松材線蟲、松墨天牛和松樹間的共生關(guān)系研究-研究生課程論(已修改)
2025-01-18 03:19 本頁面
【正文】 得分 ： _______ 南 京 林 業(yè) 大 學(xué) 研究生課程論文 2022 ～ 20226 學(xué)年 第 二 學(xué)期 二 ○一六 年 六 月 課 程 號： 課程名稱： 論文題目： 學(xué)科專業(yè)： 森林保護(hù) 學(xué) 號： 3150462 姓 名： 王立超 任課教師： 黃麟 內(nèi)容 本文研究松材線蟲、松墨天牛和真菌在 松樹中的共生關(guān)系 實驗材料和方法 ： （ 1）真菌 小長喙霉 在 PDA 平板上、 25℃條件下培養(yǎng)一周，使用前在 5℃條件下保存。 灰葡萄孢在 10 mL 的大麥籽粒上培養(yǎng) 。 （ 2）線蟲 強(qiáng)毒蟲株松材線蟲 T4 在 25℃條件下在灰葡萄孢上培養(yǎng)，使用前在 5℃條件下保存。 松材線蟲懸濁液包括成蟲和幼蟲，懸濁液濃度為 50000 條 /mL。 （ 3）昆蟲 松墨天牛在恒定條件下培養(yǎng)（ 25℃， 16h 光照、 8h 黑暗），讓其繁殖 10 代，第七代到第十代成蟲用來在赤松小苗上產(chǎn)卵，收集天牛所產(chǎn)的卵并將其放置在濕紙巾上， 在一天之內(nèi)孵化的幼蟲用于實驗。 （ 4）松枝 2022 年六月采伐 兩顆 12 年生（胸徑分別為 和 ）的赤松和 兩顆 12 年生的黑松（胸徑分別為 和 ），分別在實驗 1和實驗 3 中使用。 2022 年二月采伐 3 顆 12 年生的赤松用于實驗 2，胸徑分別為 、 和 ， 2022 年十月采伐一顆 12 年生的赤松用于實驗 4，其胸徑為 。樹枝截為 15cm 一段，在樹枝的兩端用石蠟密封起來，每個實驗組樹枝的樹木特定的每組樹枝之間不存在顯著差異 (5)接種 使用鑿子和鑷子在離樹端 處從木質(zhì)部分離樹皮（面積 ），用刻刀在漏出的木質(zhì)部中間挖一個直徑 67mm 圓形刻槽用以放置松墨天牛幼蟲，一份帶有灰葡萄孢或則沒有灰葡萄孢的面積為 5 5mm 的 PDA 培養(yǎng)基放置在遠(yuǎn)離樹端、接近圓形刻槽的位置。 用到劃長 、最大寬度為 的三角形裂口，在漏出的韌皮部接種 20uL 的線蟲懸濁液（ 1000 條線蟲）或者是無菌純凈水 。兩個樹皮傷口最小距離平均為 ，兩個傷口接種后覆蓋原來的樹皮，用封口膜包起來， 即使不接種松墨天牛幼蟲，也挖一個小刻槽，實驗 4 中松樹枝條不用接種松材線蟲懸液或水，不會在樹皮上形成傾斜傷口。 實驗一、 為了確定松墨天牛幼蟲和小長喙霉對松材線蟲種群生長的影響，一組赤松枝條接種松材線蟲、松墨天牛和小喙長霉 。第二組枝條接種松材線蟲、松墨天牛和 PDA，第三組枝條接種松材線蟲和小喙長霉，第四組枝條接種松材線蟲和 PDA。他們被垂直放置使線蟲遠(yuǎn)離容器底部。 25℃ ， 16h 光照、 8h 黑暗， 相對濕度 100%條件下常溫培養(yǎng)，用純凈水保持濕度。 接種 18 天后，從松枝上剝離樹皮，從枝條上取幼蟲和幼蟲糞便，記錄韌皮部和木質(zhì)部上藍(lán)變面積確定小喙長霉的繁殖情況， 從縱向韌皮部上剝離四份之一到二分之一的樹皮，將樹皮外層剝離， 收集里面樹皮以獲得韌皮部樣品，再將里層樹皮的韌皮部剪切為 12mm 大小的樹皮塊，使用一把 15mm 寬的刀片，從接種松墨天牛幼苗和松材線蟲的地方包括髓取木質(zhì)部樣品，記錄木質(zhì)部樣品真菌繁殖情況，糞便、韌皮部和木質(zhì)部分別在 25℃下使用貝爾曼漏斗法分離 4872h，計算分離線蟲濃度，材料在 60℃下烘 512d，稱重， 線蟲密度表示每克材料干重中松材線蟲的數(shù)量。 分別使用電子天平和游標(biāo)卡尺測量幼蟲體重和頭殼寬度，分別精確到 ，根據(jù)頭殼寬度確定幼蟲齡期： –,– , – – mm分別為一 齡 、二齡、三齡和四齡蟲 。 實驗二、 確定赤松中韌皮部、木質(zhì)部和天牛幼蟲蛀屑線蟲密度的不同，在2022 年 2 月 26 日將剛孵化的幼蟲、 1000 條松材線蟲和一份接有小長喙霉的 PDA 接種在 10 條直徑相似的上述赤松枝條上， 2022 年 3 月 26日分別將韌皮部、木質(zhì)部和幼蟲蛀屑用以分離線蟲，確定線蟲密度， 實驗三、 確定松材線蟲種群和小喙長霉對松墨天牛生長發(fā)育的影響，四組黑松枝條接種松材線蟲、松墨天牛和小喙長霉三個物種組成的四種組合。方法和實驗一方法相同，培養(yǎng)條件 相同。 每天觀察松枝，記錄松墨天牛羽化情況，分性別記錄成蟲數(shù)量，體重和鞘翅長分別精確到 和 。沒有松墨天牛出現(xiàn)的松枝在接種 153164d 后分離，稱量幼蟲的鮮重和記錄頭寬、顏色、腸內(nèi)排泄物的有無以及幼蟲所在的位置。 實驗四、 為確定松墨
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