【正文】 指示劑到達分離膠后，電流升到30~45mA，電泳過程保持電流穩(wěn)定。20個培養(yǎng)皿分兩組平行操作，每個梯度分別設(shè)實驗組(B)和空白組(A)，空白組用無菌水代替溶菌酶溶液?！鱁450/(Ew)=U/mg式中△E450：450nm處每分鐘中吸光度的變化Ew：，mg：在以往文獻報道中，都是每隔1min、但本實驗由于底物懸液的不均勻性，從加入酶液到第15s時吸光度下降極為迅速，誤差較大，另外90s以后菌體和酶液已經(jīng)大量減少而更不能充分接觸、反應(yīng)，更加不穩(wěn)定，記錄結(jié)果無較大意義。最后，還要考慮到抽提要有利于切斷酶和細胞內(nèi)其它成分間可能有的聯(lián)系[9]。提取pH： 提取溫度：室溫25℃表33 不同的NaCl濃度對溶菌酶提取的影響抽提條件溶酶菌％NaCl1％NaCl% NaCl2％NaCl％NaCl圖35 不同的NaCl濃度對溶菌酶提取的影響從表33和圖35中可以看出隨著溶液中鹽的濃度增大，酶的提取量也增大，但是達到一定濃度后提取量有所下降，所以當(dāng)NaCl濃度為2%時酶的提取量較大。 溶菌酶酶活性 溶菌酶抑菌效果圖38 溶菌酶的抑菌作用從圖38可以看出，溶菌酶對枯草芽孢桿菌具有明顯的抑制作用。廢棄蛋殼數(shù)量之多可以說是取之不盡，用之不竭，如果能夠被深度加工綜合利用起來，那么可以為人類帶來無比龐大的資源，但是目前蛋殼的開發(fā)利用明顯滯后，主要是因為蛋殼的來源分散不易收集，易于污染。在這里，請允許我向我最尊敬的趙晴瀟老師表示真摯的謝意！同時，也要感謝魏群老師、鄭勝老師對我無私的幫助，感謝同學(xué)好友姜鴻儒、唐佳林、陳宗貴、韓振、劉志鵬等人對我的幫助，感謝生物101班同學(xué)在這四年中對我的關(guān)心和包容。(2) 在實驗過程中討論了不同pH值、溫度、NaCl溶液濃度等因索對抽提的影響，對比不同條件下溶菌酶的抽提量和不同條件下提取的溶菌酶的酶活力，確定了最佳的抽提條件：，最佳抽提溫度為40℃，％．最佳鹽析pH為11(3) 研究了溶菌酶對枯草芽孢桿菌生長的影響作用，發(fā)現(xiàn)溶菌酶對枯草芽孢桿菌生長有抑制作用(4) 計算不同條件下提取的溶菌酶的酶活力，在最佳抽提條件下提取的溶菌酶的酶活力最高，15220U／mg。圖37 鹽析時pH值對溶菌酶活性的影響圖37表明鹽析pH為11時，溶菌酶的酶活最大，并且pH在9～1l內(nèi)酶活變化曲線陡峭，提取的pH接近等電點，利于溶菌酶的析出，酶量增加，也使酶活性顯著升高，并且此處析出的溶菌酶活性較好。抽提時采用較高溫度進行試驗，也是充分考慮到溶菌酶的耐熱性較好和一些文獻資料而確定的。產(chǎn)生這種情況可能的原因是pH改變了酶的活性中心或與之有關(guān)的基團的解離狀況，因為酶要表現(xiàn)活性，它的活性部位有關(guān)的基團必須具有一定的解離形式，其中任何一種基團的解離形式發(fā)生變化都將使酶轉(zhuǎn)入“無活性”狀態(tài)；而活性部位以外的其它基團則無關(guān)緊要。此時每1 mg。細菌的活化與擴增：在無菌條件下，從已保存的菌種斜面上挑選單一菌落，轉(zhuǎn)接到10ml的液體培養(yǎng)基中，37℃水平搖床上培養(yǎng)3h，37℃培養(yǎng)8h。加樣：用手夾住兩塊玻璃板，上提斜插板使其松開，然后取下玻璃膠室去掉密封的硅膠框，注意在上述過程中手始終給玻璃膠室一個夾緊力，在將玻璃膠室凹面朝里置入電泳槽，插入斜板，將緩沖液加至內(nèi)槽玻璃凹面以上，外槽緩沖液加到距平板玻璃上沿3mm處即可，注意避免在電泳槽內(nèi)出現(xiàn)水泡。凝膠的聚合：首先制備分離膠，然后將凝膠液沿凝膠腔的長玻璃板的內(nèi)面緩慢用滴管滴入，小心不要產(chǎn)生氣泡。待有晶體析出后。3個小時以后，發(fā)現(xiàn)溶液基本澄清。目前雖然對溶菌酶的研究較多，但是缺乏適于工業(yè)化生產(chǎn)溶菌提取的可行性工藝及溶菌酶在食品中的研究，對溶菌酶的性質(zhì)等的報道也說法不一，為了更好的將溶菌酶應(yīng)用于醫(yī)藥、食品等行業(yè)中，有必要對溶菌酶的提取、性質(zhì)及應(yīng)用進行系統(tǒng)性的研究本試驗即以綜合利用蛋殼為目的，研究了適宜工業(yè)化生產(chǎn)的溶菌酶提取工藝，該工藝具有工藝過程簡單、提取效率髙、酶活力較高、成本低、生產(chǎn)周期短、可連續(xù)生產(chǎn)的特點，并對溶菌酶的穩(wěn)定性、抑菌能力等也進行了研究，為溶菌酶的應(yīng)用提供可行性依據(jù)[10]。 課題研究目的和意義溶菌酶存在于自然界的動物植物微生物中，除了人體之外，蛋清中的含量最為豐富，蛋殼膜中也有存在。這種反膠團的有機溶劑與蛋白質(zhì)水溶液混合時，一定條件下，蛋白質(zhì)分子能夠從水相進入到反膠團的中心水池，經(jīng)過分相后，再將有機相與另一水相接觸，改變條件，即可打開膠團，釋放蛋白質(zhì)分子，從而達到萃取分離的目的。由于生物親和相互作用的選擇性高，離心分離法操作簡便、易于放大，因此親和沉淀法不僅具有接近于親和層析法的純化效率，而且可彌補親和層析法放大困難的缺點。親和色譜在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質(zhì)有一定結(jié)合能力的分子，并且它們的結(jié)合是可逆的，在改變流動相條件時二者還能相互分離。而膜結(jié)晶作為一種新的結(jié)晶方法受到越來越多的注意和重視。目前，世界上只有美國、加拿大、日本等少數(shù)發(fā)達國家進行了工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，我國起步較晚，且存在提取率低、處理量小和產(chǎn)品比活低等缺點[6]。趙哲勛（1993)利用D201大孔離子交換樹脂從雞蛋殼膜中提取溶菌酶，他釆用靜態(tài)吸附，再經(jīng)洗脫、鹽析、透析純化得到了活力較髙的成品，活力13000。隨著溶菌酶的發(fā)現(xiàn)，科學(xué)工作者對溶菌酶進行了大量的研究。（5）環(huán)境工程中也用溶菌酶處理污水、污泥，即處理含有生物難降解物質(zhì)的廢水，它能加快污泥脫水速率，泥餅含水率下降，提高污泥消化率。 溶菌酶作為防腐劑應(yīng)用在食品中的研究日本較多，且有許多專利。它與抑菌劑并用可大大提高抗菌力，如溶菌酶中添加甘油、癸酸脂、六偏磷酸鈉調(diào)和的靜菌劑對大揚桿菌和芽孢菌的溶菌效果特優(yōu)。目前可以從牛、羊馬等乳汁中分離出溶菌酶，從番木瓜、大麥、無花果、卷心菜等植物中也可分離出溶菌酶。can inhibit the growth ofboringlysozyme,摘 要畢業(yè)論文作 者： 學(xué) 號： 院 系： 專 業(yè)： 生物工程 題 目：不同溶菌酶的提取、分離方法的比較及酶活力測定方法之探討 指導(dǎo)者: 評閱者： 2014 年 6 月 要摘 要廢棄蛋殼對于人類來說等于是一個還未開發(fā)的寶藏，它潛在的價值難以估計。method of polyacrylamide gel electrophoresis separation of proteins to identificate oflysozyme on,lysozyme,lysozymeenzyme activityI東北電力大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文目 錄摘 要 IAbstract II目 錄 IV第1章 緒 論 1 溶菌酶的性質(zhì)及作用 1 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢 2 溶菌酶分離純化的方法 3 結(jié)晶法 4 色譜法 4 親和分離法 5 反膠團萃取法 5 雙水相萃取法 6 超濾法 6 課題研究目的和意義 6 本課題主要研究內(nèi)容 7第2章 溶菌酶的提取、鑒定和酶活力的測定 8 實驗材料和藥品 8 試驗儀器 9 工藝流程 10 實驗過程 10 溶菌酶的提取 10 鹽折 11 溶菌酶的的鑒定 11 溶菌酶酶性的測定 13第3章 結(jié)果與討論 15 pH值的影響 15 pH值對抽提的影響 15 pH值對酶活的影響 16 溫度的影響 16 16 17 NaCl濃度的影響 18 18 不同的NaCl濃度對酶活的影響 19 鹽析時pH值對溶菌酶活性的影響 19 溶菌酶酶活性 20 溶菌酶抑菌效果 20 溶菌酶活力測定 20結(jié) 論 22參考文獻 23致 謝 2521第1章 緒 論第1章 緒 論在自然界中，溶菌酶廣泛地存在于動植物體內(nèi)和人的外分泌液中。所以它具有抗炎功