【正文】 安 徽 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 畢 業(yè) 論 文（設(shè)計(jì)） 論文題目 真菌發(fā)酵液對(duì)納塔爾鏈霉菌納他霉素產(chǎn)量的影響 姓 名 學(xué) 號(hào) 院 系 _生命科學(xué)學(xué)院 _ 專 業(yè) 生物技 術(shù) ____ 指導(dǎo)教師 職 稱 講師 __ _ 中國(guó) 合肥 二 o 1 3 年 5 月 目 錄 摘要 1 前言 1 1 實(shí)驗(yàn)材料及方法 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 2 結(jié)果與分析 3 3 N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 3 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 3 酵液加入時(shí)間對(duì) N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 4 酵液加入時(shí)間對(duì) N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 5 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 5 產(chǎn)黃青霉培養(yǎng)時(shí)間對(duì) N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 5 N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 6 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 6 N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 7 發(fā)酵液添加量對(duì) N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 7 發(fā)酵液添加量對(duì) N5菌株納他霉素 產(chǎn)量的影響 8 發(fā)酵液添加量對(duì) N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 8 3 討論與結(jié)論 9 參考文獻(xiàn) 9 致謝 10 英文摘要 10 1 真菌發(fā)酵液對(duì)納塔爾鏈霉菌納他霉素產(chǎn)量的影響 作者：潘 指導(dǎo)教師：曹 （安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 2021級(jí)生物技術(shù) 1班，學(xué)號(hào) 09121012） 摘要：納他霉素是由納塔爾鏈霉菌（ streptomyces natalensis） 、褐黃孢鏈霉菌（ streptomyces gilvosporeus）、恰塔努加鏈霉菌（ streptomyces chattanoogensis）等菌株發(fā)酵而產(chǎn)生的一種廣譜抗真菌劑。因其低毒和極小改變食物本身味道可作為生物防腐劑。本實(shí)驗(yàn)通過在納塔爾鏈霉菌 N5 菌株中添加真菌發(fā)酵液的方法提高菌株納他霉素的產(chǎn)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明產(chǎn)黃青霉、黑曲霉、釀酒酵母三種菌的發(fā)酵液均對(duì)納塔爾鏈霉菌 N5菌株的納他霉素產(chǎn)量有明顯的促進(jìn)作用。 產(chǎn)黃青霉和黑曲霉培養(yǎng) 1d 時(shí)，其發(fā)酵液對(duì) N5 菌株納他霉素的合成促進(jìn)效果最佳，而釀酒酵母在 3d 時(shí)促進(jìn)效 果最好，此時(shí)菌株納他霉素產(chǎn)量較未加真菌發(fā)酵液處理樣品高出約 1 倍。 關(guān)鍵詞：納塔爾鏈霉菌 N5 菌株 納他霉素 產(chǎn)黃青霉 黑曲霉 釀酒酵母 前言 1955 年 struyk 等人首次從南非 natal 州土壤中分離得到納塔爾鏈霉菌（ streptomyces natalensis），并發(fā)現(xiàn)該菌種可以產(chǎn)生一種內(nèi)酯類抗生素， strnyk 將其命名為匹馬菌素（ pimaricin） [1]， 后世界衛(wèi)生組織將其統(tǒng)一命名為納他霉素。該抗生素是 一種二十六元多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要由 納塔爾鏈霉菌（ streptomyces natalensis）、褐黃孢鏈霉菌（ streptomyces gilvosporeus）、恰塔努加鏈霉菌（ streptomyces chattanoogensis）等菌發(fā)酵產(chǎn)生[2]。 納他霉素是一種高效、廣譜的抗真菌劑，能有效抑制霉菌及酵母的生長(zhǎng)，并能有效抑制絲狀真菌中黃曲霉素的形成，可廣泛應(yīng)用于食品保鮮及治療真菌引起的疾病 [3]。 由于其分子上的疏水部分可以范德華力與細(xì)胞質(zhì)膜上的甾醇分子結(jié)合，形成抗生素 － 甾醇復(fù)合物，破壞細(xì)胞質(zhì)膜滲透性，引起菌體細(xì)胞內(nèi)電解質(zhì)滲出，因而可導(dǎo)致菌體死亡，起到抑菌作用 [4]。 納他霉素在室溫下溶解度僅為 30100mg/L，微溶于甲醇，易溶于稀酸、冰醋酸和二甲基甲酰胺，不溶于非極性溶劑 [5]。一般認(rèn)為，由于納他霉素難溶于水和油脂，所以很難被消化和吸收，因此人體攝入的納他霉素大部分會(huì)隨糞便排出 [6]。因?yàn)榧{他霉素具有毒性低和不會(huì)對(duì)食品天然風(fēng)味有較大改變的性質(zhì)，美國(guó)食品及藥物管理局 (FDA)和我國(guó)衛(wèi)生部已經(jīng)先后于 1982 年與 1997 正式批準(zhǔn)納他霉素作為食品添加劑。迄今為止納他霉素已經(jīng)在食品工業(yè)中得到廣泛應(yīng)用 [7]。 由于各種因素的制約，國(guó)內(nèi)納他霉素的主要來源至今仍然是從國(guó)外進(jìn)口。限 制我國(guó)自主生產(chǎn)納他霉素的主要問題是菌株產(chǎn)量偏低，導(dǎo)致納他霉素的生產(chǎn)成本過高。這已成為急需解決的問題。 提高納他霉素產(chǎn)量可以通過添加誘導(dǎo)子的方法。已有報(bào)道稱一些微生物的發(fā)酵代謝物可產(chǎn)生某種誘導(dǎo)子調(diào)節(jié)其它微生物的次級(jí)代謝，促進(jìn)其次級(jí)代謝產(chǎn)物的生成 [8,9,10]。本實(shí)驗(yàn)將產(chǎn)黃青霉、黑曲霉、釀酒酵母的發(fā)酵液分別添加入 納塔爾鏈霉菌（ streptomyces natalensis） 2 發(fā)酵液中，研究不同真菌發(fā)酵液對(duì)該菌株納他霉素產(chǎn)量的影響，以期提高菌株納他霉素產(chǎn)量。 1 實(shí)驗(yàn) 材料與方法 實(shí)驗(yàn)材料 菌種 納塔爾鏈霉菌 N5 菌株由中國(guó)科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院等離子所提供。 黑曲霉、產(chǎn)黃青霉、釀酒酵母由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室保藏。 培養(yǎng)基 種子培養(yǎng)基 (g/L)：葡萄糖 酵母浸膏 蛋白胨 氯化鈉 10， pH 發(fā)酵培養(yǎng)基 (g/L)：葡萄糖 酵母浸膏 大豆蛋白胨 淀粉 40， 實(shí)驗(yàn)方法 納塔爾鏈霉菌的培養(yǎng) 用接種環(huán)刮取斜面菌種一環(huán)于裝有 25mL 種子培養(yǎng)基的 250mL 三角瓶中， 28℃、 200r/min 搖床培養(yǎng)， 40h后以 9%接種量 接種于裝有 30mL 發(fā)酵培養(yǎng)基的 250mL 三角瓶中，28℃、 200r/min 搖床培養(yǎng) 4d。 真菌發(fā)酵液的制備 將產(chǎn)黃青霉、黑曲霉、釀酒酵母分別接種于裝有 100mL 發(fā)酵培養(yǎng)基的 250mL 三角瓶中，28℃、 150r/min 搖床培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，用八層紗布過濾，再在 10000r/min 下離心 15min，取上清液進(jìn)行微孔濾膜過濾即可得到無菌的真菌發(fā)酵液。 納他霉素產(chǎn)量的測(cè)定 稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)樣品，溶于 5%冰乙酸的甲醇溶液中，使納他霉素濃度分別為 1mg/L、2mg/L、 3mg/L、 4mg/L、 5mg/L、 6mg/L、 7mg/L、 8mg/L，用紫外分光光度計(jì)測(cè)其在 303nm處的 OD 值，以納他霉素濃度為橫坐標(biāo)， OD303 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 取 N5 菌株發(fā)酵液 于 5%冰乙酸的甲醇溶液中。在震蕩器上震蕩 5min 后 10000r/min 離心15min。取上清液用紫外分光光度計(jì)測(cè)量 303nm 波長(zhǎng)下的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算納他霉素產(chǎn)量。 真菌發(fā)酵液添加時(shí)間對(duì)納他霉素產(chǎn)量的影響 將產(chǎn)黃青霉、黑曲霉、釀酒酵母培養(yǎng) 3d 后分別以 5%接種量接種于納塔爾鏈霉菌 N5 菌株發(fā)酵液中，接種時(shí)間分別 為 0h、 12h、 24h、 36h、 48h、 60h、 72h，每個(gè)處理重復(fù) 3 次，