【正文】 并以不添加真菌發(fā)酵液的處理為對照。培養(yǎng) 4d 后測定菌株納他霉素產(chǎn)量。確定真菌發(fā)酵液最適添加時間。 真菌發(fā)酵時間對納他霉素產(chǎn)量的影響 分別在產(chǎn)黃青霉、黑曲霉、釀酒酵母培養(yǎng) 1d、 2d、 3d 時取樣，制備無菌發(fā)酵液。將培養(yǎng)不同時間的真菌發(fā)酵液以 5%接種量加入培養(yǎng) 12h的納塔爾鏈霉菌 N5菌株發(fā)酵培養(yǎng)液中，每個處理重復(fù) 3 次，并以不添加真菌發(fā)酵液的處理為對照。繼續(xù)培養(yǎng) 84h后測定菌株納他霉 3 素產(chǎn)量。確定 3 種真菌的最佳發(fā)酵時間。 真菌發(fā)酵液添加量對納他霉素產(chǎn)量的影響 將產(chǎn)黃青霉、黑曲霉培養(yǎng) 1d， 釀酒酵母培養(yǎng) 3d，制備 無菌發(fā)酵液，并分別以 1% 、 2% 、5% 、 8% 、 10% 、 15% 、 20%的添加量加入到培養(yǎng) 12h 的納塔爾鏈霉菌 N5菌株發(fā)酵培養(yǎng)液中，每個處理重復(fù) 3 次并以不添加真菌發(fā)酵液的處理為對照。培繼續(xù)培養(yǎng) 84h 后測定菌株納他霉素產(chǎn)量。確定 3 種真菌的最佳發(fā)酵時間。 2．結(jié)果及分析 納他霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 以納他霉素濃度為橫坐標(biāo)， OD303 值為縱坐標(biāo)繪制納他霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖 1。由圖 1可看出納他霉素濃度與 OD303值呈線 性相關(guān)，且 R2= 線性較好。因此可通過此標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 x=（ y— )/ 計算納他霉素產(chǎn)量。 y = 489 x + 065R2 = 988010 1 2 3 4 5 6 7納他霉素濃度（ m g / L ）OD303值 圖 1 納他霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線 Fig1 The standard curve of natamyctn 發(fā)酵液加入時間對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 產(chǎn)黃青霉發(fā)酵液加入時間對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 將產(chǎn)黃青霉發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行適當(dāng)處理后接種于培養(yǎng)不同時間的納塔爾鏈霉菌 N5 菌株發(fā)酵液中，繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)菌株培養(yǎng) 4d 時用紫外分光光度法測定納他霉素產(chǎn)量，結(jié)果如圖 2 所示。由圖 2可看 出產(chǎn)黃青霉發(fā)酵液對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量有明顯的促進(jìn)作用 ，當(dāng)在發(fā)酵培養(yǎng) 12h 時添加效果最佳，此時菌株納他霉素產(chǎn)量達(dá) ，較對照提高 ％。 4 01CK 0h 12h 24h 36h 48h 60h 72h納他霉素產(chǎn)量（gL1） 圖 2 產(chǎn)黃青霉發(fā)酵液添加時間對納他霉素產(chǎn)量的影響 Fig 2 Effects of addition time of fermentation broth of Penicillium chrysogenum on the natamycin production of N5 strain 黑曲霉發(fā) 酵液加入時 間對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 將培養(yǎng) 3d 的黑曲霉發(fā)酵培養(yǎng)液適當(dāng)處理后于不同時間添加入 N5 菌株發(fā)酵培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)菌株培養(yǎng) 4d 時測定納他霉素產(chǎn)量，結(jié)果見圖 3。從圖 3 中可以看出黑曲霉發(fā)酵液對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的提高有顯著的促進(jìn)作用 。當(dāng)在發(fā)酵培養(yǎng) 12h 時添加效果最佳，此時菌株納他霉素產(chǎn)量達(dá) ，較對照提高 ％。 01CK 0h 12h 24h 36h 48h 60h 72h納他霉素產(chǎn)量（gL1） 圖 3 黑曲霉發(fā)酵液添加時間對納他霉素產(chǎn)量的影響 Fig 3 Effects of addition time of fermentation broth of Aspergillus Niger on the natamycin production of N5 strain 5 釀酒酵母發(fā) 酵液加入時間對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 釀酒酵母發(fā) 酵液加入時間對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響見圖 4。由圖可見，釀酒酵母發(fā)酵液也可明顯促進(jìn) N5 菌株納他霉素的合成，最適接入時間也是菌株培養(yǎng)的 12h。 01CK 0h 12h 24h 36h 48h 60h 72h納他霉素產(chǎn)量（gL1） 圖 4 釀酒酵母發(fā)酵液添加時間對納他霉素產(chǎn)量的影響 Fig 4 Effects of addition time of fermentation broth of Saccharomyces cerevisiae on the natamycin production of N5 strain 真菌培養(yǎng)時間對 N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 產(chǎn)黃青霉培養(yǎng)時間對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 將分別培養(yǎng) 1d、 2d、 3d 的 產(chǎn)黃青霉發(fā)酵液進(jìn)行適當(dāng)處理，添加至培養(yǎng) 12h 的 N5 菌株發(fā)酵培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng) 84h后測定菌株納他霉素產(chǎn)量，結(jié)果如圖 5 所示。由圖 5可以看出培養(yǎng) 1d 的產(chǎn)黃青霉發(fā)酵液對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的促進(jìn)作用最顯著。隨著產(chǎn)黃青霉培養(yǎng)時間的延長，發(fā)酵液 對 N5 納他霉素產(chǎn)量的促進(jìn)作用呈下降趨勢。因此，產(chǎn)黃青霉的最佳培養(yǎng)時間為 1d。 6 圖 5 產(chǎn)黃青霉培養(yǎng)時間對納他霉素產(chǎn)量的影響 Fig 5 Effects of culture time of Penicillium chrysogenum on the natamycin production of N5 strain 黑曲霉培養(yǎng)時間對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 將培養(yǎng)不同時間的 黑曲霉發(fā)酵液添加入 N5菌株發(fā)酵液中，培養(yǎng)后測定納他霉素產(chǎn)量，結(jié)果見圖 6。由圖 6可以看出當(dāng)在 N5菌株發(fā)酵液中添加培養(yǎng) 1d的黑曲霉發(fā)酵液時，納他霉素產(chǎn)量最高，因此，黑曲霉的最佳培養(yǎng)時間確定為 1d。 圖 6 黑曲霉培養(yǎng)時間對納他霉素產(chǎn)量的影響 Fig 6 Effects of culture time of Aspergillus Niger on the natamycin production of N5 strain 釀酒酵母培養(yǎng)時間對 N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 釀酒酵母培養(yǎng)時間對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響如圖 7 所示。由圖 7 可見，當(dāng)在 N5菌株發(fā)酵液中添加培養(yǎng) 3d 的釀酒酵母發(fā)酵液時，納他霉素產(chǎn)量最高，因此， 釀酒酵母的最佳培養(yǎng)時間確定為 3d。 7 圖 7 釀酒酵母培養(yǎng)時間對納他霉素產(chǎn)量的影響 Fig 7 Effects of culture time of Saccharomyces cerevisiae on the natamycin production of N5 strain 真菌 發(fā)酵液添加量對 N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 發(fā)酵液添加量對 N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 將培養(yǎng) 1d 的產(chǎn)黃青霉發(fā)酵液處理后以不同添加量添加于培養(yǎng) 12h 的納塔爾鏈霉菌 N5菌株發(fā)酵培養(yǎng)液中， 于 28℃、 200r/min 條件下繼續(xù)培養(yǎng) 84h，測定納他霉素產(chǎn)量。以產(chǎn)黃青霉發(fā)酵液添加量為橫坐標(biāo)，納他霉素產(chǎn)量為縱坐標(biāo)做圖，見圖 8。從圖 8中可以添加 5％的產(chǎn)黃青霉發(fā)酵液對 N5 菌株納他霉素的積累效果最顯著，此時納他霉素產(chǎn)量達(dá) ，較對照提高 %。 01CK 1% 2% 5% 8% 10% 15% 20%納他霉素產(chǎn)量（gL1） 圖 8 產(chǎn)黃青霉發(fā)酵液添加量對納他霉素產(chǎn)量的影響的影響 Fig 8 Effects of addition amount of Penicillium chrysogenum fermentation broth on the natamycin production of N5 strain 8 黑曲霉 發(fā)酵液添加量對 N5 菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 將培養(yǎng) 1d的黑曲霉發(fā)酵液處理后以不同添加量添加于培養(yǎng) 12h的納塔爾鏈霉菌 N5菌株發(fā)酵培養(yǎng)液中， 于 28℃、 200r/min 條件下繼續(xù)培養(yǎng) 84h，測定納他霉素產(chǎn)量結(jié)果如圖 8 所示。由圖可看出 5％的黑曲霉發(fā)酵液對 N5 菌株納他霉素的積累效果最佳，因此，黑曲霉發(fā)酵液的最適添加量確定為 5％。 01CK 1% 2% 5% 8% 10% 15% 20%納他霉素產(chǎn)量（gL1） 圖 9 黑曲霉發(fā)酵液添加量對納他霉素產(chǎn)量的影響的影響 Fig 9 Effects of addition amount of Aspergillus Niger fermentation broth on the natamycin production of N5 strain 釀酒酵母 發(fā)酵液添加量對 N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響 釀酒酵母 發(fā)酵液添加量對 N5菌株納他霉素產(chǎn)量的影響見圖 10。 從圖 10中可以看出 5％的釀酒酵母發(fā)酵液對 N5菌株納他霉素的積累效果最佳，因此，黑曲霉發(fā)酵液的最適添加量確定為 5％。 9 01CK 1% 2% 5% 8% 10% 15% 20%納他霉素產(chǎn)量（gL1） 圖 10 釀酒酵母發(fā)酵液添加量對納他霉素產(chǎn)量的影響的影響 Fig 10 Effects of addition amount of Saccharomyces cerevisiae fermentation broth on the natamycin production of N5 strain 3 討論與結(jié)論 隨著人們對健康、安全問題的日益關(guān)注，食品安全問題越來越受到人們的重視，化學(xué)防腐劑的缺點逐漸暴露，納他霉素受到人們的青睞。 納他霉素是和乳酸鏈球菌素并列的僅有的兩種生物防腐劑，其具有毒性低且不會造成食品風(fēng)味巨大改變的特性，是一種極具有使用、生產(chǎn)價值的抗生素。但納他霉素產(chǎn)生菌株產(chǎn)量不高一直是 我國納他霉素自主生產(chǎn)的瓶頸，過低的單株產(chǎn)量會使生產(chǎn)成本過高而不利于工廠生產(chǎn)。本實驗將產(chǎn)黃青霉、黑曲霉、釀酒酵母發(fā)酵液添加入納塔爾鏈霉菌 N5菌株發(fā)酵液中，研究這