遷移速度與其相對(duì)分子量成反比。 ：根據(jù)整合方式的不同可分為定點(diǎn)整合和隨機(jī)整合，按其作用可分為目的基因的插入或敲除以及隨機(jī)突變體庫(kù)的構(gòu)建。 第五章 —— 表達(dá)載體四部分：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因 。 —— YAC 載體功能強(qiáng)大，但有一些弊端。 （二）穿梭載體 ： 是指具有多個(gè)復(fù)制子能在兩個(gè)以上的不同宿主中 復(fù)制、增 殖 、選擇 的載體。 lac Z 基因是乳糖 lac 操縱子中編碼 β半乳糖苷酶的基因，乳糖及其衍生物可誘導(dǎo)其表達(dá)。 ： 在極端非標(biāo)準(zhǔn)條件下，限制酶能切割與識(shí)別序列相似的序列，這個(gè)改變的特殊性稱星星活性。宿主細(xì)胞通過(guò)甲基化作用達(dá)到識(shí)別自身遺傳物質(zhì)和外來(lái)遺傳物質(zhì)的目的 。 4． DNA 的組成：五碳糖，即脫氧核糖；磷酸基團(tuán)； 4 種含氮堿基。 5． RNA 聚合酶：核心酶和 σ 因子。 ：依次取宿主屬名第一字母、種名頭兩個(gè)字母、菌株號(hào)、序號(hào)（羅馬字）。 引起其原因：甘油濃度高，酶過(guò)量，離子強(qiáng)度低， PH 過(guò)高，加有機(jī)溶劑，其它 2 價(jià)離子代替鎂離子。 乳糖既是 lac 操縱子的誘導(dǎo)物，也是作用的底物。 (三 )表達(dá)載體 是指能 將目的基因在人工控制下置于生物宿主中大量生產(chǎn)的載 體 . 第四章 （ ColE1）、 抗性標(biāo)記（ 氨芐青霉素抗性標(biāo)記 ） 、 cos 位點(diǎn)。這主要表現(xiàn)在 3 個(gè)方面：首先，在 YAC 載體的插入片段會(huì)出 現(xiàn)缺失 （ deletion） 和基因重排 （ rearrangement） 的現(xiàn)象。 表達(dá)載體 :必須滿足克隆載體的基本要求，即能將外源基因運(yùn)載到大腸桿菌細(xì)胞中。 —— 同源重 組整合載體是最常用的整合載體，不僅含有大腸桿菌克隆載體的骨架，更主要的是含有一段便于同源重組的重組 DNA 片段。 不同構(gòu)型分子進(jìn)行電泳時(shí)的遷移速度大小順序?yàn)?:cccDNA＞ IDNA＞ ocDNA ：是指 DNA 在變性以后，在復(fù)性的過(guò)程中兩個(gè)不同來(lái)源地且同源的核酸分子形成雜合雙鏈的過(guò)程。 宿主細(xì)胞（受體細(xì)胞）： 從實(shí)驗(yàn)技術(shù)上講是能攝取外源 DNA并使其穩(wěn)定維持的細(xì)胞。 ，一方面改進(jìn)緩沖體系，另 一方面采用混合 DNA聚合酶。所以，應(yīng)該從最 小片段讀起，即，從下向上讀取。因?yàn)殡娪緯r(shí)是從上向下的，即上為負(fù)極，下為正極， DNA 帶負(fù)電，從負(fù)極向正極移動(dòng)。 ： TaqDNA 聚合酶具有末端轉(zhuǎn)移酶的活性，可在 DNA 片段的 3’末端添加一個(gè)核苷酸，通常為 A。 轉(zhuǎn) 染： 是將 純化的噬菌體 DNA 通過(guò)熱激的方法轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌的過(guò)程。 在一定的電場(chǎng)強(qiáng)度下， DNA 分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即分子本身的大小和構(gòu)型是主要的影響因素。 2 穿梭載體例子：大腸桿菌 /革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌穿梭載體，大腸桿菌 /酵母菌穿梭載體。 BAC 文庫(kù)構(gòu)建的
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