酶在食品分析中的應(yīng)用(已修改)
2025-01-20 07:01 本頁面
【正文】 第 10章 酶在食品分析中的應(yīng)用 主要內(nèi)容： 1 酶法分析的特點及應(yīng)用類型 2 酶聯(lián)免疫測定（ ELISA） 3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （ PCR） 4 酶生物傳感器 5 酶抑制率法 酶法分析的發(fā)展 ? 酶在定量分析中的應(yīng)用可以追溯到 19世紀(jì)中期 。當(dāng)時 ， 曾采用麥芽提取物作為過氧化物酶源 ，以愈創(chuàng)木酚作為共底物或指示劑測定過氧化氫 。 ? 然而 ， 酶法分析真正的發(fā)展應(yīng)歸于它在臨床實驗室中的廣泛應(yīng)用 。 酶法分析的發(fā)展 ? 如早在 1914年臨床上就開始采用脲酶測定尿中的尿素 ， 但是在臨床實驗室中酶分析的真正突破要推遲到 1958年 ， 當(dāng)時轉(zhuǎn)氨酶分析發(fā)展成為診斷肝病和心臟病的一個有效手段 。 ? 到了 20世紀(jì) 50年代前已有 60種物質(zhì)能借助于酶法分析 。 近年來 ， 酶法分析發(fā)展迅速 ， 廣泛應(yīng)用于臨床檢驗 、 食品 、 環(huán)境等生物及其它樣品的檢測 。 1. 酶法分析的特點及應(yīng)用類型 ? 酶的特性 ? 酶法檢測的特點 催化效率高 專一性 靈敏性強 快速 特異性、準(zhǔn)確 不需要物理分離，干擾少 酶在食品分析中的應(yīng)用類型 ? 1. 去除樣品中的雜質(zhì) 。 如測定果糖 、 多糖等 。 ? 2. 催化待測物生成新的產(chǎn)物 ， 而這種產(chǎn)物更容易被定量分析 。 如：淀粉的測定 。 ? 3. 測定食品中酶的活性作為食品的指標(biāo) ， 如過氧化物酶的測定 。 ? 4. 利用酶催化反應(yīng)所產(chǎn)生的一些信息 。 如酶聯(lián)免疫法 、 酶電極法等 。 2 酶聯(lián)免疫測定（ ELISA） ? 酶聯(lián)免疫測定 （ enzymelinked immunosorbent assay ， ELISA） 是繼放射免疫測定技術(shù)之后發(fā)展起來的一項新的免疫學(xué)技術(shù) 。 ? ELISA自上世紀(jì) 70年代出現(xiàn)開始 ， 就因其高度的準(zhǔn)確性 、 特異性 、 適用范圍寬 、 檢測速度快以及費用低等優(yōu)點 ， 在臨床和生物疾病診斷與控制等領(lǐng)域中倍受重視 ， 成為檢驗中最為廣泛應(yīng)用的方法之一 。 ELISA的 基本原理 ? （ 1） 利用抗原與抗體的特異反應(yīng)將 待測物與酶連接 （ 或建立關(guān)聯(lián) ） 。 ? （ 2） 通過酶與底物產(chǎn)生 顏色反應(yīng) ， 用于定量測定 。 ? 它將 酶促反應(yīng)的高效率 和 免疫反應(yīng)的高度專一性 有機地結(jié)合起來 ， 可對生物體內(nèi)各種微量有機物的含量進(jìn)行測定 。 測定的對象可以是抗體也可以是抗原 。 重點 ELISA試劑盒的組成 ? 完整的 ELISA試劑盒包含以下各組分： （ 1） 包被抗原或抗體的固相載體 （ 免疫吸附劑 ） ； （ 2） 酶標(biāo)記的抗原或抗體 （ 標(biāo)記物 ） ； （ 3） 酶作用的底物 （ 顯色劑 ） ； （ 4） 陰性和陽性對照品 （ 定性測定 ） ， 參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清 （ 定量測定 ） ； （ 5） 結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液； （ 6） 洗滌液； （ 含吐溫 20磷酸鹽緩沖液 ） （ 7） 酶反應(yīng)終止液 。 （ 常用硫酸 ） 必需 酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板 DNM9602A酶標(biāo)分析儀 酶標(biāo)板 ELISA的基本類型 ? 隨著 ELISA在生物檢測分析領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用 ，根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測的具體條件 ， 逐漸演變出了幾種不同類型的檢測方法： （ 5）捕獲法測
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