酶聯(lián)免疫分析技術(shù)ppt課件(已修改)
2025-01-17 20:20 本頁面
【正文】 2022813 1 酶聯(lián)免疫分析技術(shù) —— ELISA檢測 免疫檢驗 ? 利用免疫檢測原理檢測與免疫相關(guān)的 物質(zhì)（抗原、抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子 等） 北京世紀(jì)壇醫(yī)院 李莉 免疫檢驗技術(shù) 酶聯(lián)免疫吸附試驗 (enzymelinked immunosorbent assay ， ELISA) ? 利用免疫檢測原理檢測體液中的微量 物質(zhì)（激素、酶、血漿中的微量蛋白、 藥物濃度等） 這些檢測結(jié)果為臨床上確定診斷， 分析病情，調(diào)整治療方案和判斷預(yù)后 提供有效的實(shí)驗依據(jù) 。 酶聯(lián)免疫分析技術(shù) 是以酶標(biāo)記抗原 /抗體為主要試劑的 一種標(biāo)記免疫分析技術(shù)，利用酶催化 底物反應(yīng)的生物放大作用，提高特異 性抗原抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢測的敏感性 . 歷史 ? 1971 年 瑞 典 學(xué) 者 Engvail 和 Perlmann, 荷 蘭 學(xué) 者 Van Weerman 和 Schuurs 分 別 報 道 將 免 疫 技 術(shù) 發(fā) 展 為 檢 測 體 液 中 微 量 物 質(zhì) 的固 相 免 疫 測 定 方 法 ， 即 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 測 定 法 (enzyme linked immunosorbent assay , ELISA) 。 ?Ab Ag和 Ab 分離，然后測定 Ab Ag或 Ab 的量， 2022813 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗的原理 以待測 抗原 （或 抗體 ）與酶 標(biāo)抗 體（或 抗原 ） 的特異 結(jié)合 反應(yīng)為 基礎(chǔ) ，通 過酶 活力測 定來 確定 抗原（或抗體）含量。 因為 結(jié)合 了 免疫 反 應(yīng) 和 酶催 化 反 應(yīng)， 所以 是 一種特異而又敏感的技術(shù)。 酶免疫技術(shù) Ab*+Ag Ab*Ag+Ab* 異相法 ： * * * * 從而推算出 Ag量。 A g * 過量 Ab * Ab A g * Ab 均相法 ： ?Ab *Ag中的標(biāo)記物 *失去特性，直接測定游離 Ab *的量，從而推算出 Ag量。 A g * 過量 Ab * Ab A g * Ab 1 特異性 抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié) 合位點(diǎn)之間?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型互補(bǔ)關(guān)系，具有高 度的特異性。 測定某一特定的物質(zhì)，而不需先分離待檢物。 2 2 最適比例 2022813 3 敏感性 化學(xué)比色法的敏感度為 mg/ml水平 酶反應(yīng)測定法的敏感度約為 5 10μ g/ml 免疫測定中凝膠擴(kuò)散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿 標(biāo)記的免疫敏感度可提高數(shù)千倍，達(dá) ng/ml水平 例如， HBsAg，其敏感度可達(dá) 。 特點(diǎn) ? ? ? ? ? 靈敏度高 特異性強(qiáng) 準(zhǔn)確性好 試劑穩(wěn)定 方法簡便 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗 方法類型： 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗的 分類 雙抗體夾心法（三明志法）原理 固相支持物表面 3 包被抗體 標(biāo)記抗體 待測物 底物 一步法 ELISA 反應(yīng)會 出現(xiàn)鉤狀效應(yīng) （主要用于測抗原） （主要用于測抗體） （主要用于測小分子抗原 /半抗原和抗體） （主要用于測血清中某抗體的亞型） 鉤狀效應(yīng) （ hook effect） 一般情況下的雙抗 體夾心法 ELISA反應(yīng) 抗原過量時 2022813 間接法原理 間接法的影響因素 正常血清中所含的 高濃度的非特異性 抗體對間接法的影 包被物 底物 待測物 底物 標(biāo)記抗體 待測抗體 標(biāo)記抗原 包被抗體 固相支持物表面 競爭法測抗原的原理 （ 7 ）酶反應(yīng)終止 液。 固相支持物表面 響 抗原的純度對間 接法測抗體的影 響 ELISA試劑盒組分： ELISA中有三個必要的試劑： 免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物 。 （ 1）已包被抗原或抗體的固相載體（ 免疫吸附劑 ）； （ 2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（ 結(jié)合物 ）； （ 3） 酶的底物 ； （ 4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標(biāo)準(zhǔn) 品和控制血清（定量測定中）； （ 5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液； （ 6）洗滌液； 結(jié)合物
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