核酸的序列分析ppt課件(已修改)
2025-01-26 22:12 本頁面
【正文】 第五節(jié) 核苷酸序列分析 即 核酸 DNA分子一級結(jié)構(gòu)的測定，是現(xiàn)代分子生物學(xué)一項(xiàng)重要的技術(shù) 。 1963年， Sanger和 Thompson等人第一次完成胰島素 51個(gè)氨基酸的序列測定，這在當(dāng)時(shí)來說是一件了不起的大事。 70年代后期， Sanger和MaxamGilbert等人又建立了核酸序列測定的方法， Sanger雙脫氧末端終止法 和 MaxamGilbert化學(xué)裂解法 將核酸序列測定技術(shù)推進(jìn)到“ 直讀 ” 階段，使核酸序列測定變得遠(yuǎn)比蛋白質(zhì)氨基酸序列測定容易，這樣人們可以通過核酸序列和遺傳密碼推導(dǎo)出蛋白質(zhì)氨基酸的序列。 測序的常用方法 末端終止法 化學(xué)裂解法 DNA測序自動化 使用特異性引物與單鏈模板 DNA退火，在 DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸反應(yīng)，用 ddNTP終止，用 PAGE區(qū)分長度僅相差 1個(gè)核苷酸的 ssDNA，從而完成測序的方法。 用化學(xué)試劑在 A、 G、C、 T處特定的裂解DNA片段，產(chǎn)生一簇各種長度的短鏈，經(jīng)過 PAGE放射自顯影可直讀 DNA順序。 類似末端終止法，所不同的是用熒光染料標(biāo)記，計(jì)算機(jī)自動讀出。 優(yōu)點(diǎn) 簡便、迅速、應(yīng)用廣泛。 不需酶促反應(yīng)，可以對寡核苷酸測序。 高負(fù)荷， 1塊膠可測 16個(gè)樣品； 機(jī)讀不需放射自顯影；安全不用同位素；簡單迅速。 . Sanger雙脫氧鏈終止法 (dideoxytermination sequencing) 原理 ：雙脫氧（ 239。， 339。） 核苷酸可以象 239。脫氧核苷酸那樣直接摻入新合成的 DNA鏈中，但因 3’ 端不具 OH基， DNA鏈合成至此中斷。由于雙脫氧核苷酸在每個(gè) D
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