生物工程畢業(yè)設(shè)計(已修改)
2025-01-29 01:32 本頁面
【正文】 摘 要畢業(yè)論文作 者： 學(xué) 號： 院 系： 專 業(yè)： 生物工程 題 目：不同溶菌酶的提取、分離方法的比較及酶活力測定方法之探討 指導(dǎo)者: 評閱者： 2014 年 6 月 要摘 要廢棄蛋殼對于人類來說等于是一個還未開發(fā)的寶藏，它潛在的價值難以估計。本實驗以前人的研究為基礎(chǔ)，對溶菌酶的提取方法進(jìn)行了改進(jìn)。采用聚丙烯酸沉淀法從廢棄的新鮮蛋殼中提取溶菌酶，經(jīng)抽提、除雜蛋白、吸附、解離、鹽析等一系列步驟成功地從廢棄蛋殼中提取出了一定量的溶菌酶。討論了pH值、溫度、NaCl溶液濃度等因索對抽提鹽析及溶菌酶酶活力的影響，確定了最佳的抽提條件：，最佳抽提溫度為40℃，％，最佳鹽析pH為11；實驗采用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)的方法對溶菌酶進(jìn)行鑒定，研究了溶菌酶對枯燥芽孢桿菌的抑制作用，并用分光光度計測定了溶菌酶的的酶活力。實驗結(jié)果表明：，溶菌酶對枯草芽孢桿菌的生長具有抑制作用，在最佳的抽提條件下提取的溶菌酶酶活力最高，為15220U／mg。關(guān)鍵詞：蛋殼；溶菌酶；聚丙烯酸；酶活力IAbstractAbandoned eggshell is an untapped treasure for human，its potential value is difficult to this experiment based on the previous research，In the use of raw materials and Waste recycling point of view to improve the method of the extraction of lysozyme. the polyacrylic acid precipitation method of extracting lysozyme from eggshell was studied. The extraction, removing impurity protein, dissociation, salting out a series of steps successfully from the eggshell extract the trace of lysozyme and protein identification, and influences of pH value, temperature, concentration of NaCl solution on the extraction in the process of test, determine the optimum extraction conditions :the best extraction pH ,the best extraction temperature is 40℃, the mass fraction of NaCl optimal extraction agent for %,the optimum salting out pH 11,The experimentadopts themethod of polyacrylamide gel electrophoresis separation of proteins to identificate oflysozyme,tthedetermination of enzyme activityof lysozymeby spectrophotometry,studyon theinhibitory effect oflysozyme onboringbacillus,and pared to the enzyme activity at different extraction experimental results show that:in the 1000gwasteof fresheggscan extract,lysozyme,lysozymecan inhibit the growth ofBacillus subtilis,and lysozyme activity was highest in the optimal extraction conditions of extraction, is 15220U / mg.Key words ：Eggshell。lysozyme。polyacrylic acid。enzyme activityI東北電力大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文目 錄摘 要 IAbstract II目 錄 IV第1章 緒 論 1 溶菌酶的性質(zhì)及作用 1 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢 2 溶菌酶分離純化的方法 3 結(jié)晶法 4 色譜法 4 親和分離法 5 反膠團(tuán)萃取法 5 雙水相萃取法 6 超濾法 6 課題研究目的和意義 6 本課題主要研究內(nèi)容 7第2章 溶菌酶的提取、鑒定和酶活力的測定 8 實驗材料和藥品 8 試驗儀器 9 工藝流程 10 實驗過程 10 溶菌酶的提取 10 鹽折 11 溶菌酶的的鑒定 11 溶菌酶酶性的測定 13第3章 結(jié)果與討論 15 pH值的影響 15 pH值對抽提的影響 15 pH值對酶活的影響 16 溫度的影響 16 16 17 NaCl濃度的影響 18 18 不同的NaCl濃度對酶活的影響 19 鹽析時pH值對溶菌酶活性的影響 19 溶菌酶酶活性 20 溶菌酶抑菌效果 20 溶菌酶活力測定 20結(jié) 論 22參考文獻(xiàn) 23致 謝 2521第1章 緒 論第1章 緒 論在自然界中，溶菌酶廣泛地存在于動植物體內(nèi)和人的外分泌液中。目前可以從牛、羊馬等乳汁中分離出溶菌酶，從番木瓜、大麥、無花果、卷心菜等植物中也可分離出溶菌酶。雞蛋清中的溶菌酶是目前從動植物中分離最多的溶菌酶之一。 溶菌酶的性質(zhì)及作用溶菌酶( Lysozyme) 又稱胞壁質(zhì)酶或N一乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是由129個氨基酸構(gòu)成的堿性蛋白, 化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定，通常情況下為白色或微白色的無定性粉末或晶體性、味甜、無臭、無毒性，對革蘭氏陽性菌中的耐輻射微球菌有強(qiáng)力分解作用。 ~，分子量約14000道爾頓。，是一種專門用于微生物細(xì)胞壁的水解酶。（1）在醫(yī)學(xué)上，它是一種高效抑菌、殺菌、抗病毒蛋白質(zhì)，它能夠分解殺滅諸如葡萄球菌屬、鏈球菌屬等革蘭氏陽性菌，用于抗菌、抗病毒、止血、消炎等。它能水解細(xì)菌堅韌的細(xì)胞壁，使菌體失去保護(hù)的屏障而死亡，因而具有溶化細(xì)菌的作用，所以它的主要功用是水解細(xì)菌細(xì)胞壁，在細(xì)胞內(nèi)，則對吞噬后的病原菌起破壞作用。所以它具有抗炎功效，并以保護(hù)機(jī)體不受感染，它能分解稠厚的粘蛋白使其變稀薄，使膿性創(chuàng)口滲出物液化而易于排出；能清除壞死粘膜，加速粘膜組織的修復(fù)和再生；和抗生索具有很好的協(xié)同增效作用．用溶菌酶制成的漱口液還可預(yù)防齲齒[1]。它與抑菌劑并用可大大提高抗菌力，如溶菌酶中添加甘油、癸酸脂、六偏磷酸鈉調(diào)和的靜菌劑對大揚(yáng)桿菌和芽孢菌的溶菌效果特優(yōu)。氯化溶菌酶醫(yī)療效果更廣，有濃疲分散、出血抑制、組織修復(fù)、消炎鎮(zhèn)痛、抗過濾性病毒等作用，因而用氯化溶菌酶的制藥有消炎消痔、治感冒、皮膚病及眼、鼻、喉等用藥?？谇恢兄饕凝x齒病原菌是突變鏈球菌，溶菌酶可有效抑制突變鏈球菌的生長繁殖，防止齲齒的發(fā)生。目前日本已有含溶菌酶的牙膏生產(chǎn)[2]。（2）在食品工業(yè)中，若將溶菌酶加在鮮牛奶或奶粉中，可增強(qiáng)嬰兒的免疫力；溶菌酶具有殺菌防腐作用，作為一種無毒無害蛋白質(zhì)，還是一種安全性很髙的殺菌劑，應(yīng)用于食品工業(yè)中作為防腐劑延長商品的貨架期。溶
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