【正文】 關于印發(fā)《預防用疫苗臨床前研究技術指導原則》等 6 個技術指導原則的通知 國食藥監(jiān)注 [2022]493 號 2022年10月14日 發(fā)布 各省、自治區(qū)、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局（藥品監(jiān)督管理局）： 為規(guī)范疫苗研發(fā)行為，指導疫苗研究單位科學地開展研究工作，根據《藥品管理法》、《藥品管理法實施條例》及《藥品注冊管理辦法》，我局組織制定了《預防用疫苗臨床前研究技術指導原則》、《生物制品生產工藝過程變更管理技術指導原則》、《聯合疫苗臨床前和臨床研究技術指導原則》、《多肽疫苗生產及質控技術指導原則》、《 結合疫苗質量控制和臨床研究技術指導原則》和《預防用疫苗臨床試驗不良反應分級標準指導原則》等 6 個技術指導原則，現印發(fā)給你們，并請轉發(fā)轄區(qū)內各有關單位。 國家食品藥品監(jiān)督管理局 二 ○○五年十月十四日 預防用疫苗臨床前研究技術指導原則 前 言 由病毒、細菌或其他病原微生物為起始材料，經培養(yǎng)增殖制成的減毒、滅活的病原體，或再經純化、裂 解、亞單位（包括細菌類毒素）等方法處理制備的富含免疫原性，刺激機體產生特異性免疫學反應而達到預防某種疾病的產品，為預防用疫苗。 本指導原則適用于用病毒、細菌或其他病原微生物制備的預防用疫苗，其目的是為該類制劑提供一個共同的原則，指導制定臨床前研究的方案，和確定具體的研究內容。 一、基本原則 （一）應符合國家《藥品管理法》等相關法律法規(guī)的要求； （二）對所預防的疾病的流行情況進行研究 ,包括疾病的危害程度 所涉及的人群及病原的型和亞型等； （三）對研制該類制品用于預防疾病的有效性、安全性及必 要性進行分析； （四）應對該制品用于預防該疾病的利益風險比進行研究。根據該制品的預防方案可能達到的效果及可能出現的副作用或危害，對總體的利弊權衡進行評價，并提出擬采取避免或減少其危害性或副作用的措施。這種評價將是該方案能否獲得批準的重要依據之一。 二、用于疫苗研究用的菌毒種 研究疫苗所用的菌毒種必須證明為引起本病的細菌、病毒或其他病原體，如該菌毒株分離自人體，下述內容必須清楚。 （一）菌毒株名稱及來源： 1．菌毒株名稱 2．菌毒株來源 （ 1）分離菌毒株的宿主一般情況； （ 2） 發(fā)病地點、發(fā)病日期；臨床確診日期、實驗室確診日期；病人病程及病人轉歸。 3．菌毒株分離原樣本： 咽試子、漱口液、痰液、血液、糞便、尿液、尸解標本的組織名稱；取樣日期；取樣時病人的病期。 4．鑒于人類的血液在同一時間內較少感染多種病毒或細菌，而咽試子、漱口液、痰液、尿液、糞便等樣品難免污染其他外源因子，因此用病人血液分離的菌、毒株較適宜用于研究疫苗。 5．分離菌、毒株的其他自然樣本名稱、來源、數量、取樣方法等。 （二）菌、毒株分離過程 1．用細胞分離病毒，所用細胞名稱、代次、來源應清楚，應 進行細胞無菌檢測、支原體和外原因子等檢測；病毒分離不宜使用腫瘤原性的細胞系。盡可能使用非腫瘤原性細胞，如人二倍體細胞或 Vero 細胞等。 2．用動物分離病毒，對所用動物名稱、品系、級別、年齡、接種途徑、飼養(yǎng)條件和制備毒種的動物臟器名稱等須詳細記載；如再適應到細胞，則還應參照上述對分離用細胞的要求。 3．確定分離菌株所用培養(yǎng)基名稱、種類，以及分離培養(yǎng)的溫度和條件。 （三）菌、毒株分離傳代特性 應包括樣品處理方法、首次盲傳確證菌毒株陽性代次、菌毒株確證檢定方法、每代培養(yǎng)天數、病毒滴度、滴定方法、 動物是否發(fā)病或死亡等資料。 （四）菌毒種建立和保存 應包括原始菌毒種代次、滴度，添加的保護劑的名稱和濃度、存儲條件等資料；原代菌毒種是指已適應到可生產疫苗的細胞或培養(yǎng)基，可穩(wěn)定傳代、保留抗原性、并經過檢定可用于疫苗生產的菌毒種。種子批的建立應符合現行版《中國藥典》 “生物制品制品檢定用菌毒種管理規(guī)程 ”的要求，應對種子批進行菌毒種的傳代和限定代次的研究，以證明主種子和工作種子批在規(guī)定代次內的生物學特性與原始菌毒種的一致性。 （五）菌毒種的檢定 1．鑒別試驗：可采用血清學、生物學、核酸序列分析等方 法證明為該菌毒種。明確該病原體及其它相關生物分子的基因序列及結構，并與我國主要流行株的核苷酸和氨基酸同源性進行分析以及明確其血清型、亞型和 /或基因型，對該種基因型或血清型的流行情況進行分析，若存在不同的血清型或基因型，應對所選擇的血清型或基因型與其它血清型或基因型交叉反應或交叉保護性進行分析和研究。 2．無菌檢查：按照現行版《中國藥典》的要求進行，應符合規(guī)定。 3．外源因子檢查：按照現行版《中國藥典》的相關要求進行，應符合規(guī)定，取樣量應足夠檢測試驗的需要。 4．擴增能力和感染性滴度：應能達到按生 產工藝要求順利生產合格疫苗的要求。應建立測定菌毒種擴增能力和感染性滴度的方法和標準，并提供這些擴增能力和感染性滴度與疫苗有效性之間的相關性數據。 5．免疫原性檢查：菌毒種的免疫原性是衡量該疫苗是否有效的重要指標，應制定和建立測定菌毒種免疫原性的有效方法和標準，以評估該候選菌毒種能否進行疫苗生產。 6．減毒特性 （ 1）如研制減毒活疫苗應對原始菌毒株的生物學、血清型、基因型和免疫原性進行研究；減毒方法、減毒過程、減毒程度和減毒后的生物學、血清型、基因型和免疫原性，并進行減毒前后的特性對比，尤其要 對減毒后的安全性和免疫原性作出確切的結論； （ 2）應建立減毒特性指標的驗證方法、動物模型和減毒后安全性的標準以及檢測和警戒毒力回復的依據等； （ 3）對制備注射劑的減毒活疫苗，除一般的外源因子檢測外，還應驗證無逆轉錄病毒的污染。該驗證方法可采用 PERT 法； （ 4）如已知該病毒具有嗜神經毒性，其驗證要求可參考《 IABS Scientific workshop on neurovirulence test for live virus vaccines, WHO,31 January 2022》。 三、疫苗的生產工藝研究 （一）建立菌毒種庫 應建立三級種子庫。對種子庫的遺傳穩(wěn)定性進行分析，明確該種子庫可以傳代的次數。生產用菌毒種、細胞和涉及生產的工藝技術應注意專利，應進行相關專利查詢。 （二）生產用細胞和 /或培養(yǎng)基 1．生產用細胞應符合現行版《中國藥典》中 “生物制品生產用動物細胞基質制備及檢定規(guī)程 ”的要求，如用傳代細胞系應建立三級細胞庫； 2．生產用培養(yǎng)基盡可能避免使用動物來源和可能引起人體不良反應的原材料，禁止使用來自瘋牛病疫區(qū)的牛源性原材料。 （三）疫苗原液生產工藝的研究 1．生產工藝的主要技術參數的確定 （ 1）病毒與細胞的接種比例、 MOI 的最佳參數、細胞培養(yǎng)和病毒培養(yǎng)的最佳溫度、培養(yǎng)時間和收獲時間。菌毒種的接種量，培養(yǎng)和發(fā)酵條件等技術參數的研究確定； （ 2）滅活劑的選擇和依據； （ 3）滅活或裂解條件及滅活或脫毒效果的驗證，滅活效果驗證的依據、方法；滅活效果的驗證，應采用盡可能敏感的細胞或培養(yǎng)基和方法進行； （ 4）原液的濃縮和 /或活性抗原的提取純化等工藝研究：純化和提取工藝中各種條件進行優(yōu)化，純化和提取工藝對抗原活性成分是否影響，應建立穩(wěn)定的純化工藝，包 括純化時的回收率、抗原活性和純度等的穩(wěn)定性；并制定相應的質控指標和檢測方法，按 GMP 要求在符合 GMP 要求的生產環(huán)境下生產； （ 5）初步確定起始投料、原液、半成品和成品的產出比的理論數據。 2．疫苗對佐劑的要求 目前能用于疫苗的佐劑多為氫氧化鋁，而鋁佐劑通常使疫苗產生的抗體滯后，且增加注射局部的副反應機率。如疫苗的抗原能滿足免疫的需要，則不加佐劑為宜。如果在終制品中使用佐劑，則對以下問題應進行研究，對于已經明確有佐劑效應或者已經商品化的佐劑，只需提供該類制劑的組分或化學組成，國內外使用該類制劑的情 況，無需再進行毒理和安全性研究。若國內外均未使用過該類佐劑 ,則必須對其作用原理、安全性及佐劑效應進行詳細的研究并建立切實可行的評價方法。 （四）疫苗的配方研究 應對疫苗的配方進行研究，如疫苗中添加的穩(wěn)定劑成分，緩沖液、佐劑、以及凍干疫苗的賦形劑成分等是否對疫苗造成影響。 四、藥理、毒理和生物分布 疫苗不同于一般的化學藥品，藥理、毒理的實驗要求具有特殊性，因此，該制品的藥理學試驗主要包括發(fā)生作用的原理、生物效價與劑量的關系、免疫程序和接種途徑與效果的關系等；在毒理學方面主要考慮接種部位和全身的 病理反應、以及機體對該疫苗的非期望的免疫應答反應和這種反應的持續(xù)時間。由于以上各方面是互相關聯的，因此，應綜合考慮藥理、毒理和免疫原性或生物效價的因素。 應建立適當的試驗及檢測方法來評價疫苗的免疫原性或生物效價，如果有動物模型或可建立動物模型的，可以采用動物模型直接評價疫苗的生物效價，如：對一些有動物模型的感染性疾病，可以采用病原體的攻擊實驗來評價該疫苗的保護效果。而且要建立劑量與生物效價的關系，通過實驗優(yōu)化免疫程序和接種途徑。若無法建立動物模型，應建立能驗證該疫苗有效性的體外實驗進行評價。 滅活疫 苗的生物分布較難檢測和評價。減毒活疫苗的生物分布應建立敏感的動物模型，可測定接種疫苗后的病毒血癥（或菌血癥）以及持續(xù)時間，排毒（菌）方式和途徑，對是否呈現體內復制及感染的器官組織細胞應進行詳細的研究。 五、質量控制及檢定的要求 （一）生產過程中質量監(jiān)控標準的建立及要求 在生產工藝的各個環(huán)節(jié)和步驟中的產品均應建立相應的監(jiān)控標準，以便后續(xù)工藝的進行 ,保證產品的質量、工藝的穩(wěn)定性。 （二）產品的質量檢定與要求 1．外觀檢查：根據樣品的特征建立外觀的質量標準。 2． pH 值檢測：可根據一般生物 制品的要求建立標準，一般為 177。 3．純度：主要用于評價純化制品中含有有效成分的量和雜質的最低限量，制定相應標準，通?？蓽y定有效抗原在疫苗中的絕對值或測定主要雜質的量推算有效抗原在疫苗中的相對值。 4．宿主細胞 DNA 和蛋白殘留量檢測：采用傳代細胞生產疫苗，應限制疫苗中的宿主細胞 DNA 和蛋白殘留量，進行方法研究時應建立相應的標準品，并對檢測試劑的敏感性和特異性進行驗證。疫苗中殘余宿主細胞 DNA 及蛋白殘留量可參考現行版《中國藥典》的相關要求。 ：應符合現行版《中國藥典》的相關 要求。 6．熱原或細菌內毒素檢查：可參照現行版《中國藥典》的相關要求進行； 也可以用其它方法檢測疫苗中的熱原物質。 7．抗生素檢測：預防用疫苗在生產過程中不得添加青霉素或其他 β 內酰氨類抗生素；如在生產過程中添加除上述以外的其他抗生素，應建立相應的檢測方法并規(guī)定抗生素殘留量的要求。 8．滅活效果的驗證：由于制備疫苗的病原體一般均對人類致病，因此應建立有效的滅活方法對該制品中的病原體進行滅活，并應對滅活效果進行驗證；在成品檢定中應建立滅活劑殘留量檢測的方法和限度標準。 9．異常毒性檢查：應符合現 行版《中國藥典》的相關要求。 10．穩(wěn)定性試驗：是指疫苗在常規(guī)保存溫度下的穩(wěn)定性試驗。由于穩(wěn)定性試驗的結果直接與制品的效期有關，且試驗觀察時間較長，因此應在生產工藝確定后盡早留樣進行，定期取樣測定制品效力和其他相關的質量指標；對穩(wěn)定性試驗結果與加速穩(wěn)定性試驗數據進行分析對比，可為正式產品的有效期確定提供依據。 11．效力試驗（生物效價）：由于用于預防的疫苗是通過機體的免疫應答反應發(fā)生作用的，因此應評價其體液免疫和細胞免疫的生物效價。在評價體液免疫效價時，應選擇實驗動物的品系，建立檢測動物血清抗體的診 斷試劑，并對該類試劑進行驗證，可以計算小鼠 ED50 以及抗體產生的滴度，如有必要和可行，還應當建立評價抗體質量的方法，對抗體的性質進行評價，如亞型測定及抗原中和位點分析等；在評價細胞免疫效價時，應當建立檢測評價細胞免疫的方法（如特異性 CTL 反應的方法或 Elispot 方法等），也可通過對細胞因子的定量檢測評價其細胞免疫情況，如屬于常規(guī)檢定項目，該類方法應穩(wěn)定、重復性好、可操作性強，并制定相應的質量標準。若有動物模型，可進行動物保護性實驗。 12．佐劑的質量評價：如最終制品含有佐劑，則應建立佐劑含量以及與之結 合率的檢測方法，并制定相應質量標準。 13．疫苗標準品或參考品的研究：對于一種新疫苗而言，建立檢測疫苗的效力、免疫原性或毒性用標準品或參考品對判斷驗室研究階段與批量投產后的疫苗質量是否一致以及臨床試驗的評價是非常重要的。 六、臨床研究用樣品要求 （一）申請臨床試驗用的疫苗，按照國家 GMP 的要求 ,在符合現行中國藥品 GMP 的生產條件下生產的。 （二）臨床試驗用疫苗樣品應盡量使用與臨床前研究相同批的疫苗 ,其批量一般不少于 1000 人份，并能滿足臨床試驗對疫苗量的要求。 （三）進行臨床試驗的疫苗必 須由中國藥品生物制品檢定所進行質量復核。 生物制品生產工藝過程變更管理技術指導原則 前 言 本指導原則適用于已經取得生產文號的生物制品生產過程等發(fā)生變更的管理技