【正文】 關(guān)于印發(fā)《預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則》等 6 個(gè)技術(shù)指導(dǎo)原則的通知 國(guó)食藥監(jiān)注 [2022]493 號(hào) 2022年10月14日 發(fā)布 各省、自治區(qū)、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局（藥品監(jiān)督管理局）： 為規(guī)范疫苗研發(fā)行為，指導(dǎo)疫苗研究單位科學(xué)地開(kāi)展研究工作，根據(jù)《藥品管理法》、《藥品管理法實(shí)施條例》及《藥品注冊(cè)管理辦法》，我局組織制定了《預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《生物制品生產(chǎn)工藝過(guò)程變更管理技術(shù)指導(dǎo)原則》、《聯(lián)合疫苗臨床前和臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《多肽疫苗生產(chǎn)及質(zhì)控技術(shù)指導(dǎo)原則》、《 結(jié)合疫苗質(zhì)量控制和臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《預(yù)防用疫苗臨床試驗(yàn)不良反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)原則》等 6 個(gè)技術(shù)指導(dǎo)原則，現(xiàn)印發(fā)給你們，并請(qǐng)轉(zhuǎn)發(fā)轄區(qū)內(nèi)各有關(guān)單位。 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局 二 ○○五年十月十四日 預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則 前 言 由病毒、細(xì)菌或其他病原微生物為起始材料，經(jīng)培養(yǎng)增殖制成的減毒、滅活的病原體，或再經(jīng)純化、裂 解、亞單位（包括細(xì)菌類(lèi)毒素）等方法處理制備的富含免疫原性，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫學(xué)反應(yīng)而達(dá)到預(yù)防某種疾病的產(chǎn)品，為預(yù)防用疫苗。 本指導(dǎo)原則適用于用病毒、細(xì)菌或其他病原微生物制備的預(yù)防用疫苗，其目的是為該類(lèi)制劑提供一個(gè)共同的原則，指導(dǎo)制定臨床前研究的方案，和確定具體的研究?jī)?nèi)容。 一、基本原則 （一）應(yīng)符合國(guó)家《藥品管理法》等相關(guān)法律法規(guī)的要求； （二）對(duì)所預(yù)防的疾病的流行情況進(jìn)行研究 ,包括疾病的危害程度 所涉及的人群及病原的型和亞型等； （三）對(duì)研制該類(lèi)制品用于預(yù)防疾病的有效性、安全性及必 要性進(jìn)行分析； （四）應(yīng)對(duì)該制品用于預(yù)防該疾病的利益風(fēng)險(xiǎn)比進(jìn)行研究。根據(jù)該制品的預(yù)防方案可能達(dá)到的效果及可能出現(xiàn)的副作用或危害，對(duì)總體的利弊權(quán)衡進(jìn)行評(píng)價(jià)，并提出擬采取避免或減少其危害性或副作用的措施。這種評(píng)價(jià)將是該方案能否獲得批準(zhǔn)的重要依據(jù)之一。 二、用于疫苗研究用的菌毒種 研究疫苗所用的菌毒種必須證明為引起本病的細(xì)菌、病毒或其他病原體，如該菌毒株分離自人體，下述內(nèi)容必須清楚。 （一）菌毒株名稱(chēng)及來(lái)源： 1．菌毒株名稱(chēng) 2．菌毒株來(lái)源 （ 1）分離菌毒株的宿主一般情況； （ 2） 發(fā)病地點(diǎn)、發(fā)病日期；臨床確診日期、實(shí)驗(yàn)室確診日期；病人病程及病人轉(zhuǎn)歸。 3．菌毒株分離原樣本： 咽試子、漱口液、痰液、血液、糞便、尿液、尸解標(biāo)本的組織名稱(chēng)；取樣日期；取樣時(shí)病人的病期。 4．鑒于人類(lèi)的血液在同一時(shí)間內(nèi)較少感染多種病毒或細(xì)菌，而咽試子、漱口液、痰液、尿液、糞便等樣品難免污染其他外源因子，因此用病人血液分離的菌、毒株較適宜用于研究疫苗。 5．分離菌、毒株的其他自然樣本名稱(chēng)、來(lái)源、數(shù)量、取樣方法等。 （二）菌、毒株分離過(guò)程 1．用細(xì)胞分離病毒，所用細(xì)胞名稱(chēng)、代次、來(lái)源應(yīng)清楚，應(yīng) 進(jìn)行細(xì)胞無(wú)菌檢測(cè)、支原體和外原因子等檢測(cè)；病毒分離不宜使用腫瘤原性的細(xì)胞系。盡可能使用非腫瘤原性細(xì)胞，如人二倍體細(xì)胞或 Vero 細(xì)胞等。 2．用動(dòng)物分離病毒，對(duì)所用動(dòng)物名稱(chēng)、品系、級(jí)別、年齡、接種途徑、飼養(yǎng)條件和制備毒種的動(dòng)物臟器名稱(chēng)等須詳細(xì)記載；如再適應(yīng)到細(xì)胞，則還應(yīng)參照上述對(duì)分離用細(xì)胞的要求。 3．確定分離菌株所用培養(yǎng)基名稱(chēng)、種類(lèi)，以及分離培養(yǎng)的溫度和條件。 （三）菌、毒株分離傳代特性 應(yīng)包括樣品處理方法、首次盲傳確證菌毒株陽(yáng)性代次、菌毒株確證檢定方法、每代培養(yǎng)天數(shù)、病毒滴度、滴定方法、 動(dòng)物是否發(fā)病或死亡等資料。 （四）菌毒種建立和保存 應(yīng)包括原始菌毒種代次、滴度，添加的保護(hù)劑的名稱(chēng)和濃度、存儲(chǔ)條件等資料；原代菌毒種是指已適應(yīng)到可生產(chǎn)疫苗的細(xì)胞或培養(yǎng)基，可穩(wěn)定傳代、保留抗原性、并經(jīng)過(guò)檢定可用于疫苗生產(chǎn)的菌毒種。種子批的建立應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》 “生物制品制品檢定用菌毒種管理規(guī)程 ”的要求，應(yīng)對(duì)種子批進(jìn)行菌毒種的傳代和限定代次的研究，以證明主種子和工作種子批在規(guī)定代次內(nèi)的生物學(xué)特性與原始菌毒種的一致性。 （五）菌毒種的檢定 1．鑒別試驗(yàn)：可采用血清學(xué)、生物學(xué)、核酸序列分析等方 法證明為該菌毒種。明確該病原體及其它相關(guān)生物分子的基因序列及結(jié)構(gòu)，并與我國(guó)主要流行株的核苷酸和氨基酸同源性進(jìn)行分析以及明確其血清型、亞型和 /或基因型，對(duì)該種基因型或血清型的流行情況進(jìn)行分析，若存在不同的血清型或基因型，應(yīng)對(duì)所選擇的血清型或基因型與其它血清型或基因型交叉反應(yīng)或交叉保護(hù)性進(jìn)行分析和研究。 2．無(wú)菌檢查：按照現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》的要求進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。 3．外源因子檢查：按照現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》的相關(guān)要求進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定，取樣量應(yīng)足夠檢測(cè)試驗(yàn)的需要。 4．?dāng)U增能力和感染性滴度：應(yīng)能達(dá)到按生 產(chǎn)工藝要求順利生產(chǎn)合格疫苗的要求。應(yīng)建立測(cè)定菌毒種擴(kuò)增能力和感染性滴度的方法和標(biāo)準(zhǔn)，并提供這些擴(kuò)增能力和感染性滴度與疫苗有效性之間的相關(guān)性數(shù)據(jù)。 5．免疫原性檢查：菌毒種的免疫原性是衡量該疫苗是否有效的重要指標(biāo)，應(yīng)制定和建立測(cè)定菌毒種免疫原性的有效方法和標(biāo)準(zhǔn)，以評(píng)估該候選菌毒種能否進(jìn)行疫苗生產(chǎn)。 6．減毒特性 （ 1）如研制減毒活疫苗應(yīng)對(duì)原始菌毒株的生物學(xué)、血清型、基因型和免疫原性進(jìn)行研究；減毒方法、減毒過(guò)程、減毒程度和減毒后的生物學(xué)、血清型、基因型和免疫原性，并進(jìn)行減毒前后的特性對(duì)比，尤其要 對(duì)減毒后的安全性和免疫原性作出確切的結(jié)論； （ 2）應(yīng)建立減毒特性指標(biāo)的驗(yàn)證方法、動(dòng)物模型和減毒后安全性的標(biāo)準(zhǔn)以及檢測(cè)和警戒毒力回復(fù)的依據(jù)等； （ 3）對(duì)制備注射劑的減毒活疫苗，除一般的外源因子檢測(cè)外，還應(yīng)驗(yàn)證無(wú)逆轉(zhuǎn)錄病毒的污染。該驗(yàn)證方法可采用 PERT 法； （ 4）如已知該病毒具有嗜神經(jīng)毒性，其驗(yàn)證要求可參考《 IABS Scientific workshop on neurovirulence test for live virus vaccines, WHO,31 January 2022》。 三、疫苗的生產(chǎn)工藝研究 （一）建立菌毒種庫(kù) 應(yīng)建立三級(jí)種子庫(kù)。對(duì)種子庫(kù)的遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行分析，明確該種子庫(kù)可以傳代的次數(shù)。生產(chǎn)用菌毒種、細(xì)胞和涉及生產(chǎn)的工藝技術(shù)應(yīng)注意專(zhuān)利，應(yīng)進(jìn)行相關(guān)專(zhuān)利查詢。 （二）生產(chǎn)用細(xì)胞和 /或培養(yǎng)基 1．生產(chǎn)用細(xì)胞應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》中 “生物制品生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程 ”的要求，如用傳代細(xì)胞系應(yīng)建立三級(jí)細(xì)胞庫(kù)； 2．生產(chǎn)用培養(yǎng)基盡可能避免使用動(dòng)物來(lái)源和可能引起人體不良反應(yīng)的原材料，禁止使用來(lái)自瘋牛病疫區(qū)的牛源性原材料。 （三）疫苗原液生產(chǎn)工藝的研究 1．生產(chǎn)工藝的主要技術(shù)參數(shù)的確定 （ 1）病毒與細(xì)胞的接種比例、 MOI 的最佳參數(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)和病毒培養(yǎng)的最佳溫度、培養(yǎng)時(shí)間和收獲時(shí)間。菌毒種的接種量，培養(yǎng)和發(fā)酵條件等技術(shù)參數(shù)的研究確定； （ 2）滅活劑的選擇和依據(jù)； （ 3）滅活或裂解條件及滅活或脫毒效果的驗(yàn)證，滅活效果驗(yàn)證的依據(jù)、方法；滅活效果的驗(yàn)證，應(yīng)采用盡可能敏感的細(xì)胞或培養(yǎng)基和方法進(jìn)行； （ 4）原液的濃縮和 /或活性抗原的提取純化等工藝研究：純化和提取工藝中各種條件進(jìn)行優(yōu)化，純化和提取工藝對(duì)抗原活性成分是否影響，應(yīng)建立穩(wěn)定的純化工藝，包 括純化時(shí)的回收率、抗原活性和純度等的穩(wěn)定性；并制定相應(yīng)的質(zhì)控指標(biāo)和檢測(cè)方法，按 GMP 要求在符合 GMP 要求的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)； （ 5）初步確定起始投料、原液、半成品和成品的產(chǎn)出比的理論數(shù)據(jù)。 2．疫苗對(duì)佐劑的要求 目前能用于疫苗的佐劑多為氫氧化鋁，而鋁佐劑通常使疫苗產(chǎn)生的抗體滯后，且增加注射局部的副反應(yīng)機(jī)率。如疫苗的抗原能滿足免疫的需要，則不加佐劑為宜。如果在終制品中使用佐劑，則對(duì)以下問(wèn)題應(yīng)進(jìn)行研究，對(duì)于已經(jīng)明確有佐劑效應(yīng)或者已經(jīng)商品化的佐劑，只需提供該類(lèi)制劑的組分或化學(xué)組成，國(guó)內(nèi)外使用該類(lèi)制劑的情 況，無(wú)需再進(jìn)行毒理和安全性研究。若國(guó)內(nèi)外均未使用過(guò)該類(lèi)佐劑 ,則必須對(duì)其作用原理、安全性及佐劑效應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的研究并建立切實(shí)可行的評(píng)價(jià)方法。 （四）疫苗的配方研究 應(yīng)對(duì)疫苗的配方進(jìn)行研究，如疫苗中添加的穩(wěn)定劑成分，緩沖液、佐劑、以及凍干疫苗的賦形劑成分等是否對(duì)疫苗造成影響。 四、藥理、毒理和生物分布 疫苗不同于一般的化學(xué)藥品，藥理、毒理的實(shí)驗(yàn)要求具有特殊性，因此，該制品的藥理學(xué)試驗(yàn)主要包括發(fā)生作用的原理、生物效價(jià)與劑量的關(guān)系、免疫程序和接種途徑與效果的關(guān)系等；在毒理學(xué)方面主要考慮接種部位和全身的 病理反應(yīng)、以及機(jī)體對(duì)該疫苗的非期望的免疫應(yīng)答反應(yīng)和這種反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間。由于以上各方面是互相關(guān)聯(lián)的，因此，應(yīng)綜合考慮藥理、毒理和免疫原性或生物效價(jià)的因素。 應(yīng)建立適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)及檢測(cè)方法來(lái)評(píng)價(jià)疫苗的免疫原性或生物效價(jià)，如果有動(dòng)物模型或可建立動(dòng)物模型的，可以采用動(dòng)物模型直接評(píng)價(jià)疫苗的生物效價(jià)，如：對(duì)一些有動(dòng)物模型的感染性疾病，可以采用病原體的攻擊實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)該疫苗的保護(hù)效果。而且要建立劑量與生物效價(jià)的關(guān)系，通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化免疫程序和接種途徑。若無(wú)法建立動(dòng)物模型，應(yīng)建立能驗(yàn)證該疫苗有效性的體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 滅活疫 苗的生物分布較難檢測(cè)和評(píng)價(jià)。減毒活疫苗的生物分布應(yīng)建立敏感的動(dòng)物模型，可測(cè)定接種疫苗后的病毒血癥（或菌血癥）以及持續(xù)時(shí)間，排毒（菌）方式和途徑，對(duì)是否呈現(xiàn)體內(nèi)復(fù)制及感染的器官組織細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的研究。 五、質(zhì)量控制及檢定的要求 （一）生產(chǎn)過(guò)程中質(zhì)量監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)的建立及要求 在生產(chǎn)工藝的各個(gè)環(huán)節(jié)和步驟中的產(chǎn)品均應(yīng)建立相應(yīng)的監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，以便后續(xù)工藝的進(jìn)行 ,保證產(chǎn)品的質(zhì)量、工藝的穩(wěn)定性。 （二）產(chǎn)品的質(zhì)量檢定與要求 1．外觀檢查：根據(jù)樣品的特征建立外觀的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 2． pH 值檢測(cè)：可根據(jù)一般生物 制品的要求建立標(biāo)準(zhǔn)，一般為 177。 3．純度：主要用于評(píng)價(jià)純化制品中含有有效成分的量和雜質(zhì)的最低限量，制定相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，通常可測(cè)定有效抗原在疫苗中的絕對(duì)值或測(cè)定主要雜質(zhì)的量推算有效抗原在疫苗中的相對(duì)值。 4．宿主細(xì)胞 DNA 和蛋白殘留量檢測(cè)：采用傳代細(xì)胞生產(chǎn)疫苗，應(yīng)限制疫苗中的宿主細(xì)胞 DNA 和蛋白殘留量，進(jìn)行方法研究時(shí)應(yīng)建立相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品，并對(duì)檢測(cè)試劑的敏感性和特異性進(jìn)行驗(yàn)證。疫苗中殘余宿主細(xì)胞 DNA 及蛋白殘留量可參考現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》的相關(guān)要求。 ：應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》的相關(guān) 要求。 6．熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查：可參照現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》的相關(guān)要求進(jìn)行； 也可以用其它方法檢測(cè)疫苗中的熱原物質(zhì)。 7．抗生素檢測(cè)：預(yù)防用疫苗在生產(chǎn)過(guò)程中不得添加青霉素或其他 β 內(nèi)酰氨類(lèi)抗生素；如在生產(chǎn)過(guò)程中添加除上述以外的其他抗生素，應(yīng)建立相應(yīng)的檢測(cè)方法并規(guī)定抗生素殘留量的要求。 8．滅活效果的驗(yàn)證：由于制備疫苗的病原體一般均對(duì)人類(lèi)致病，因此應(yīng)建立有效的滅活方法對(duì)該制品中的病原體進(jìn)行滅活，并應(yīng)對(duì)滅活效果進(jìn)行驗(yàn)證；在成品檢定中應(yīng)建立滅活劑殘留量檢測(cè)的方法和限度標(biāo)準(zhǔn)。 9．異常毒性檢查：應(yīng)符合現(xiàn) 行版《中國(guó)藥典》的相關(guān)要求。 10．穩(wěn)定性試驗(yàn)：是指疫苗在常規(guī)保存溫度下的穩(wěn)定性試驗(yàn)。由于穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果直接與制品的效期有關(guān)，且試驗(yàn)觀察時(shí)間較長(zhǎng)，因此應(yīng)在生產(chǎn)工藝確定后盡早留樣進(jìn)行，定期取樣測(cè)定制品效力和其他相關(guān)的質(zhì)量指標(biāo)；對(duì)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果與加速穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析對(duì)比，可為正式產(chǎn)品的有效期確定提供依據(jù)。 11．效力試驗(yàn)（生物效價(jià)）：由于用于預(yù)防的疫苗是通過(guò)機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)發(fā)生作用的，因此應(yīng)評(píng)價(jià)其體液免疫和細(xì)胞免疫的生物效價(jià)。在評(píng)價(jià)體液免疫效價(jià)時(shí)，應(yīng)選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品系，建立檢測(cè)動(dòng)物血清抗體的診 斷試劑，并對(duì)該類(lèi)試劑進(jìn)行驗(yàn)證，可以計(jì)算小鼠 ED50 以及抗體產(chǎn)生的滴度，如有必要和可行，還應(yīng)當(dāng)建立評(píng)價(jià)抗體質(zhì)量的方法，對(duì)抗體的性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，如亞型測(cè)定及抗原中和位點(diǎn)分析等；在評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫效價(jià)時(shí)，應(yīng)當(dāng)建立檢測(cè)評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫的方法（如特異性 CTL 反應(yīng)的方法或 Elispot 方法等），也可通過(guò)對(duì)細(xì)胞因子的定量檢測(cè)評(píng)價(jià)其細(xì)胞免疫情況，如屬于常規(guī)檢定項(xiàng)目，該類(lèi)方法應(yīng)穩(wěn)定、重復(fù)性好、可操作性強(qiáng)，并制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。若有動(dòng)物模型，可進(jìn)行動(dòng)物保護(hù)性實(shí)驗(yàn)。 12．佐劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)：如最終制品含有佐劑，則應(yīng)建立佐劑含量以及與之結(jié) 合率的檢測(cè)方法，并制定相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 13．疫苗標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的研究：對(duì)于一種新疫苗而言，建立檢測(cè)疫苗的效力、免疫原性或毒性用標(biāo)準(zhǔn)品或參考品對(duì)判斷驗(yàn)室研究階段與批量投產(chǎn)后的疫苗質(zhì)量是否一致以及臨床試驗(yàn)的評(píng)價(jià)是非常重要的。 六、臨床研究用樣品要求 （一）申請(qǐng)臨床試驗(yàn)用的疫苗，按照國(guó)家 GMP 的要求 ,在符合現(xiàn)行中國(guó)藥品 GMP 的生產(chǎn)條件下生產(chǎn)的。 （二）臨床試驗(yàn)用疫苗樣品應(yīng)盡量使用與臨床前研究相同批的疫苗 ,其批量一般不少于 1000 人份，并能滿足臨床試驗(yàn)對(duì)疫苗量的要求。 （三）進(jìn)行臨床試驗(yàn)的疫苗必 須由中國(guó)藥品生物制品檢定所進(jìn)行質(zhì)量復(fù)核。 生物制品生產(chǎn)工藝過(guò)程變更管理技術(shù)指導(dǎo)原則 前 言 本指導(dǎo)原則適用于已經(jīng)取得生產(chǎn)文號(hào)的生物制品生產(chǎn)過(guò)程等發(fā)生變更的管理技