血清γ球蛋白的分離純化與鑒定(已修改)
2025-01-16 17:08 本頁面
【正文】 生物化學綜合實驗 血清 γ 球蛋白的分離純化與鑒定 生物化學實驗 CQMU 實驗目的 從人血清中分離純化 γ 球蛋白 實驗方法 一、 鹽析法粗分 γ球蛋白 二、 凝膠過濾方法脫鹽 三、離子交換層析方法純化 γ球蛋白 四 、 醋酸纖維素薄膜電泳法鑒定 γ球蛋白的純度 本實驗 綜合多種實驗技術和方法 ， 共同完成一個實驗目標 ， 所以屬于綜合性實驗 。 血清 γ 球蛋白的分離純化與鑒定 【 實驗目的 】 1． 學習了解凝膠層析和離子交換層析分離純化 蛋白質的基本原理及應用 2．掌握醋酸纖維薄膜電泳技術的原理及應用 蛋白質分離純化與鑒定 【 基本原理 】 蛋白質的分離、純化及鑒定 是研究蛋白質化學性質及生物學功能的重要手段之一。 分離純化蛋白質的方法 是利用不同蛋白質的某些物理、化學性質的不同而建立的方法，其中有鹽析、離子交換、凝膠過濾、親和層析、制備電泳、離心等。在分離純化時，根據(jù)情況選用幾種方法，相互配合才能達到分離純化一種蛋白質的目的。 血清 γ 球蛋白的分離純化與鑒定 【 實驗原理 】 本實驗采用硫酸銨鹽析、葡聚糖凝膠過濾、離子交換層析方法，分離純化血清 γ球蛋白。最后用醋酸纖維素薄膜電泳法鑒定 γ球蛋白的純度。 一、鹽析法粗分離血清 γ 球蛋白 原理 鹽析法 是根據(jù)不同蛋白質在一定濃度的鹽溶液中溶解度度不同，從而分別析出，達到彼此分離的分離方法。 本實驗在半飽和硫酸銨溶液中 ， 清蛋白溶解 ，球蛋白將沉淀析出 ， 經(jīng)離心所得的沉淀即為球蛋白的粗提液 。 鹽析法分離血清球蛋白 硫酸銨是蛋白質鹽析常用的中性鹽 ，在0～ 30℃ 范圍內溶解度變化不大； 25℃ 時飽和溶解度為 mol/l， 0℃ 時飽和溶解度為 mol/l。在這一溶解度范圍內，許多蛋白質和酶都可以析出來。而且硫酸銨價廉易得，分段鹽析效果好，不容易引起蛋白質變性。 具體操作 硫酸銨分段鹽析 ：血清 ml，一邊搖一邊緩慢加入飽和硫酸銨 ml，混勻后室溫下靜置 10分鐘， 3000 rpm離心 10分鐘。用滴管仔細地吸出上清，棄去。沉淀加 mol/l pH 磷酸緩沖液 ml溶解，此為 球蛋白
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