松材線蟲(chóng)、松墨天牛和松樹(shù)間的共生關(guān)系研究-研究生課程論(已修改)
2025-01-18 03:19 本頁(yè)面
【正文】 得分 ： _______ 南 京 林 業(yè) 大 學(xué) 研究生課程論文 2022 ～ 20226 學(xué)年 第 二 學(xué)期 二 ○一六 年 六 月 課 程 號(hào)： 課程名稱(chēng)： 論文題目： 學(xué)科專(zhuān)業(yè)： 森林保護(hù) 學(xué) 號(hào)： 3150462 姓 名： 王立超 任課教師： 黃麟 內(nèi)容 本文研究松材線蟲(chóng)、松墨天牛和真菌在 松樹(shù)中的共生關(guān)系 實(shí)驗(yàn)材料和方法 ： （ 1）真菌 小長(zhǎng)喙霉 在 PDA 平板上、 25℃條件下培養(yǎng)一周，使用前在 5℃條件下保存。 灰葡萄孢在 10 mL 的大麥籽粒上培養(yǎng) 。 （ 2）線蟲(chóng) 強(qiáng)毒蟲(chóng)株松材線蟲(chóng) T4 在 25℃條件下在灰葡萄孢上培養(yǎng)，使用前在 5℃條件下保存。 松材線蟲(chóng)懸濁液包括成蟲(chóng)和幼蟲(chóng)，懸濁液濃度為 50000 條 /mL。 （ 3）昆蟲(chóng) 松墨天牛在恒定條件下培養(yǎng)（ 25℃， 16h 光照、 8h 黑暗），讓其繁殖 10 代，第七代到第十代成蟲(chóng)用來(lái)在赤松小苗上產(chǎn)卵，收集天牛所產(chǎn)的卵并將其放置在濕紙巾上， 在一天之內(nèi)孵化的幼蟲(chóng)用于實(shí)驗(yàn)。 （ 4）松枝 2022 年六月采伐 兩顆 12 年生（胸徑分別為 和 ）的赤松和 兩顆 12 年生的黑松（胸徑分別為 和 ），分別在實(shí)驗(yàn) 1和實(shí)驗(yàn) 3 中使用。 2022 年二月采伐 3 顆 12 年生的赤松用于實(shí)驗(yàn) 2，胸徑分別為 、 和 ， 2022 年十月采伐一顆 12 年生的赤松用于實(shí)驗(yàn) 4，其胸徑為 。樹(shù)枝截為 15cm 一段，在樹(shù)枝的兩端用石蠟密封起來(lái)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組樹(shù)枝的樹(shù)木特定的每組樹(shù)枝之間不存在顯著差異 (5)接種 使用鑿子和鑷子在離樹(shù)端 處從木質(zhì)部分離樹(shù)皮（面積 ），用刻刀在漏出的木質(zhì)部中間挖一個(gè)直徑 67mm 圓形刻槽用以放置松墨天牛幼蟲(chóng)，一份帶有灰葡萄孢或則沒(méi)有灰葡萄孢的面積為 5 5mm 的 PDA 培養(yǎng)基放置在遠(yuǎn)離樹(shù)端、接近圓形刻槽的位置。 用到劃長(zhǎng) 、最大寬度為 的三角形裂口，在漏出的韌皮部接種 20uL 的線蟲(chóng)懸濁液（ 1000 條線蟲(chóng)）或者是無(wú)菌純凈水 。兩個(gè)樹(shù)皮傷口最小距離平均為 ，兩個(gè)傷口接種后覆蓋原來(lái)的樹(shù)皮，用封口膜包起來(lái)， 即使不接種松墨天牛幼蟲(chóng)，也挖一個(gè)小刻槽，實(shí)驗(yàn) 4 中松樹(shù)枝條不用接種松材線蟲(chóng)懸液或水，不會(huì)在樹(shù)皮上形成傾斜傷口。 實(shí)驗(yàn)一、 為了確定松墨天牛幼蟲(chóng)和小長(zhǎng)喙霉對(duì)松材線蟲(chóng)種群生長(zhǎng)的影響，一組赤松枝條接種松材線蟲(chóng)、松墨天牛和小喙長(zhǎng)霉 。第二組枝條接種松材線蟲(chóng)、松墨天牛和 PDA，第三組枝條接種松材線蟲(chóng)和小喙長(zhǎng)霉，第四組枝條接種松材線蟲(chóng)和 PDA。他們被垂直放置使線蟲(chóng)遠(yuǎn)離容器底部。 25℃ ， 16h 光照、 8h 黑暗， 相對(duì)濕度 100%條件下常溫培養(yǎng)，用純凈水保持濕度。 接種 18 天后，從松枝上剝離樹(shù)皮，從枝條上取幼蟲(chóng)和幼蟲(chóng)糞便，記錄韌皮部和木質(zhì)部上藍(lán)變面積確定小喙長(zhǎng)霉的繁殖情況， 從縱向韌皮部上剝離四份之一到二分之一的樹(shù)皮，將樹(shù)皮外層剝離， 收集里面樹(shù)皮以獲得韌皮部樣品，再將里層樹(shù)皮的韌皮部剪切為 12mm 大小的樹(shù)皮塊，使用一把 15mm 寬的刀片，從接種松墨天牛幼苗和松材線蟲(chóng)的地方包括髓取木質(zhì)部樣品，記錄木質(zhì)部樣品真菌繁殖情況，糞便、韌皮部和木質(zhì)部分別在 25℃下使用貝爾曼漏斗法分離 4872h，計(jì)算分離線蟲(chóng)濃度，材料在 60℃下烘 512d，稱(chēng)重， 線蟲(chóng)密度表示每克材料干重中松材線蟲(chóng)的數(shù)量。 分別使用電子天平和游標(biāo)卡尺測(cè)量幼蟲(chóng)體重和頭殼寬度，分別精確到 ，根據(jù)頭殼寬度確定幼蟲(chóng)齡期： –,– , – – mm分別為一 齡 、二齡、三齡和四齡蟲(chóng) 。 實(shí)驗(yàn)二、 確定赤松中韌皮部、木質(zhì)部和天牛幼蟲(chóng)蛀屑線蟲(chóng)密度的不同，在2022 年 2 月 26 日將剛孵化的幼蟲(chóng)、 1000 條松材線蟲(chóng)和一份接有小長(zhǎng)喙霉的 PDA 接種在 10 條直徑相似的上述赤松枝條上， 2022 年 3 月 26日分別將韌皮部、木質(zhì)部和幼蟲(chóng)蛀屑用以分離線蟲(chóng)，確定線蟲(chóng)密度， 實(shí)驗(yàn)三、 確定松材線蟲(chóng)種群和小喙長(zhǎng)霉對(duì)松墨天牛生長(zhǎng)發(fā)育的影響，四組黑松枝條接種松材線蟲(chóng)、松墨天牛和小喙長(zhǎng)霉三個(gè)物種組成的四種組合。方法和實(shí)驗(yàn)一方法相同，培養(yǎng)條件 相同。 每天觀察松枝，記錄松墨天牛羽化情況，分性別記錄成蟲(chóng)數(shù)量，體重和鞘翅長(zhǎng)分別精確到 和 。沒(méi)有松墨天牛出現(xiàn)的松枝在接種 153164d 后分離，稱(chēng)量幼蟲(chóng)的鮮重和記錄頭寬、顏色、腸內(nèi)排泄物的有無(wú)以及幼蟲(chóng)所在的位置。 實(shí)驗(yàn)四、 為確定松墨
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