基因工程酶ppt課件(已修改)
2025-01-17 09:17 本頁面
【正文】 1 第二章 基因工程 Gene engineering 2 基因工程的定義 應(yīng)用 DNA重組技術(shù)，按照人們的意愿，在基因水平上改變生物遺傳性，創(chuàng)造新生物物種，通過工程化為人類提供有用產(chǎn)品和服務(wù)的技術(shù)。 3 內(nèi) 容 ? 基因工程工具酶 ? 基因工程載體 ? DNA提取與基因制備 ? 重組 DNA向宿主細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移技術(shù) ? 重組基因的表達(dá)調(diào)控 4 ? 基因工程的技術(shù)流程 5 工具酶 基因工程技術(shù)中能用于 DNA和 RNA 的合成、連接、切割和修飾的各種酶。 包括： 限制酶 , 聚合酶 , 連接酶 , 修飾酶 (激酶 , 磷酸酶，核酸酶 , 甲基化酶 )，蛋白酶，溶菌酶 等。 第一節(jié) 基因工程工具酶 6 一、限制性內(nèi)切酶 （ Restriction Endonuclease） 1. 細(xì)菌的 限制一修飾現(xiàn)象 被發(fā)現(xiàn) phage 侵入 可繁殖 phage 侵入 另一種 不可繁殖 瑞士塞爾生物研究中心 Arber提出限制一修飾理論： 核酸內(nèi)切酶降解細(xì)菌外源 DNA, 修飾酶保護(hù)自身 DNA 7 ? 1968年， Meselson從 E． coli K株中分離出了第一個(gè)限制酶 EcoK；同年 Linn和 Arber從 E． coli B株中分離到限制酶 EcoB。 ? 美 Hopkings大學(xué) Ⅱ 型 限制酶 HindⅡ Arber, Smith獲得 1978 年 Nobel獎(jiǎng) 8 2. 限制性核酸內(nèi)切酶的定義和生物學(xué)功能 定義： 凡能識(shí)別和切割雙鏈 DNA分子內(nèi)特定核苷酸序列的酶，稱為限制性核酸內(nèi)切酶，簡稱限制酶。 生物學(xué)功能： A. 防御外來生物在體內(nèi)繁殖。 B. 限制 修飾系統(tǒng)決定了噬菌體、病毒等具有種屬特異性。 C. 阻止了生物遠(yuǎn)距離種屬間雜交優(yōu)勢。 9 Hind III 屬名 種名 株名 序數(shù) 含義：流感嗜血桿菌 d株 (Haemophilus influenzae d)的第三種酶 3. 限制酶的命名 第 1個(gè)字母是產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名的第一個(gè)字母，大寫； 第 23個(gè) 字母 是 細(xì)菌 種名的前兩個(gè)字母，小寫； 第 4個(gè) 字母 是株名的第一個(gè)字母，小寫； 用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。 10 4. 限制酶系統(tǒng)分類 1985年后大量限制酶被發(fā)現(xiàn)， 到 2022 年 1 月，已經(jīng)發(fā)現(xiàn) 3681種限制酶。 限制性內(nèi)切酶的分類 Ⅰ 型 : 特異識(shí)別、隨機(jī)切割 Ⅱ 型： 特異識(shí)別、同點(diǎn)切割 Ⅲ 型： 特異識(shí)別、異地切割 通常所指的限制酶即 Ⅱ 類酶 11 限制酶特性比較 I型 II型 III型 舉例 EcoB BamHI EcoPL 亞基 三種不同的亞基 兩個(gè)相同的亞基 兩種 活性 限制酶、修飾酶 限制酶 限制酶、修飾酶 酶反應(yīng)輔助因子 ++ SAM mg++ ++SAM 識(shí)別位點(diǎn)特性 / 46bp回文對稱 / 識(shí)別位點(diǎn) TGAN8TGCT GGATCC AGACC 切割位點(diǎn) 可變，距離 1kb 識(shí)別位點(diǎn)中 距 3?端 2426bp 克隆工作中用途 無 有 無 SAM: 硫一腺苷甲硫氨酸 12 5. II型限制酶的識(shí)別特點(diǎn) A. 識(shí)別順序一般為 47 bp B. 識(shí)別切割位點(diǎn)具有 旋轉(zhuǎn)對稱性 (回文結(jié)構(gòu) ) 4bp HpaⅠ C ? CGG HaeⅢ GG ? CC 5bp Ava Ⅱ G? GWCC EcoRⅡ ? CCWGG 6bp BamHⅠ G ?GATTC
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