【正文】 ：小。 在絕大多數(shù)情況下都是利用 微生物的群體 來研究其屬性。 微生物的物種（菌株）一般也是以群體的 形式進行繁衍、保存。 培養(yǎng)技術在微生物學中具有重要意義。 培養(yǎng)物：在一定條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體。 混合培養(yǎng)物：含有多種微生物的培養(yǎng)物。 純培養(yǎng)物：只有一種微生物的培養(yǎng)物。（通常情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以重復的結果） 純培養(yǎng)技術是進行微生物學研究的基礎。 微生物個體微小的特點也決定了 顯微技術 是進行微生物研究的另一項重要技術，以為絕大多數(shù)微生物的 個體形態(tài) 及其 內部結構 只能通過顯微鏡才能進行觀察和 。 無菌技術： 用于分離、培養(yǎng)微生物的器具事先不含任何微生物。 在轉接，培養(yǎng)微生物時防止其他微生物 的污染，其自身也不污染環(huán)境。 微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌 常用器具：試管、玻璃燒瓶、培養(yǎng)皿 常用的滅菌方法 ；高壓蒸汽滅菌、高溫干熱滅菌 接種操作要點：在火焰附近進行熟練的無菌操作。 用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng) 培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基（固化劑：瓊脂） 菌落 colony：單個（或聚集在一起的一團）微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的，有一定形態(tài)結構的子細胞生長群體，稱為菌落。 菌苔 lawn；在固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片時，便成為菌苔。 不同微生物 在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落 或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征，可以成為對該微生物進行分類、鑒定的重要依據(jù)。 用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng) 使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成單個菌落的基本方法： 稀釋 。 固體培養(yǎng)基獲得微生物純培養(yǎng)的幾種方法 1 涂布平板法 ：使用較多的常規(guī)方法，但有時涂布不均勻 2 稀釋到平板法 ：操作較麻煩，對厭氧菌、熱敏感菌效果不好。 3 平板劃線法 4 稀釋搖管法 厭氧微生物的分離：厭氧罐，厭氧手套箱。 用液體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng) 采用液體培養(yǎng)基稀釋法，同一個稀釋度應有較多的平行試管，而有可能獲得純培養(yǎng)的那個稀 釋度的大多數(shù)試管（一般不超過 95%）應表現(xiàn)為沒有細菌生長。 單細胞（孢子）分離 一般采用顯微操作儀，在顯微鏡下進行。 操作難度與細胞大小成反比。 通過機械、空氣或油壓傳動裝置來減小手的動作幅度，在顯微鏡下用毛細管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個微生物細胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。 微生物在自然條件下存在的特點： 同一生態(tài)環(huán)境中混雜存在著不同種類的細菌 不同細菌在數(shù)量上存在著差異 選擇培養(yǎng) 微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化： 抑制大多數(shù)其他微生物的生長 使待分離的微生物成長的更快 使待分離的微生物生長突出 1 利用選擇培養(yǎng)法進行直接分離 待分離的微生物生長，其他微生物的生長被抑制。 高溫下培養(yǎng)：分離嗜熱細菌 培養(yǎng)基中不含 N：分離固氮菌 培養(yǎng)基加抗生素：分離抗性菌 2 利用選擇平板進行直接分離 牛奶平板：分離蛋白酶產生菌 選擇培養(yǎng)分離 富集培養(yǎng) ：特定的環(huán)境調節(jié) →僅適于該條件的微生物旺盛生長→待分離微生物在群落中的數(shù)量 大大增加→從自然界中分離到所需要的微生物 富集培養(yǎng)是微生物學最強有力的技術手段之一。營養(yǎng)和生理條件的幾乎無窮盡的組合形式可滿足各種從自然界選擇出特定微生物的需要。根據(jù)微生物的特殊要求，從自然界分理 處特定已知微生物種類，分離培養(yǎng)在特定環(huán)境中能生長的微生物。 第二節(jié) 顯微鏡和顯微技術 顯微鏡的種類： 普通光學顯微鏡（明視野顯微鏡） 暗視野顯微鏡 相差顯微鏡 熒光顯微鏡 透射電子顯微鏡 掃描電子顯微鏡 掃描隧道顯微鏡 分辨率：能辨別兩點之間最小距離的能力 反差：樣品區(qū)別于背景的程度 顯微技術：與顯微鏡的自身特點有關，但也取決于進行顯微觀察 時對顯微鏡的正確使用計良好的標本制作和觀察技術。 用浸沒油取代空氣的作用：節(jié)制折射率提高，分辨率得到提高：改變光折射角度，增加照明亮度。 分辨率與所用波長成反比 微生物類群與形態(tài)結構 第一節(jié)、細菌 一般形態(tài)及細胞結構 細菌基本形態(tài)：球狀、桿狀、螺旋狀 細菌大?。鹤畲螅喝庋劭梢姡?） 最小：與無細胞結構的病毒相仿。 細菌大小的測量方法：顯微鏡測微尺；顯微照相后根據(jù)放大倍數(shù)進行計算。 細菌 細胞結構 細胞壁 ：位于細胞最外的一層厚實、堅韌的外被。主要由 肽聚糖構成。主要功能： 1 固定細胞外形和提高機械強度。從而使其免受滲透壓等外力的損傷。 2 為細胞的生長、分裂和鞭毛的運動所必需、失去了細胞壁的原生質體，也就喪失 了這些重要的功能。 3 阻攔酶蛋白和某些抗生素等大分子物質（相對分子質量大于 800）進入細胞，保護細胞免受溶菌酶、消化酶和青霉素等有害物質的損傷。 4 賦予細菌具有特定的抗原性、致病性以及對抗生素和噬菌體的敏感性。 革蘭氏染色與細胞壁 革蘭氏陽性菌的細胞壁 特點：厚度大（ 20~80nm）、化學組分簡單，一般只含 90%肽聚糖和 10%磷壁酸。 肽聚糖：每一肽聚糖單體由 3 部分組成：雙糖單位 （ N乙酰胞壁酸、乙酰葡糖胺） 、四肽尾、肽橋 肽橋：起著連接前后連個四肽尾分子的橋梁作用。 磷壁酸：結合在革蘭氏陽性菌細胞壁上的一種 酸性多糖，主要成分為甘油磷酸或核糖醇磷酸。 磷壁酸 分為兩類，其一為壁磷壁酸，其二為膜磷壁酸 磷壁酸 主要生理功能： 細胞壁形成負電荷環(huán)境，增強細胞膜對二價陽離子的吸收 貯藏磷元素 增強某些致病菌對宿主細胞的粘連、避免被白細胞吞噬 革蘭氏陽性菌特異表面抗原的物質基礎 噬菌體的特異性吸附受體 能調節(jié)細胞內自溶素的活力，防止細胞因自溶而死亡。 革蘭氏陰性菌的細胞壁 肽聚糖：埋葬在外層膜之內，是僅由 1~2 層肽聚糖網狀分子組成的的薄層（ 2~3nm），含量約占細胞壁總重的 5%~10%,故對機械強度的抵抗力叫革蘭氏陽性菌 弱。 外膜；位于革蘭氏陰性菌 細胞壁外層，由脂多糖、磷脂和脂蛋白等若干種蛋白質組成的膜，有時也稱為外壁。 脂多糖：位于革蘭氏陰性細菌細胞壁最外層的一層較厚 （ 8~10nm）的類脂多糖類物質，由脂類 A、核心多糖和 0特異側鏈三部分組成。 脂多糖的主要功能 LPS 結構的多變，決定了革蘭氏陰性細菌細胞表面抗原決定簇的多樣性； LPS 負電荷較強，與磷壁酸相似，也有吸附 Mg2+Ca2+等陽離子以提高其在細胞表面濃度的作用，對細胞膜結果其穩(wěn)定作用。 類脂 A 是革蘭氏陰性菌細菌致病物質 —— 內毒素的物質基礎； 具有控制某些物質進 出細胞的部分選擇性屏障功能 許多噬菌體在細胞表面的吸附受體 外膜蛋白：嵌合在 LPS 和磷脂層外膜上的蛋白。 有 20 余種，但多數(shù)功能尚不清楚。 外膜蛋白有：孔蛋白、脂蛋白。 周質空間又稱：周質和壁膜間隙。在革蘭氏陰性菌中 ，一般指其外膜與細胞膜之間的狹窄空間，呈膠狀。 周質空間中存在著多種周質蛋白；水解酶類、合成酶類、結合蛋白、受體蛋白。 革蘭氏陽性菌： 肽聚糖層次多、厚（機械抗性強、對溶菌酶、青霉素敏感） 不含類脂和脂蛋白（不形成內毒素） 革蘭氏陰性菌： 肽聚 糖層次少、薄（機械抗性差、對溶菌酶、青霉素不敏感） 類脂、脂蛋白組成外膜（內毒素） 特殊細胞壁的細菌 抗酸性細菌：分枝桿菌和諾卡氏菌 細菌染色法 抗酸性染色 ： 1）細胞與堿性復紅和苯酚的混合液一起加熱 2）酸性酒精脫色 3）美藍復染 抗酸性染色陽性菌：紅色（抗酸